UNIVERSIDAD NACIONAL DEL

CALLAO
FACULTAD DE INGENIERÍA AMBIENTAL Y DE
RECURSOS NATURALES

LABORATORIO N° 3 – MICROSCOPÍA 93G

DOCENTE:
Espinoza Morriberon Dante

INTEGRANTES:
Salas Muñoz Brayan Steve
Luque Vega Flavio Cesar
Ramos Pauccara Erika Rocio
Bautista Melgarejo Ariana Nicole
Vasquez Villajuan Xiomara Loan

Callao – Perú
2020
 RESUMEN

Todos los microorganismos están compuestos de células muy

pequeñas y el biólogo para estudiarlas se ayuda de instrumentos
ópticos de precisión para la observación de sus estructuras y detalles
que no pueden ser percibidos a simple vista. Estos instrumentos
se conocen con el nombre genérico de microscopios. Los
microscopios magnifican la imagen hasta el nivel de la retina y
aumentan nuestra capacidad para ver detalles que de otro modo no
podríamos percibir. En el presente informe se hablará de la
experiencia que se tuvo en el laboratorio donde pudimos
apreciar la importancia del microscopio óptico para reconocer las
diferentes partes que presenta, incluyendo sus funciones, su
correcto uso, cuidado y conservación.
 Introducción
Desde un principio, el avance en los estudios celulares ha estado
determinado en gran medida por nuestra capacidad de observar sus
estructuras, es decir, de ampliarlas para poder observarlas a pesar de su
minúsculo tamaño. Es debido a esto que la microscopía juega un papel
fundamental en la biología celular, al ser el principal método de estudio
de la célula.
Existen diversos tipos de microscopios: óptico, electrónico de barrido y
de transmisión, etc. Nos concentraremos en las partes del microscopio
óptico.
- Ocular: Es el lente que se encuentra cercano al ojo del observador.
Capta y amplía la imagen formada en el objetivo.
- Objetivo: Son los lentes que se encuentran en el revólver. Es el
lente que permite la mayor y regulable ampliación de imagen. Son
considerados los más importantes en la formación de la imagen
microscópica pues determinan el poder de resolución.
- Condensador: Concentra y regula los rayos luminosos.
- Diafragma: Es el regulador de la cantidad de luz que llega al
condensador.
- Foco: Origen de la luz, dirige esta al condensador.
- Tubo óptico: Cilindro mecánico que porta al ocular en un extremo
y a los objetivos en el revólver en el otro.
- Revólver: Sistema rotador que porta a los objetivos de diferentes
aumentos.
- Macro y micrométrico: Tornillos de enfoque. Varían la distancia
entre la platina donde se ubica la muestra y los objetivos en el
revólver. El macrométrico es utilizado para variaciones más
amplias, mientras que el micrométrico para más pequeñas.
 - Platina: Plataforma con orificio central donde se coloca la
preparación (muestra en un portaobjetos). El orificio permite el
paso de luz y posee pinzas para sujetar la preparación en su lugar.

Otros conceptos importantes en microscopía óptica:

Velocidad de la luz en el aire

Índice de refracción: IR=
Velocidad de la luz en el medio

Apertura Numérica (NA): capacidad del objetivo de poder captar los

rayos refractados por las estructuras finas de las cuales está
constituido el objeto que se observa.
Poder de resolución (PR): capacidad de un objetivo de poder
distinguir la distancia mínima que debe existir entre dos puntos del
objeto para que se puedan visualizar como dos puntos separados.
 MATERIALES Y METODOS
Partes de un microscopio

Oculares:
Son los sistemas de lentes más cercanos a la mira del observador. Son cilindros
huecos en la parte superior del microscopio provistos de lentes convergentes.
Dependiendo de si existe uno o dos oculares, los microscopios pueden ser
monoculares o binoculares
Objetivos:
Son las lentes que se regulan mediante el revólver. Son un sistema de lentes
convergentes en las que se pueden acoplar varios objetivos. El acople de los
objetivos se realiza de forma creciente según sus aumentos en el sentido de las
agujas del reloj.
Los objetivos llevan su aumento en un lateral y también están distinguidos por un
anillo coloreado. Algunos de los objetivos no enfocan la preparación en el aire y
necesitan utilizarse con aceite de inmersión.

