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Radiación física y química 134 (2017) 1–7

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Radiación Física y Química

revista Página de inicio: www.elsevier.com/locate/radphyschem

Apósitos para heridas de hidrogel que contienen quitosano preparados mediante técnica de
radiación

Wiktoria Mozalewskaa, Renata Czechowska Biskupa,B, Alicja K. Olejnika,B, Radoslaw A.

Wacha,B,⁎, Piotr Ulanorteesquía,B, Janusz M.Rosiaka,B
a Instituto de Química de Radiación Aplicada, Facultad de Química, Universidad Tecnológica de Lodz, Wroblewskiego 15, 93-590 Lodz, Polonia
B BioMatGel, Pienista 41F/11, 94-109 Lodz, Polonia

INFORMACIÓN DEL ARTÍCULO ABSTRACTO

Palabras clave: El objetivo del estudio era desarrollar un apósito antimicrobiano de hidrogel para heridas mediante la reticulación de
Apósito de hidrogel polímeros hidrofílicos iniciada por radiación, es decir, mediante una tecnología bien establecida que comprende la fabricación
Quitosano de gel y su esterilización en un solo proceso. El enfoque incluía la mezcla de quitosano de peso molecular relativamente bajo
Síntesis de radiación
disuelto en ácido láctico (LA) en los componentes regulares iniciales del apósito de hidrogel convencional basado en poli(N-
Ácido láctico
vinilpirrolidona) (PVP) y agar. El peso molecular del quitosano fue regulado por la degradación iniciada por radiación en el
reticulación
rango de 39–132 kg mol−1. La concentración total óptima de LA en el apósito de hidrogel resultante se evaluó como 0,05 mol
JcJ
dm−3, eso es ca. 0,5%. La presencia de LA en el sistema influyó en la radiación esencial y los parámetros tecnológicos de la
fabricación de hidrogel. La temperatura de fraguado de la mezcla previa al hidrogel, resultante de la capacidad de
coagulación del agar, se redujo con la concentración de LA, pero permaneció significativamente por encima de la temperatura
ambiente. Se disolvió efectivamente 0,5% de quitosano en solución acuosa de ácido láctico debido a su pH (inferior a 5,5). Los
parámetros de radiación del entrecruzamiento de PVP en presencia de LA, determinados con la ecuación generalizada de
Charlesby-Pinner, se reflejaron en una ligera reducción de la fracción de gel máxima y un aumento en la dosis de gelificación y
en el factor que compara los rendimientos de la escisión con el entrecruzamiento. Sin embargo, las características
esencialmente físicas del hidrogel no se vieron afectadas, excepto por una capacidad de absorción de agua algo mayor, lo que
a su vez mejora la funcionalidad del vendaje ya que el exudado extenso de la herida se puede absorber de manera eficiente.
Los estudios microbiológicos preliminares mostraron el carácter antimicrobiano del hidrogel que contiene quitosano frente a
la cepa bacteriana Gram-positiva.

1. Introducción
Los hidrogeles son sistemas de dos o varios componentes de cadenas de
polímeros reticulados y agua o un medio acuoso que llena los vacíos de la
red (Hoffmann, 2002; Peppas y Mikos, 1986). Tales redes poliméricas
tridimensionales altamente hidrófilas han encontrado una serie de
aplicaciones en el campo biomédico. Los apósitos para heridas de hidrogel,
cuya tecnología de fabricación mediante método de radiación fue inventada
por Rosiak et al. (Rosiak et al., 1989), son adecuados para curar daños
severos y permanentes en la piel, como quemaduras, escaras, úlceras en la
piel, así como heridas postoperatorias regulares. Un apósito de hidrogel
proporciona un ambiente húmedo a la herida, absorbe los fluidos corporales
y al mismo tiempo previene su pérdida excesiva, siendo permeable al
oxígeno, además de aislar la herida del ambiente externo (para evitar una
contaminación adicional). Además, el hidrogel no se adhiere a la herida, lo
que facilita el cambio del apósito.
mesa y sin dolor para el paciente, sin destrucción de la epidermis recién
formada. Además, su transparencia óptica permite el control continuo del
estado de la herida debajo sin quitarla. El apósito para heridas de hidrogel
es mecánicamente duradero y elástico, por lo que se adapta fácilmente a la
forma de una parte del cuerpo en particular. En la tecnología mencionada, la
radiación de haz de electrones con 25 kGy (dosis de esterilización validada)
se utiliza para la reticulación del componente principal, originalmente poli(N-
vinilpirrolidona) (PVP), y simultáneamente proporciona esterilidad al
producto en un solo paso de procesamiento. Esta ventajosa tecnología de
fabricación de hidrogel por medio de radiación ionizante ha sido adaptada
para la reticulación de varios sistemas poliméricos (Czechowska-Biskup et
al., 2016; Nho et al., 2004; Özyürek et al., 2002; Parque et al., 2004; Sen et al.,
1998; TomiC et al., 2007).
El apósito para heridas de hidrogel, en su forma original, no contiene
sustancias bioactivas, por lo que la incorporación de partículas con bioactividad,
por ejemplo, nanoplata o polímeros naturales, puede ampliar el área de su

⁎ Autor correspondiente.
Dirección de correo electrónico: wach@mitr.p.lodz.pl (RA Wach).

