Universidad Politécnica de Puebla

Ingeniería en Biotecnología
Ingeniería de Bioprocesos
Práctica:
Determinación de Biomasa
Peso seco
Integrantes:
Melanie Sanchez Montaño
Marian Hidalgo Bueno
Jenny Rivera Márquez
7BB

Noviembre 2021
 Cuantificación de biomasa por peso seco
Introducción
Biomasa es un término general que se refiere a los microorganismos presentes en
un sistema. A la vez también se puede referir como la cantidad de células, de
personas o masa de seres vivos. El objetivo de la biomasa es la reproducción de
células. La determinación de la biomasa es una de las variables más importantes de
un bioproceso ya que su determinación nos lleva a la comprensión de la eficiencia
del mismo. Se trata de una variable clave para establecer las tasas de producción,
de consumo de nutrientes y el cálculo de los balances de masa de cualquier
proceso biológico. Los métodos clásicos de determinación de biomasa son métodos
directos que se basan en el número de células o en el peso celular. Para determinar
la biomasa es necesario calcular el número de células en una determinada muestra.
Esto es importante en ciertas circunstancias; por ejemplo, para determinar la
inocuidad de muchos alimentos o drogas se requiere cuantificar los
microorganismos en esos productos. Los métodos para estimar el número de
microorganismos pueden medir la cantidad de células, la masa celular o la actividad
celular. Los métodos que cuantifican la cantidad de células son útiles principalmente
para enumerar organismos como bacterias o levaduras, mientras que los que miden
la masa y actividad celular pueden utilizarse para todos los microorganismos,
incluidos los hongos filamentosos, en los que es difícil cuantificar las células
individuales.
Medida de biomasa
La medida de la masa de los constituyentes de la célula bacteriana es utilizada
frecuentemente como base para la medida de una actividad metabólica, o de un
constituyente metabólico o químico. Algunos de los métodos para cuantificar la
biomasa son obvios y confiables, pero pueden volverse complicados si se busca
exactitud.
Peso seco
La cantidad total de biomasa presente en una muestra puede medirse en términos
de peso seco por unidad de volumen, ya sea como sólidos en suspensión totales
(SST) o sólidos en suspensión volátiles (SSV). Las células se separan del líquido
bien por centrifugación bien por filtración. Se expresan en.m.g/mL.La principal
desventaja de estas técnicas es que su determinación incluye no sólo
microorganismos activos sino microorganismos muertos, material inerte, polímeros
extracelulares y materia orgánica adsorbida. Además, no puede aplicarse cuando los
sustratos a degradar son insolubles. Los métodos gravimétricos son simples, pero
consumen bastante tiempo y son poco reproducibles. A la vez este método este
método los componentes volátiles de las células pueden perderse en el secado y
puede existir alguna degradación. También la muestra seca puede recobrar
humedad durante el pesado, principalmente si el ambiente con humedad relativa
alta.
Centrifugación.
En el caso de las suspensiones, es decir, partículas muy pequeñas de sólido que
están suspendidas en una fase líquida, podemos forzar la sedimentación de la fase
sólida si centrifugamos la mezcla. Después del centrifugado, las partículas más
pesadas se encontrarán pegadas al fondo del tubo.
Decantación.
Cuando tienes una fase sólida en el fondo de una muestra, como después de una
sedimentación o centrifugación, puedes separar el sobrenadante y el sedimento por
decantación o filtración. Hay dos formas de separar las fases, por filtración (que has
visto antes) o por decantación (como has visto en el vídeo anterior)
MATERIALES Y MÉTODOS
Materiales

• Fermentación de guayaba
• Agua destilada
• 4 Tubos falcon
• 2 Vaso de precipitación de 250 mL
• 4 Charolas de aluminio
• 2 Mecheros con manguera
• 1 Bolsa Ziploc
Equipos

• Centrifugadora con camisa

• Estufa (105°C por 3 horas)
• Balanza electrónica
• Desecador
MATERIALES PARA ESTERILIZACIÓN

• Papel absorbente
• 1 gogles
• Detergente
• Algodón
• 1 escobillón
• 1 encendedor
• 1 franela
• Alcohol
Preparación de charolas de aluminio

• Esterilizar las charolas de aluminio

• Marcar 4 charolas de aluminio
• Pesar las charolas y anotarlo como primer peso
• Colocar las charolas en la estufa a una temperatura de 105 ºC, 20 min como
mínimo.
• Tomar las charolas con pinzas para crisol, trasladar al desecador y dejar enfriar por
15 min como mínimo.
• Pesar nuevamente las charolas y anotar nuevamente el peso de las charolas como
segundo peso
• Pasar nuevamente las charolas a la estufa a una temperatura de 105 ºC, 20 min
• Sacar nuevamente las charolas y trasladar a la desecador por 15 min
 • Pesar las cápsulas y repetir el ciclo estufa-desecador hasta obtener una diferencia
≤ 0.001 g en dos pesadas consecutivas. Registrar como m1 considerando para los
cálculos el último valor de la masa.