Fuente de iluminación:
La iluminación está constituida por una lámpara halógena. Dependiendo del tamaño
del microscopio puede tener mayor o menor voltaje.
Los microscopios pequeños más utilizados en laboratorios tienen un voltaje de 12
V. Esta iluminación se encuentra en la base del microscopio. La luz sale de la
bombilla y pasa a un reflector que envía los rayos en dirección a la platina
Diafragma:
También conocido como iris, se encuentra sobre el reflector de la luz. A través de
este se puede regular la intensidad de la luz abriéndolo o cerrándolo.
El pie o base:
Constituye la base del microscopio y su apoyo principal, puede tener distintas
formas, siendo las más habituales rectangulares y con forma de Y.
.
El revólver:
Es una pieza giratoria en la que se enroscan los objetivos. Cuando giramos este
dispositivo, los objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan en posición de
trabajo. Se le llama revolver por el ruido que hace el piñón al encajar en un lugar
fijo.
La columna o brazo:
La columna o el brazo, en algunos casos conocida por asa, es la pieza de la parte
posterior del microscopio. Sujeta al tubo en su parte superior y en la parte inferior se
acopla al pie del aparato.
La platina:
La platina es la pieza metálica plana en la que se coloca la muestra a observar.
Tiene un orificio en el eje óptico del tubo que permite que pase el rayo de luz en
dirección a la muestra.
La platina puede ser fija o giratoria. Si es giratoria, mediante tornillos puede
centrarse o moverse con movimientos circulares.
El tornillo macrométrico:
El dispositivo enganchado a este tornillo hace que el tubo del microscopio se deslice
verticalmente gracias a un sistema de cremallera. Estos movimientos permiten que
se enfoque rápidamente la preparación.
El tornillo micrométrico:
Este mecanismo ayuda a enfocar la muestra con un enfoque exacto y nítido a través
del movimiento casi imperceptible de la platina.
Los movimientos son a través de un tambor que tiene divisiones de 0,001 mm. Y
que también sirve para medir el grosor de los objetos acoplados.

Condensador:
Es un sistema de lentes convergentes que capta los rayos de luz y los concentra en la
muestra proporcionando mayor o menor contraste.
Tiene un regulador para ajustar la condensación a través de un tornillo. La
localización de este tornillo puede variar dependiendo del modelo de microscopio
Pinzas para sujetar el objeto:
Tienen la función de mantener fija la preparación una vez se haya colocado sobre la
platina.
Prisma óptico:
Algunos microscopios incluyen también prismas en su interior para corregir la
dirección de la luz. Por ejemplo, esto es imprescindible en el caso de los
microscopios binoculares, donde un prisma divide el haz de luz proveniente del
objetivo para dirigirlo hacia dos oculares distintos.
 Resultados
Al analizar el microscopio óptico y electrónico obtenemos lo siguiente:

FUNCION DEL MICROSCOPIO OPTICO

Este instrumento ha sido de gran utilidad, sobre todo en los campos de la ciencia en donde
la estructura y la organización microscópica es importante, incorporándose con éxito a
investigaciones dentro del área de la química (en el estudio de cristales), la física (en la
investigación de las propiedades físicas de los materiales), la geología (en el análisis de la
composición mineralógica y textural de las rocas) y, por supuesto, en el campo de la
biología (en el estudio de estructuras microscópicas de la materia viva), por citar algunas
disciplinas de la ciencia.
Hasta ahora se da uso en el laboratorio de histología y anatomía patológica, donde la
microscopía permite determinadas aplicaciones diagnósticas, y donde se pueden observar
numerosas estructuras cristalinas, pigmentos, lípidos, proteínas, depósitos óseos, etcétera.
MICROSCOPIO ELECTRONICO
La potencia amplificadora de un microscopio óptico está limitada por la longitud de onda
de la luz visible. El microscopio electrónico utiliza electrones para iluminar un objeto.
Dado que los electrones tienen una longitud de onda mucho menor que la de la luz pueden
mostrar estructuras mucho más pequeñas.