http://dx.doi.org/10.1016/j.radphyschem.2017.01.003
Recibido el 28 de octubre de 2016; Recibido en forma revisada el 5 de enero de 2017; Aceptado el 9 de enero de 2017 Disponible
en línea el 10 de enero de 2017
0969-806X/ © 2017 Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados.
W.Mozalewska et al.
aplicaciones, o hacer su uso más efectivo. El quitosano, reconocido como
polisacárido antimicrobiano, parece ser un aditivo potencial que proporciona un
valor añadido a los apósitos para heridas de hidrogel habituales. El quitosano es
un copolímero lineal que comprende N-acetil-D-glucosamina y D-fracciones de
glucosamina conectadas por enlaces β-1,4-glucosídicos (Muzarelli, 1977). Se
obtiene por N-desacetilación alcalina de la quitina, cuya fuente principal son las
conchas de crustáceos, como gambas, krill, langostas o cangrejos. El peso
molecular y el grado de desacetilación (DDA) del quitosano resultante están
controlados por la fuente de quitina y las condiciones del proceso de
desacetilación. La DDA se define como un porcentaje molar promedio de unidades
de glucosamina en una macromolécula. El origen de la quitina, la DDA del
quitosano y su peso molecular influyen en las propiedades físicas, químicas y
biológicas del quitosano, por ejemplo, la solubilidad o la biofuncionalidad.
El mecanismo de la actividad antibacteriana del quitosano no es
sencillo. Hay varias teorías y la literatura describe el quitosano más
como un polisacárido bacteriostático que bactericida (Goy et al., 2009;
Raafat et al., 2008). Uno de los enfoques afirma
que este policatión (–NH + 3 ) interactúa con grupos cargados negativamente
en la membrana celular de las bacterias (específicamente con el grupo fosfato
aniónico de los fosfolípidos), alterando su permeabilidad, lo que a su vez dificulta
el crecimiento bacteriano (Chung y Chen, 2008). Por lo tanto, el alto grado de
desacetilación del quitosano es ventajoso para su actividad antibacteriana, debido
al mayor número de grupos amino iónicos. La actividad biológica del quitosano
depende también de su peso molecular, sin embargo, no existe una visión
explícita en la literatura sobre el peso molecular del quitosano que garantice la
mayor actividad antibacteriana. Se cree que el quitosano de alto peso molecular (>
200 kg mol−1) tiene la actividad antibacteriana más baja. Las cadenas más cortas
tienen una mayor movilidad y, cuando se combinan con la conformación lineal (la
naturaleza del poliión), permiten una interacción eficaz con la superficie de la
membrana celular bacteriana (Croisier y Jerome, 2013; Goy et al., 2009).
El objetivo de este estudio fue introducir quitosano en apósitos de
hidrogel para heridas de la composición regular, que se basa en PVP y agar (
Rosiak et al., 1995). El enfoque implicó la mezcla de quitosano disuelto en
ácido láctico (LA) natural a la composición original del apósito antes de la
irradiación. La influencia de la composición del hidrogel en términos de
quitosano y concentración de LA, en la solidificación del gel físico antes de la
reticulación iniciada por radiación, y en las propiedades finales del hidrogel
fue objeto de evaluación. Las propiedades antimicrobianas de los hidrogeles
que contienen quitosano se probaron preliminarmente contra cepas de
bacterias seleccionadas.
2. Experimental
2.1. Preparación de soluciones de quitosano en ácido láctico
Para examinar la solubilidad del quitosano en ácido láctico (LA),
quitosano de grado médico (Heppe Medical Chitosan GmbH) de peso
molecular promedio en el rango de 80–200 kg mol−1 y grado de
desacetilación 90,2% (en concentraciones de 0,5% y 1,0% p/v) en
soluciones acuosas de D,L-ácido láctico (grado analítico, POCH) en
concentraciones de 0,01, 0,05, 0,10, 0,50, 1,00 mol dm−3. Las muestras
se mezclaron durante 24 h a temperatura ambiente y se evaluó la
solubilidad del quitosano. El pH de las soluciones de LA se determinó
utilizando un medidor de pH (Metrohm).
2.2. Mediciones reológicas
Para evaluar la temperatura de congelación de las soluciones acuosas de agar
(forma geles físicos al bajar la temperatura) en función de la concentración de LA,
se realizaron mediciones reológicas utilizando un reómetro rotacional con sensor
de placas paralelas (Rotovisco RT20, Thermo Scientific, Haake). Las muestras se
colocaron en el espacio entre una placa estacionaria plana y la placa giratoria
paralela. La viscosidad dinámica se midió en un rango de temperaturas de 15 a 60
°C en función de la velocidad de cizallamiento (curvas de flujo) y, posteriormente,
se registró mediante software RheoWin.
2
Radiación física y química 134 (2017) 1–7
mercancía. El modelo reológico de Cross (Cruz, 1965) se empleó para ajustar los
datos experimentales.
2.3. Reducción del peso molecular del quitosano por radiación
Con el fin de obtener quitosano de menor peso molecular, la
degradación del quitosano se realizó por el método de radiación (ulanorte
esquí et al., 1999). El quitosano en estado sólido se irradió en ampollas de
vidrio a temperatura ambiente, con dosis de 5, 10, 25 y 50 kGy. El haz de
electrones (EB) del acelerador lineal (ELU-6, Eksma) que emite pulsos de
electrones de 6 MeV a una tasa de repetición de 20 Hz y una duración de
pulso de 4 µs se empleó para todas las acciones de irradiación dentro de los
estudios actuales. Se utilizó dosimetría de alanina (ISO/ASTM 51607:2013), y
la tasa de dosis promedio fue igual a 6,7 kGy min−1.