Para determinación de Peso Seco

● Tomar 3 muestras de 20 mL de la solución inicial y colocar en tres tubos falcon
previamente pesados.
● Los tubos falcon se llevan a la centrífuga donde se hacen girar a 6500 RPM, por un
tiempo de 10 minutos.
● Con el resultado previamente obtenido de la centrifugación, separar el sobrenadante y
la biomasa por el método de decantación líquida-sólida.
● Colocar la biomasa obtenida por la centrifugación y la decantación en las charolas a
peso constante.
● Introducir al horno a 105 °C la charola con la muestra, durante al menos 1h. Pasar la
cápsula al desecador para llevar a masa constante
● Si al cabo de 1 h aún se observa humedad o líquido en la cápsula, continuar secando en
la estufa.
Cálculos
Diagrama de flujo

Preparación de charolas de
aluminio

Esterilizar Pesar Llevar a la estufa

Anotar Pasar al desecador

Marcar

Pesar Anotar

Pesar las cápsulas y

repetir el ciclo
estufa-desecador
hasta obtener una
diferencia ≤ 0.001 g

Para determinación de peso seco

Muestras de 25ml en tubos Pesar previamente

falcon el tubo

Anotar
Centrifugar

6500rpm 10min

Decantación

Liquido-solido
 Colocar la biomasa en las
Pesar
charolas a peso constante

Llevar al horno 105°C

por 1h

Tabla de pesos

Charolas(g)
1 2.192 2.188 2.187
2 2.211 2.204 2.204
3 2.215 2.203 2.203

Tubos sin muestra(g)

1 12.034 12.036 12.036
2 12.059 12.058 12.058
3 12.092 12.093 12.093
4 12.034 12.035 12.034

Tubos con muestra(g)

1 31.064 30.730 30.730
2 31.623 30.675 30.709
3 31.411 30.745 30.745
4 31.321 30.427 30.753

Tubos con sedimento(g)

1 14.206 14.205 14.206
2 14.059 14.057 14.059
3 14.504 14.504 14.503

Charolas con biomasa (g)

Después de llevar al desecador
1 4.359 2.305 2.303
2 4.204 2.327 2.328
3 4.615 2.370 2.369
Cálculos

Muestra 1.

(4.359𝑔) − (2.187𝑔)
𝒑𝒆𝒔𝒐 𝒔𝒆𝒄𝒐 = = 0.1086𝑔/𝑚𝑙
20𝑚𝑙
Muestra 2.
(4.204𝑔) − (2.204𝑔)
𝒑𝒆𝒔𝒐 𝒔𝒆𝒄𝒐 = = 0.1000𝑔/𝑚𝑙
20𝑚𝑙
Muestra 3.
(4.615𝑔) − (2.203𝑔)
𝒑𝒆𝒔𝒐 𝒔𝒆𝒄𝒐 = = 0.1206𝑔/𝑚𝑙
20𝑚𝑙
Observaciones y conclusiones.
Observaciones:
En la realización de la practica hubo errores como el mal manejo de las charolas para
llevarlas a peso constante.
Conclusiones:
El método de peso seco es fácil de realizar, pero depende de muchos factores del
laboratorio y del manejo de las charolas con las pinzas para llevarlos a peso a constante.
Se logró elaborar y plantear el objetivo propuesto para la técnica de cuantificación
de biomasa propuesto en esta práctica. En la cual se obtuvieron los conocimientos
acerca de la producción de biomasa en una fermentación de guayaba.
Se concluye que mediante el análisis de peso húmedo realizado en las 3 muestras
utilizadas para la técnica, el resultado de la tasa de producción oscila en un rango a
partir de 0.1086g/ml y 0.100 g/ml de biomasa que se encuentra presente. Considerando el
volumen total del tanque en el que se llevó a cabo la fermentación, los valores de
biomasa obtenidos mediante peso húmedo se consideran efectivos.