UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER

INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA
BIOTRATAMIENTO Y BIORREMEDIACION
(1610927 A)

PROYECTO DE AULA
BIORREMEDIACIÓN DE SUELO CONTAMINADO CON HIDROCARBUROS

EVALUACIÓN DE TOXICIDAD EMPLEANDO SEMILLAS DE Lactuca sativa (Tarache et al., 2010)

Método suelo directo

1. Colocar en una caja Petri 5g de suelo contaminado y adicionar 5 mL de agua mineral hasta
formar una mezcla homogénea.
2. Colocar papel filtro sobre la muestra de suelo de tal manera que quede completamente
humedecido y sin bolsas de aire.
3. Con ayuda de una pipeta Pasteur colocar cuidadosamente veinte (20) semillas sobre el papel
filtro, dejando suficiente espacio entre ellas para permitir el crecimiento de las raíces.
4. Guardar las cajas Petri dentro de bolsas plásticas herméticas para evitar la pérdida de humedad.
5. Incubar en cámara oscura a temperatura de 22± 2 °C durante 120 h (5 días.) (Las semillas de
lechuga requieren oscuridad para que se produzca la germinación; “semillas fotoblásticas
negativas”).
Debe incluirse un control negativo (suelo no contaminado) con el objeto de evaluar el estado de
germinación de las semillas empleadas y como referencia para determinar el efecto del crudo
sobre el desarrollo de las plántulas. Todos los ensayos deben ser realizados por triplicado.

6. Finalizado el periodo de incubación, cuantificar el número de semillas germinadas y medir

longitud de los hipocótilos de las mismas. Para ello, tomar cada una de las plántulas de la cápsula y
estirar el hipocótilo sobre un papel milimetrado.

Tabla 4. Condiciones de proceso para la evaluación de toxicidad de hidrocarburos en suelos

empleando Lactuca sativa.

Parámetro Condición
Tipo de ensayo Estático
Temperatura 22± 2 °C
Calidad de luz Oscuridad
Cantidad de muestra 5 gramos
Agua de dilución Agua mineral
Biotratamiento y Biorremediación
MSc. Romina Fuentes
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Semillas por réplica 20

Número de réplicas 3
Tiempo de incubación 120 h
Aceptabilidad de los resultados Germinación control negativo (>90%)

Evaluación de índice de germinación (Celis et al., 2006)

El índice de germinación (IG) posee la ventaja de permitir la evaluación de la toxicidad baja (que
afecta el crecimiento del hipocótilo) y la toxicidad pesada que afecta la germinación), a través de
la expresión:

donde, IG es el índice de germinación (%), G es el promedio de las semillas germinadas en la

muestra, Gc es el promedio de las semillas germinadas en el control negativo, L es el promedio de
longitud del hipocótilo en la muestra (mm), y L c es el promedio de longitud del hipocótilo en el
control negativo (mm). Se considera como criterio de germinación la aparición visible de la
radícula.

Figura 3. Esquema de plántulas de Lactuca sativa al finalizar el período de exposición.

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MSc. Romina Fuentes
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REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Celis, J., Sandoval, M., Zagal, E. y Briones M. 2006. Efecto de la adición de biosólidos urbanos y
de salmonicultura sobre la germinación de semillas de lechuga (Lactuca sativa L.) en un suelo
patagónico. J.Soil Sc.Plant. Nutr 6 (3): (13-25).

Tarache, A., Ehrmann, U. y Infante, C. 2010. Evaluación de toxicidad de un crudo liviano en

suelo a través de la aplicación del bioensayo con semillas de lechuga Lactuca sativa L.).
Trabajo dirigido. Universidad Simón Bolívar.

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MSc. Romina Fuentes