Los pesos moleculares promedio de viscosidad (METROv) de quitosano
no irradiado e irradiado se determinaron mediante un viscosímetro
Ubbelohde (configuración AVS-370 Schott Gerate). El solvente del quitosano
fue la mezcla de 0.2 mol dm−3 CH3COOH (80 % grado analítico, Chemland) /
0,15 mol dm−3 CH3COONH4 (grado analítico, Chempur), y las mediciones de
viscosidad se realizaron a 25,0 ± 0,1 °C. Los datos fueron recolectados y
analizados utilizando el software WinVisco. La viscosidad intrínseca se
determinó a partir de los tiempos de flujo de las soluciones de disolvente y
quitosano de una serie de concentraciones.METROw se calculó utilizando la
ecuación de Mark-Houwink:
η ] = kilómetrosv α
w (1)
donde ηw es la viscosidad intrínseca de la solución [dm3 gramo−1], k, y α son los
coeficientes de Mark-Houwink que dependen del sistema polímero-disolvente
específico y la temperatura de medición. Para quitosano de 90.2% DDA, en las
condiciones experimentales aplicadas, los coeficientes de Mark-Houwink
determinados experimentalmente sobre la base de series de muestras de
quitosano de pesos moleculares promedio en peso específico, fueron K =7.68×10−2
cm3 gramo−1, α=0.748 (Lamarque et al., 2005).
La concentración de roturas de cadena (pags) en quitosano irradiado se
determinaron utilizando la ecuación. (2) (Charlesby, 1960; Schnabel, 1981).
− 1)
pags = 2 × (METRO
w −1 – METROw0 (2)
donde: METROw0 y METROw son pesos moleculares promedio en peso [kg mol−1]
del polímero original y del polímero después de la irradiación, respectivamente. A
los efectos de este cálculo se supuso queMETROw0=Mν0, METROw=Mv
y que no tienen lugar reacciones de entrecruzamiento.
2.4. Irradiación de PVP en soluciones acuosas de ácido láctico
Para investigar la influencia de LA en la reticulación iniciada por
radiación de poli(N-vinilpirrolidona) (PVP, Kollidon 90 F, BASF)
soluciones acuosas de PVP al 10 % p/v con 0,05, 0,10, 0,50 y 1,00 mol
dm−3 LA estaban preparados. Las soluciones (2 ml) selladas en ampollas
de vidrio se irradiaron con EB en el rango de dosis de 5 a 30 kGy.
2.5. Síntesis por radiación de apósitos de hidrogel que contienen quitosano
Soluciones acuosas que comprenden 10 % p/v de PVP, 1 % p/v de agar y 0,5 %
p/v de quitosano (pesos moleculares promedio de 39 o 132 kg mol−1) disuelto en
ácido láctico (concentración de LA de 0,05 mol dm−3) se aplicaron para el
procedimiento de fabricación de apósitos para heridas de hidrogel. Se vertieron
soluciones calientes de polímeros en formas que dieron la forma final de apósitos
de hidrogel y, después de la congelación, se sellaron en bolsas de polietileno. Las
muestras fueron irradiadas por EB con 25 kGy.
2.6. Análisis sol-gel
Para determinar los parámetros de formación de gel de radiación en
solución acuosa de PVP con contenido variable de LA, se realizó el análisis
sol-gel. Las muestras irradiadas se equilibraron en agua desionizada,
W.Mozalewska et al.
agua intercambiada con frecuencia (Micropure, TKA) a 25 ° C, durante un período
de hasta cuatro semanas para alcanzar el equilibrio. Luego se liofilizaron
hidrogeles hinchados de peso constante (Freezone 6, Labconco). El grado de
equilibrio de la hinchazón (EDS) y la fracción de gel (novia- insoluble, parte
reticulada) se calcularon posteriormente utilizando las Ecs. (3) y (4),
respectivamente.
metros − metroD
EDS =
metroD
metroD 100%
F=
metro
donde: metros y metroD son los pesos de los geles hinchados y secos [g],
respectivamente, y metro es la masa inicial de polímero (PVP) [g]. La dosis de
gelificación y la relación entre el rendimiento de radiación de la escisión y el
rendimiento de radiación de la reticulación se determinaron con el software
GelSol95 utilizando la ecuación generalizada de Charlesby-Pinner formulada por
Charlesby y Rosiak.(5) (Olejniczak et al., 1991).
pags⎛ pags ⎞⎛ D + D ⎞
s+s= 0+ ⎜⎜2−
gramo ⎟
0 ⎟⎟⎜ v
q0 ⎝ q ⎠⎝ Dv +
0
D⎠
donde: s es la fracción soluble del polímero (sol, s=1 - novia/100%), pags0 - número
promedio de escisiones de la cadena principal por unidad de monómero y por unidad de
dosis, q0 - proporción de unidades de monómero entrecruzadas por unidad de dosis, D -
dosis de irradiación, Dgramo - dosis de gelificación (la dosis a la que cada cadena individual
debe conectarse estadísticamente con otras a través de un enlace de entrecruzamiento)
– en términos prácticos, la dosis a la que se crea la primera fracción insoluble de
gel), Dv - dosis virtual (la dosis cuya suma o resta de la dosis de irradiación real
teóricamente podría transformar la distribución de masa molecular real del
polímero inicial en una distribución de masa gaussiana, es decir, a METROw/
METROnorte =2).
