Protocolo de aislamiento y detección de Vibrio cholerae en

muestras de alimentos (pescado)

Bolaño Belkis1, Dimas Manuel1, Escobar Jaime1, Gómez Maria jose1, López Dariana 1

1- Estudiantes de la universidad popular del cesar del programa de microbiología de la

facultad ciencias de la salud.

RESUMEN
Vibrio cholerae es una bacteria considerada como patógena para el ser humano. Este es el
agente causal del cólera y junto a V. Parahaemolyticus, son responsables de brotes de
gastroenteritis aguda ocasionada por el consumo de mariscos y otros alimentos marinos crudos
o mal cocidos. En esta práctica se determinará la presencia de vibrio cholerae en muestras de
alimentos (pescado). Para esto, se pesaron 25 gr de pescado luego fueron adicionados a un
recipiente de dilución que contiene 225 ml de agua peptonada alcalina con una temperatura de
incubación de 35°C +/-2°C por 18-24 hr. Pasado el tiempo de incubación, sin mezclar el frasco,
se realizo un barrido en la superficie del cultivo con el asa y se sembró en superficie por
agotamiento en agar tiosulfato citrato sales biliares sacarosa (TCBS) con un tiempo de
incubación de 35º + / - 2ºC por 18 – 24 horas. Como resultados obtuvimos que había ausencia
de vibrio cholerae en los 25 gr de muestra de pescado, sin embargo, observamos la presencia
de otro microorganismo que correspondía a una morfología microscópica de cocos Gram
positivos, que probablemente también puede ser causante de daños estocamales.
ABSTRACT
Vibrio cholerae is a bacterium considered pathogenic for humans. This is the causative agent of
cholera and, together with V. parahaemolyticus, is responsible for outbreaks of acute
gastroenteritis caused by the consumption of raw or cooked seafood and other marine foods. In
this practice, the presence of vibrio cholerae in food samples (fish) will be determined. For this,
25 g of fish were weighed and then added to a dilution container containing 225 ml of alkaline
peptone water with an incubation temperature of 35 ° C +/- 2 ° C for 18-24 hr. After the
incubation time, without mixing the flask, a sweep was made on the surface of the culture with
the loop and it was seeded on the surface by exhaustion in agar thiosulfate citrate bile salts
sucrose (TCBS) with an incubation time of 35º + / - 2 ° C for 18-24 hours. As results we
obtained that there was an absence of vibrio cholerae in the 25 gr of fish sample,
however, we observed the presence of another microorganism that corresponded to a
microscopic morphology of Gram-positive cocci, which may also be the cause of
stochamal damage.
INTRODUCCIÓN
El género vibrio está compuesta por más de 35 especies, sin embargo, solo algunas especies son
patógenas para el ser humano; tales como: V. Cholerae, V. Vulnificus y V. Parahaemolyticus.
Los microorganismos pertenecientes a este género, son bacilos gramnegativos, anaerobios
facultativos, cuyo hábitat natural son los ambientes acuáticos y estuarios. Ya que estos
microorganismos requieren de una cantidad considerable de sales, estos ambiental resultan
ideales para su desarrollo. Además, se ha observado que la multiplicación de estos
microorganismos aumenta a medida que la temperatura del agua se eleva, lo que explica, en
parte, el aumento de casos en los meses templados o verano. (Thompson FL, et al; 2004)
Por otro lado, la enfermedad del cólera inicia con la ingestión de agua o alimentos
contaminados, después de superar la barrera ácida del estómago, la bacteria colonizará el
epitelio del intestino delgado, en este proceso intervienen varios factores, como las adhesionas y
la producción de enzimas hidrolíticas, entonces es secretada la toxina colérica por los vibrios
adheridos. Ocasionando la diarrea de tipo secretor que caracteriza al cuadro clínico del cólera,
con la subsecuente pérdida de agua y electrolitos. (Robles EL, et al; 1999)
METODOLOGIA
RESULTADOS

A partir de una muestra de alimento solido se hace el respectivo montaje para determinación de
Vibrio cholerae del cual la siembra en TCBS dio el siguiente resultado en caja:

Este es un medio altamente selectivo para Vibrio spp., por su contenido de sales biliares, inhibe
el crecimiento de las bacterias Gram positivas y otros Gram negativos. Además, contiene
sucrosa (sacarosa) como Carbohidrato fermentable debido a que la mayoría de integrantes del
género Vibrio fermenta este azúcar. El pH alcalino del medio favorece el aislamiento de
V.cholerae. El azul de timol y de bromotimol están incluidos como indicadores de pH.
De acuerdo a el crecimiento colonial de vibrio cholerae en este medio, las colonias típicas son
amarillas, planas o ligeramente convexas. Sin embargo, microorganismos como Sterptococcus
Feacalis y Proteus spp también pueden crecer y presentar estas características coloniales
dificultando así la identificación de vibrio cholerae.
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
Oxidasa: negativo
El citocromo oxidasa es una enzima de la cadena respiratoria perteneciente al grupo de las
Hierro porfirinas. Se encuentra presente en los géneros Pseudomonas, Vibrio, Aeromonas, Etc,
pero no en los miembros de la familia Enterobacteriaceae. Basándonos en lo anterior y teniendo
en cuenta que está prueba dio negativo y la cuál es importante al momento de identificar a
vibrio cholerae en un alimento, podríamos constatar que no se trata de este microorganismo.
Cuerda: negativo
Esta prueba se realiza para diferenciar el género Vibrio de otros géneros como Plesiomonas y
Aeromonas. La actividad lítica del ácido desoxicólico sobre la pared de los Vibrios favorece la
liberación del ADN que al contacto con el ácido desoxicólico forma una suspensión adherente o
mucoide. En nuestro caso no ocurrió tal hecho, por ende, este microorganismo no podría ser del
género vibrio.
Coloración de Gram: cocos Gram positivos
Sabemos que vibrio cholerae en cuanto a la coloración Gram, presenta una forma bacilar y
Gram negativa. De acuerdo a esto con respecto a lo que se observó en la coloración Gram son
cocos Gram positivos, lo cual no es acordé a las características microscópicas para vibrio
cholerae.
REPORTE DE RESULTADOS
Ausencia de vibrio cholerae en 25 gr de muestra.

DISCUSIÓN
Vibrio cholerae es conocida como una bacteria causante de las enfermedades mas antiguas
descritas por el hombre, esta enfermedad es intestinal que ha sido asociada a alimentos de mar
como pescados y mariscos, sin embargo la mayoría de los casos positivos reportados se debe a
la ingesta de aguas contaminadas; incluso mas que los pescados y mariscos, Hernández C, Ulloa
y colaboradores en el año 2005 afirmaron que La multiplicación del microorganismo aumenta a
medida que la temperatura del agua se eleva, lo que explica, en parte, el aumento de casos en los
meses templados, por lo que quizás no es tan común encontrar brotes de Vibrio cholerae en
estos últimos meses del año , sin embargo la muestra estaba contaminada con otro
microorganismo que también puede ser causante de enfermedades transmitidas por alimentos.

CONCLUSION
Luego de los frutos obtenidos después de las observaciones al microscopio, pruebas
bioquímicas y de cuerda y según el resultado se presentó ausencia de Vibrio en 25gr de pescado
que se utilizaron como muestra, pero afirma presencia de otro microorganismo que correspondía
a una morfología microscópica de cocos Gram positivos, que probablemente también puede ser
causante de daños estocamales a quienes se consuma y ser considerado agente causal de una
enfermedad transmitida por alimento no tan letal como lo es considerado el colera cusada por
Vibrio cholerae que ya que es sabido esta es una bacteria halófila capaz de originar
gastroenteritis cuando esta asociada al consumo de pescados y mariscos crudos o poco
cocinados, en particular las ostras, Los alimentos contaminados pueden ocasionar en sus
consumidores diarrea, dolor abdominal, vómitos, fiebre, dolor de cabeza y escalofríos.

BIBLIOGRAFÍAS
Hernández C, Ulloa J, Vergara JA, Espejo R, Cabello F. Vibrio parahaemolyticus
infections and algal intoxications as emergent public health problems in Chile. Rev Méd
Chile 2005; 133: 1081-8.
Robles EL, García ER, Torres LJ. “Toxinas de vibrio cholerae. Una revisión”. Rev.
Me . de patología clínica. 1999; 46(4): 254-259.
Thompson FL, Lida T, Swings J. “Biodiversity of vibrios”. Microbiol Mol Biol Rev.
2004; 68(3): 403-431.