Se aplicó un método alternativo de análisis de gel-sol para apósitos de
hidrogel que contenían quitosano. Los hidrogeles se esterilizaron en autoclave
(SterilClave 24 BHD Cominox) a una temperatura de 121 °C y a una presión de 2,1
× 105 Pa durante 15 min en agua desionizada. Luego, las muestras se sumergieron
en agua durante dos días a 25 °C hasta alcanzar el equilibrio de hinchamiento
(peso constante en pesados consecutivos), y posteriormente se liofilizaron y
pesaron.
2.7. Pruebas antimicrobianas
Para evaluar las propiedades antibacterianas de los apósitos de hidrogel que
contienen quitosano, se aplicó el método de suspensión modificado. Se cortaron
discos de 10 mm de diámetro de los apósitos de hidrogel, ya sea con quitosano o
en su forma original, y se sumergieron en 20 ml de medio líquido con 0,2 ml de
inóculo bacteriano. bacterias grampositivas de estafilococo aureus NCTC 10780
(Mecconti) y bacterias Gram negativas de Escherichia coli NCTC 12923 (Mecconti)
fueron probados. El control negativo estuvo representado por suspensión
bacteriana sin aditivos y el control positivo fue suspensión bacteriana con mezcla
antibiótica de penicilina y estreptomicina (Life Technologies). La absorbancia de las
suspensiones bacterianas se evaluó a 600 nm (JENWAY 6300) después de 24 h de
incubación a 30 °C. Los experimentos microbiológicos se realizaron por triplicado.
Los resultados se analizaron estadsticamente utilizando la prueba de Student no
pareada de dos colas.t- Prueba para determinar las diferencias. La significación de
la diferencia se determinó entre las medias del grupo de prueba de control 1
(apósito de hidrogel regular) y el grupo de prueba 2 (apósito de hidrogel con
quitosano de 39 kg mol).−1, disuelto en LA 0,05 mol dm−3) y también entre el grupo
de prueba de control 1 y el grupo de prueba 3 (apósito de hidrogel con quitosano
de 132 kg mol−1, disuelto en LA 0,05 mol dm−3). El nivel de significación se denotó
como p < 0,05.
3. Resultados y discusión
Los apósitos de hidrogel se utilizan ampliamente para el tratamiento de heridas de
diversos tipos, especialmente para heridas por quemaduras graves y de difícil curación.
Radiación física y química 134 (2017) 1–7
Dado que la cicatrización de heridas tarda al menos una semana, se debe tener en
cuenta el riesgo de infección adicional. El cambio de apósito debe realizarse con
especial cuidado para minimizar la probabilidad de contaminación microbiológica.
Sin embargo, la eliminación total del riesgo nunca es posible y la herida puede
infectarse. Entonces, los vendajes regulares pueden ser insuficientes para suprimir
el crecimiento bacteriano. Así, se propuso la incorporación de compuestos
bactericidas o bacteriostáticos, como por ejemplo nanopartículas de plata o
péptidos (Boonkaew et al., 2014; Salick et al., 2007). El empleo de un polisacárido
(3)
que se sabe que tiene propiedades antimicrobianas puede ser una solución
alternativa. El quitosano, el polisacárido con sus numerosas aplicaciones
(4) relacionadas con la biología, se propone en los estudios actuales. Con el fin de
evaluar su idoneidad para ser incorporado al apósito de hidrogel de composición
estándar, se realizaron varias pruebas, cuyos resultados se presentan a
continuación.
3.1. Solubilidad del quitosano en ácido láctico
El quitosano se convierte en un policatión: la ionización controla su solubilidad
– debe protonarse, por lo que debe disolverse en un disolvente ácido
(5) con pH inferior a pKa de grupos amino de 6.2–7.0 (Muzarelli et al.,
1980; Rinaudo y Domard, 1989; Vårum et al., 1991). Los disolventes del quitosano
suelen ser soluciones acuosas diluidas de ácidos orgánicos (p. ej., ácido acético,
ácido fórmico) o ácidos minerales (p. ej., ácido clorhídrico y ácido nítrico). La
selección de un disolvente adecuado para el quitosano suele estar motivada por la
aplicación anticipada de la solución, por ejemplo, si se van a evaluar las
propiedades físico-químicas del quitosano, o si el quitosano disuelto entrará en
contacto con sistemas biológicos. El ácido láctico (ácido 2-hidroxipropanoico) es el
ácido carboxílico que se encuentra con más frecuencia en la naturaleza, y suL-El
enantiómero se produce todos los días en el cuerpo humano. Es ampliamente
utilizado en cosméticos y medicamentos para aplicaciones tópicas ya que hidrata
la piel, regula el pH o como humectante. Además, LA está en la lista de la FDA y
tiene un estado GRAS (generalmente reconocido como seguro). Las soluciones de
ácido láctico al 1% v/v son seguras para la aplicación en la piel (Al-Shammary et al.,
1993; Reno, 2010). Por lo tanto, se propuso al LA como solvente natural del
quitosano, reduciendo el pH de la solución acuosa de acuerdo a su concentración.
El peso molecular y el grado de desacetilación también influyen en la
solubilidad del quitosano. Cuanto mayor es la DDA, menor es el pKa de grupos
amina, por lo que se requiere un pH más bajo del solvente para la disolución del
quitosano. Con el aumento del peso molecular del quitosano, la solubilidad
disminuye. En los experimentos actuales quitosano de peso molecular inicial de
132 kg mol−1 se empleó, lo que asegura que la solubilidad del polímero de menor
peso molecular en las mismas condiciones de solvente será factible. La solubilidad
del quitosano en la solución de LA y el pH de las soluciones con respecto a la
concentración de LA se presentan entabla 1.
El pH de las soluciones disminuye con un aumento de la concentración de LA, lo que se
correlaciona con la solubilidad del quitosano. La concentración de LA de 0,05 mol dm−3 da como
resultado un pH ligeramente inferior a 4 y permite una disolución de quitosano al 0,5 %. Como el
pH de las soluciones de alrededor de 4 es aceptable, por ejemplo, es seguro para aplicaciones de
tratamiento de heridas, la concentración de LA es de 0,05 mol dm−3 fue considerado como el más
relevante para futuros experimentos.
tabla 1
Solubilidad del quitosano (METROw =132 kg mol−1) en solución acuosa de ácido láctico.
Concentración de LA en agua Concentración de quitosano [%]
[mol dm−3] [% p/v] 1.0 0.5
pH Solubilidad pH Solubilidad
0.01 0.09 5.03 – 4.53 –
0.05 0,45 5.01 – 3.85 +
0.10 0.90 3.71 + 2.90 +
0.50 4.50 2.42 + 2.29 +
1.00 9.01 2.27 + 1.94 +
(+) soluble, (–) insoluble
3
W.Mozalewska et al.
Figura 1. Temperatura de congelación de la solución acuosa de agar al 1% p/v en función de la
concentración de LA. El recuadro muestra la viscosidad dinámica de una solución de agar al 1 % p/v en
presencia de 0,10 mol dm−3 LA en función de la temperatura – Se aplicó el ajuste del modelo cruzado.
* La capacidad de fraguado de la solución de agar se midió en un rango de temperatura de 15 a 60 °C.
3.2. Influencia del ácido láctico en la temperatura de congelación de la
solución de agar
La tecnología de producción de apósitos de hidrogel implica un proceso
termofísico de fraguado de una mezcla de polímeros en agua. El agar forma geles
físicos, por lo que es responsable de la congelación al enfriar la solución. Los
aditivos suelen alterar la temperatura normal de fraguado de la solución, lo que
puede dar lugar a complicaciones inesperadas en el proceso tecnológico. Así, para
determinar la temperatura de congelación de la solución acuosa de agar en
presencia de LA, se examinaron las propiedades reológicas de las muestras. Se
determinó la dependencia de la viscosidad dinámica a diversas temperaturas con
la velocidad de cizallamiento y se extrapoló a cizallamiento cero. La temperatura
de congelación de la solución de agar en función de la concentración de LA se
presenta enFigura 1 junto con cambios ejemplares de la viscosidad dinámica a
tasa de acción cero en función de la temperatura.
La temperatura de congelación de la solución de agar disminuye con el aumento de
la concentración de LA, en comparación con la temperatura de ajuste de 33 a 35 °C del
agar en agua. En el pH ácido del ácido láctico, la hidrólisis ácida del agar podría ocurrir
parcialmente, lo que resultaría en una reducción de la capacidad de fraguado de la
solución. Además, la presencia de protones en el sistema podría interrumpir la formación
de enlaces de hidrogel que es la principal fuerza impulsora de la coagulación. Esta es una
ocurrencia no deseada ya que la formación física del gel es fundamental para el manejo
posterior de la mezcla pregelificada antes de la irradiación. Sin embargo, las soluciones
de agar con 0,05 y 0,10 mol dm−3
LA formó geles físicos por encima de 25 °C. Por lo tanto, la adición de LA a baja
concentración no afectaría la funcionalidad de la mezcla inicial en términos de
capacidad para formar geles físicos a temperatura ambiente.
3.3. Influencia del ácido láctico en el entrecruzamiento de PVP
Influencia del ácido láctico en el entrecruzamiento iniciado por radiación
de PVP, el componente principal del apósito de hidrogel que es responsable
de la formación de la red de gel permanente (los macrorradicales de PVP se
recombinan para formar enlaces intermoleculares) (Rosiak et al., 1995), fue
investigado por análisis sol-gel. Soluciones acuosas de PVP al 10% p/v en
ausencia y presencia de 0,05−1,00 mol dm−3 LA fueron sometidos a radiación
ionizante. El parámetro de fracción de gel (novia) presentado en Figura 2
indica que la formación de geles químicos en soluciones de PVP alcanzó el
90% de fracción insoluble. El GF depende de la concentración de LA, por
ejemplo, 1,00 mol dm−3 LA suprimió totalmente la reticulación de PVP (se
investigaron dosis de irradiación de hasta 30 kGy), mientras que se formó
gel macroscópico a dosis de hasta 30 kGy en soluciones que contenían 0,50
mol dm−3 de Los Ángeles, sin embargo, el novia de solo ca. 25% fue
4
Radiación física y química 134 (2017) 1–7
Figura 2. Fracción de gel (novia) y el grado de equilibrio de la hinchazón (EDS) de solución acuosa
de PVP irradiada por EB en presencia de LA de concentración (mol dm−3) indicado en el gráfico.
adquirido. LA en concentraciones más bajas de 0,05 y 0,10 mol dm−3
influyó algo en el entrecruzamiento de la PVP, el gel se obtuvo a dosis de 7 y
10 kGy, respectivamente. Elnovia aumentó con el aumento de la dosis de
irradiación en todas las formulaciones. En soluciones de PVP con LA en
concentración de 0.05 y 0.10 mol dm−3 el novia fue del 82,8% y 80,2%,
respectivamente a la dosis de 30 kGy.
Las dosis de gelificación (Dgramo) y proporción del rendimiento de radiación de
escisión al rendimiento de radiación de reticulación pags0/q0 se derivaron de
acuerdo con la Ec. (5) de la relación de la fracción de sol en función de la dosis
administrada. Fig. 3. muestra el ejemplo de datos experimentales (solución de PVP
al 10 % con 0,05 mol dm−3 LA) en coordenadas resultantes de la Ec. (5), y los
parámetros de reticulación calculados se presentan en Tabla 2. Proporción del
rendimiento de radiación de la escisión al rendimiento de radiación del parámetro
de reticulación (pags0/q0) cuantifica la relación entre procesos de
entrecruzamiento y degradación. Para las composiciones que formaron una
fracción insoluble, la p0/q0 es menor que 2, por lo que indica que el
entrecruzamiento se produjo simultáneamente con la escisión durante la
irradiación, pero predominó el entrecruzamiento. Sin embargo, la presencia de LA
influyó en el proceso de entrecruzamiento de PVP, lapags0/q0 casi se duplicó con
respecto a la determinada para el sistema sin LA. Esto se reflejó en la fracción de
gel máxima (como se describe anteriormente) y la dosis de gelificación. A mayor
concentración de ácido láctico, mayor fue la dosis de gelificación. Esto, combinado
con la tendencia análoga observada para elpags0/q0 proporción implicaba que la
presencia de LA en el sistema durante la irradiación de hecho dificulta la
reticulación de PVP.
Los valores de las dosis virtuales fueron negativos para los sistemas
investigados (Tabla 2), lo que indica que la distribución inicial de pesos
moleculares de PVP fue más amplia que las descritas por la distribución
gaussiana y la presencia de LA en el sistema significó naturalmente este
efecto.
La radiólisis de LA en solución acuosa procede principalmente a través del
efecto indirecto que involucra productos transitorios de la radiólisis del agua.
W.Mozalewska et al.
Fig. 3. Expresión gráfica de la reticulación de una solución de PVP al 10 % p/v con 0,05 mol dm−3
LA en coordenadas resultó de la ecuación generalizada de Charlesby-Pinner. (5).
Tabla 2
Parámetros de entrecruzamiento de PVP (10% p/v) y sistema acuoso LA irradiado por EB
determinados por Charlesby-Pinner Eq generalizada. (5).
Composición de la mezcla irradiada Parámetros de reticulación
pags0/q0 Dgramo [kGy]
JcJ 0.27 4.44
PVP, LA 0,05 mol dm−3 0,45 6.15
PVP, LA 0,10 mol dm−3 0.43 9.34
Los electrones hidratados no reaccionan directamente con LA (constante de
velocidad baja), además se convierten en átomos de hidrógeno en pH ácido. Los
átomos de hidrógeno y los radicales hidroxilo reaccionan con LA, sin embargo, la
última reacción ocurre con una constante de velocidad más alta de 5.4 × 108
mensaje directo3 mol−1 s−1 en comparación con 2×107mensaje directo3 mol−1 s−1
para átomos de hidrógeno (Martín et al., 2009)). Esas reacciones conducen a la
abstracción de hidrógeno en LA, formando un radical CH centrado en el carbono
terciario3C•(OH) COOH. Posteriormente pueden ocurrir reacciones de dimerización
o desproporción de los radicales formados de LA. Durante la radiólisis de PVP y LA
en ambiente acuoso, este último indudablemente compite con PVP por los
radicales hidroxilo ya que la constante de velocidad de reacción de PVP con el
radical hidroxilo es menor, 2.0 × 108 mensaje directo3 mol−1 s−1 (Rosak y Ulanorte
esquí, 1999) (para un estudio más detallado sobre PVP + •Reacción de OH (ver
Bartoszek et al., 2011)). Cuanto mayor sea la relación LA/PVP, mayor será la
probabilidad de aparición de la reacción radical hidroxilo - LA. Una parte de la
energía entregada al sistema es absorbida por el LA, que no contribuye a la
reticulación, por lo que probablemente disminuya el rendimiento de radiación de
la reticulación de PVP. La concentración de macrorradicales de PVP disminuye y,
en consecuencia, se requiere una dosis mayor para obtener el gel.
La característica principal de un hidrogel es su capacidad para absorber
una gran cantidad de medio acuoso. El grado de equilibrio de la hinchazón,
SED, proporciona información sobre la densidad de reticulación en el gel.
Las redes de PVP formadas en presencia de LA se evaluaron en términos de
su hinchazón (Figura 2). Típicamente para hidrogeles fabricados por técnica
de radiación, laEDS de geles disminuye de forma no lineal con el aumento de
la dosis de irradiación, lo que también se observa en el presente caso. EDS
para hidrogeles de PVP formados en ausencia de LA es el más alto justo
después de la dosis de gelificación, ca. 230 g de agua absorbidos por 1 g de
gel. A mayor densidad de reticulación, menor absorción de agua: la red es
más firme y menos elástica. La presión osmótica debida a la absorción de
agua se compensa rápidamente al disminuir la elasticidad. Por lo tanto, la
EDS disminuido a ca. 30 g/ga la dosis de 30 kGy. Para geles de PVP
formulados en presencia de LA, se puede especular que la densidad de
entrecruzamiento se reduce ya que a la misma dosis de irradiación elEDS es
Radiación física y química 134 (2017) 1–7
Figura 4. Viscosidad-peso molecular promedio y la concentración de escisión de cadena (pags) (recuadro)
de quitosano irradiado en estado sólido por EB.
mayor que para los geles de PVP puros, alcanzó ca. 300 y 500 g/g para
Dv [kGy] hidrogel producido a dosis más bajas de los sistemas que contienen 0,05 y
0,10 mol dm−3 LA, respectivamente. Como se aclaró anteriormente, la
− 2,33
competencia de LA por los radicales hidroxilo disminuye el número de
− 3,98
macrorradicales PVP y, a su vez, reduce la probabilidad de su recombinación
− 6,27
intermolecular para formar enlaces cruzados. Siendo algo superior, si bien
no influye significativamente en las propiedades mecánicas, laEDS de
hidrogeles formulados a partir de una composición que comprende 0,05 mol
dm−3 LA puede ser beneficioso para la absorción eficaz del exudado.
3.4. Reducción del peso molecular del quitosano
Se sabe que la bioactividad del quitosano para ciertas aplicaciones
depende de su peso molecular. Se anticipó que la actividad antimicrobiana
sigue el esquema. Por lo tanto, el quitosano de 132 kg mol inicial−1
el peso molecular se degradó en estado sólido, en atmósfera de aire, por
radiación EB y el peso molecular promedio de viscosidad resultante (METROv) se
presenta en Figura 4. La reducción no lineal del peso molecular se observó con un
aumento de la dosis, pero la concentración efectiva de escisión de cadena fue
directamente proporcional a la dosis de radiación absorbida, como se muestra en
el recuadro paraFigura 4. El rendimiento de radiación determinado de la escisión
fue de 7,2 × 10−7 molJ−1, que es comparable a los valores determinados por otros
autores, es decir, 4,4×10−7 molJ−1 (Ershov et al., 1987), 6,0 × 10−7 molJ−1 (
Czechowska-Biskup et al., 2005). La ligera diferencia del valor obtenido
actualmente puede deberse a numerosos factores, como la fuente de quitina, el
grado de cristalinidad, el grado de desacetilación del quitosano, el contenido de
humedad y las condiciones de irradiación, como la tasa de dosis y la temperatura.
Se evaluaron los valores citados del rendimiento de radiación de la escisión para el
quitosano sometido a radiación gamma (60Co fuente) y también los métodos para
determinar el peso molecular promedio fueron diferentes.
Quitosano de peso molecular reducido de 39 kg mol−1 así como quitosano no
degradado de 132 kg mol−1 fueron seleccionados para ser incorporados en la
composición del vendaje de hidrogel.
3.5. Síntesis de apósitos de hidrogel que contienen quitosano
El análisis de los resultados presentados anteriormente permitió la selección de
composiciones óptimas para la fabricación de apósitos para heridas de hidrogel que
contienen quitosano. La concentración elegida de ácido láctico fue de 0,05 mol dm−3
como proporcionando un pH adecuado (3,85) para disolver completamente
5
W.Mozalewska et al.
Figura 5. Fotografías de apósito de hidrogel en la forma original (a) y con la adición de
quitosano (132 kg mol−1, 0,5% (p/v)) disuelto en LA (b).
0,5% p/v de quitosano de peso molecular de 132 kg mol−1, que también se
requiere para un tratamiento eficaz de la piel. Además, la fracción de gel después
de la irradiación de PVP al 10 % p/v con 0,05 mol dm−3 LA fue ca. 80% y 82% a dosis
de 20 y 30 kGy. Temperatura de congelación de una solución de agar al 1% con
0,05 mol dm−3 LA estaba en el rango de 28 a 33 °C, lo que garantizaba el fraguado
de la mezcla de reacción antes de la reticulación por irradiación.
Apósitos de hidrogel (10 % y 1 % p/v de PVP y agar, respectivamente) que
contienen 0,5 % p/v de quitosano disuelto en LA (0,05 mol dm−3), fueron
sintetizados por la técnica de radiación y esterilizados simultáneamente ya que la
dosis aplicada fue de 25 kGy. Las fotografías de los apósitos de hidrogel obtenidos
se presentan enFigura 5. Los apósitos de hidrogel con quitosano disuelto en
solución de LA no mostraron diferencias en las propiedades físicas en
comparación con el hidrogel de la composición original, excepto una ligera
borrosidad, pero el apósito seguía siendo transparente. Los apósitos de hidrogel
que contenían quitosano disuelto en LA no perdieron la cualidad ventajosa de los
apósitos de hidrogel para heridas en su forma original.
El análisis de gel-sol usando autoclave se realizó para hidrogeles con
adición de quitosano para confirmar la presencia de quitosano en los
apósitos. Las fracciones de gel determinadas fueron aprox. 101% - el valor
de la novia fue superior al 100%, debido a que la masa inicial llevada a
cálculo fue la de solo PVP. Este resultado implica que la estructura del
apósito de hidrogel es duradera y que el quitosano disuelto en LA
permaneció parcialmente en la red de hidrogel. Debido al hecho de que el
autoclave se realizó en agua, el pH ácido del hidrogel con quitosano disuelto
en solución de LA cambió a neutro, por lo que el quitosano podría precipitar
dentro del hidrogel y los agregados quedarían atrapados en la red
polimérica. Sin embargo, este no es el caso en la aplicación real del apósito
de hidrogel (el pH de la mezcla inicial de PVP, agar, quitosano y LA en agua
era de aproximadamente 3,8 – 4,0), que se aplicará a la herida directamente
del paquete.
3.6. Actividad antibacteriana de los apósitos de hidrogel que contienen quitosano
– estudios preliminares
El quitosano de alto grado de desacetilación (quitosano actual de DDA
ca. 90%) posee un alto número de grupos amina, lo que es un factor esencial
en el mecanismo de acción antibacteriano policatiónico. Para dilucidar el
efecto antimicrobiano, se realizó una prueba preliminar de la capacidad del
apósito de hidrogel que contiene quitosano para inhibir el crecimiento de
bacterias grampositivas y gramnegativas utilizando el método de
suspensión modificado. El experimento involucró hidrogeles con quitosano
(0.5% p/v) de dos pesos moleculares disueltos en LA. Los resultados se
presentan enFigura 6.
La suspensión que contenía apósito de hidrogel regular se caracterizó por ca.
15% y 30% de aumento de la densidad óptica (SOBREDOSIS, la medida que refleja
la contaminación del medio con bacterias) para las suspensiones con Escherichia
coli y estafilococo aureus, respectivamente. Obviamente, el crecimiento de
bacterias sin perturbaciones o incluso algo acelerado se debió a la ausencia de un
componente antimicrobiano en el hidrogel, que en sí mismo proporciona un
entorno y soporte adecuados para
6
Radiación física y química 134 (2017) 1–7
Figura 6. Absorbancia (densidad óptica a 600 nm) de suspensión bacteriana en un medio
de crecimiento incubado con apósitos de hidrogel de varias composiciones: 1 - apósito de
hidrogel regular, 2 - apósito de hidrogel con quitosano de 39 kg mol−1 disuelto en LA 0.05
mol dm−3, 3 - apósito de hidrogel con quitosano de 132 kg mol−1 disuelto en LA 0.05 mol
dm−3. K fue la suspensión bacteriana sin aditivos y A fue la suspensión con antibióticos.
Los datos se expresan como la media de las mediciones de tres muestras con la
desviación estándar.*Diferencia significativa con el apósito de hidrogel habitual (grupo 1),
p < 0,05.
desarrollo de microorganismos cuando se colocan en un medio de cultivo.
Además, las bacterias Gram negativasE. coli el crecimiento tampoco fue inhibido
por las muestras que contenían quitosano. Se debe tener en cuenta que, en este
experimento, la presencia de LA en condiciones ácidas no tuvo efecto sobre el
desarrollo bacteriano. La prueba que implicaS. aureus mostró que el crecimiento
de bacterias Gram-positivas se vio obstaculizado en presencia de apósitos de
hidrogel que contenían quitosano, con una diferencia estadísticamente
significativa (< 0,05) en comparación con el apósito de hidrogel original. Estos
resultados iniciales son consistentes con los datos de la literatura que demuestran
que el quitosano suprime el crecimiento de bacterias Gram positivas en mayor
medida que las bacterias Gram negativas (Jeon et al., 2001; No et al., 2002).
Los quitosanos de alto peso molecular muestran menor movilidad (cadenas
más largas) y por lo tanto se consideran menos efectivos en la interacción con la
pared celular bacteriana. En los presentes estudios no se observó el efecto del
peso molecular, probablemente porque el quitosano original ya tenía un peso
molecular relativamente bajo.
4. Conclusiones
Se empleó el método de fabricación de apósitos regulares de
hidrogel con técnica de radiación para formar hidrogeles con quitosano
disuelto en ácido láctico. El LA influyó en la reticulación del componente
principal del apósito de hidrogel, la PVP, es decir, la dosis de
gelificación del sistema irradiado aumentó, mientras que la fracción
máxima de gel se redujo algo, lo que se reflejó en un aumento de la
pags0/q0 (escisión al factor de rendimiento de reticulación) de las
composiciones de hidrogeles que comprenden LA. Sin embargo, a una
concentración de LA más baja, pero suficiente para la disolución del
quitosano, esto no afecta las propiedades físicas, es decir, el
rendimiento funcional del propio apósito de hidrogel, teniendo
también en cuenta la temperatura de congelación de la composición
inicial impulsada por la capacidad del agar para formar un gel físico.
Por lo tanto, se demostró la posibilidad de incorporar quitosano en el
apósito de hidrogel para heridas utilizando la tecnología de radiación
típica de fabricación. Las investigaciones microbiológicas preliminares
mostraron que el crecimiento de bacterias Gram-positivas modelo se
vio obstaculizado en presencia de hidrogel que contenía quitosano
disuelto en LA, en comparación con el apósito de hidrogel normal.
desarrollo propuesto,
W.Mozalewska et al. Radiación física y química 134 (2017) 1–7

infecciones Uno puede anticipar que este valor agregado al apósito de
hidrogel bien establecido contribuirá a su explotación más amplia.
Agradecimientos
Los autores desean agradecer al Dr. M. Kołodziejczyk del Instituto
de Bioquímica Técnica de la Universidad Tecnológica de Lodz por su
cooperación técnica y sus valiosos comentarios sobre los estudios
antibacterianos. Este trabajo ha sido parcialmente financiado por la
Agencia Internacional de Energía Atómica (F23030).
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