FUNCION DEL MICROSCOPIO ELECTRONICO

En el estudio de los circuitos integrados se suele utilizar el microscopio electrónico debido
a una curiosa propiedad: Como el campo eléctrico modifica la trayectoria de los electrones,
en un circuito integrado en funcionamiento, visto bajo el microscopio electrónico, se puede
apreciar el potencial al que está cada elemento del circuito. La cristalografía de electrones
es un método utilizado para determinar la disposición de átomos en sólidos a través de un
microscopio electrónico de transmisión. Este método se utiliza en muchas situaciones
donde no se puede usar cristalografía de rayos X 

Microscopio electrónico de transmisión (MET)

Un microscopio de este tipo permite la

observación de muestra en cortes ultrafinos.
Un MET dirige el haz de electrones hacia el
objeto que se desea aumentar. Una parte de
los electrones rebotan o son absorbidos por
el objeto y otros lo atraviesan formando una
imagen aumentada del espécimen. Para
utilizar un MET debe cortarse la muestra en
capas finas, no mayores de un par de miles
de ángstroms. Se coloca una placa
fotográfica o una pantalla fluorescente
detrás del objeto para registrar la imagen
aumentada. Los microscopios electrónicos
de transmisión pueden aumentar un objeto
hasta un millón de veces.

Microscopio electrónico de barrido

Este microscopio crea una imagen ampliada
de la superficie de un objeto. No es necesario
cortar el objeto en capas para observarlo con este
microscopio, sino que puede colocarse en el
microscopio con muy pocos preparativos. Ya
que se explora la superficie de la imagen punto
por punto, al contrario que el de transmisión, que
examina una gran parte de la muestra cada vez. Su funcionamiento se basa en recorrer la
muestra con un haz muy concentrado de electrones, de forma parecida al barrido de un haz
de electrones por la pantalla de una televisión. 
Los microscopios electrónicos de barrido pueden ampliar los objetos 200.000 veces o más.
Este tipo de microscopio es muy útil porque, al contrario que los de transmisión o los
microscopios ópticos, produce imágenes tridimensionales realistas de la superficie del
objeto.

Preparación de muestras
El objetivo de la preparación de muestras es permitir que las estructuras de los materiales se
revelen con suficiente contraste de modo que las características de interés sean descritas,
grabadas y caracterizadas en detalles visibles a una escala menor que la agudeza visual del
ojo humano. A continuación, tenemos algunas recomendaciones:
● Ajustar la muestra a los requisitos ópticos del sistema de imagen del microscopio para
proveer de las condiciones óptimas de contraste y resolución, y evitar artefactos ópticos que
pudieran aparecer y que oscurecerían la imagen o incorporarían falsos detalles.
● Proporcionar las condiciones suficientes para la estabilidad de las muestras, y suficiente
significa proteger las muestras de decaimiento, degradación, corrosión o contaminación
dentro de la escala de tiempo de la observación.
● Cuando sea necesario, aumentar el contraste entre los elementos estructurales de los
materiales y el fondo.
● Hacer que las características de interés sean accesibles al sistema de imagen del
microscopio.
● Asegurar que la muestra a observar es representativa del material, objeto u organismo de
procedencia que se desea estudiar.
 Discusiones
 En el laboratorio de biología, hemos observado el microscopio óptimo compuesto que es el
más común en los laboratorios, su misión es poder observar una muestra de forma
aumentada. Y en la actualidad hay microscopios caros pero son mejores y tiene una buena
resolución, ya que con el tiempo la tecnología va avanzando y mejorando , entre ellas
tenemos diversos tipos de microscopio:

 MICROSCOPIO ELCTRONICO DE BARRIDO:

En el año 1986 surge la Microscopía Electrónica de Barrido controlada mediante computadora.
Se, utiliza electrones en lugar de luz para formar una imagen para lograr, que el equipo cuente con
un dispositivo (filamento) que genera un haz de electrones para iluminar la muestra y con diferentes
detectores se recogen después los electrones generados de la interacción con la superficie de la
misma para crear una imagen que refleja las características superficiales de la misma, pudiendo
proporcionar información de las formas, texturas y composición química de sus constituyentes.

A partir de él se producen distintos tipos de señal que se generan desde la muestra y se utilizan para
examinar muchas de sus características. Con él se pueden realizar estudios de los aspectos
morfológicos de zonas microscópicas de los distintos materiales con los que trabajan los
investigadores de la comunidad científica y las empresas privadas, además del procesamiento y
análisis de las imágenes obtenidas, en el microscopio de barrido electrónico existen los siguientes:
Detector de electrones secundarios (SE): es el que ofrece la típica imagen en blanco y negro de la
topografía de la superficie examinada. Es la señal más adecuada para la observación de la muestra
por ser la de mayor resolución.
Detector de electrones retro dispersados (BSE): también ofrece una imagen de superficie aunque
de menor resolución. Su ventaja consiste en que es sensible a las variaciones en el número atómico
de los elementos presentes en la superficie.

Detector de rayos X (EDS): es el que recibe los rayos X procedentes de cada uno de los puntos de
la superficie, como la energía de cada rayo X es característica de cada elemento, podemos obtener
información analítica cualitativa y cuantitativa de áreas del tamaño que deseemos de la superficie.

Detector de rayos X (WDS): Esto hace que esta técnica, aunque más lenta, sea mucho más
sensible y precisa que la de EDS. Realmente son complementarias, pues el EDS ofrece una buena
información de todos los elementos presentes en la superficie de la muestra y el WDS es capaz de
resolver los picos de elementos cuyas energías de emisión estén muy cercanas..

Detector de electrones retro dispersados difractados (BSED): en este caso sólo se reciben
aquellos electrones difractados por la superficie de la muestra que cumplen la ley de Bragg en el
punto que son generados, es decir, se trata de una señal que nos aporta información de la
estructura cristalina de la muestra.

MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA:

El Microscopio de Fluorescencia fue desarrollado a principios del siglo veinte por August Köhler,
Carl Reichert, y Heinrich Lehmann, entre otros. Sin embargo no fue sino hasta décadas después que
se descubrió su potencial, siendo hoy una técnica indispensable en biología celular. La principal
diferencia del Microscopio de Fluorescencia es que permite irradiar al espécimen con la luz de
excitación y separar la luz fluorescente emitida, que es mucho más débil, de la luz de excitación
Esto es una técnica muy utilizada en el campo de la medicina para el diagnóstico de una
gran variedad de padecimientos, entre los que se encuentran influenza, toxoplasma,
identificación de anticuerpos anti-DNA y rabia, entre otros
Este tiene una variación del microscopio de luz ultravioleta en el que los objetos son
iluminados por rayos de una determinada longitud de onda, es un dispositivo muy sensible
a la rotura especialmente, los componentes que son más usados como son los objetivos y su
coste es elevado.

 Tipos de fluoróforos:
Moléculas orgánicas: Los fluoróforos Alexa Fluor (derivados de la rodamina) han sido
utilizados como marcadores de biomoléculas. La fotoestabilidad es una de las principales
características de este tipo de colorantes, además barren todo el espectro.

Puntos cuánticos: Son nano cristales semiconductores que al ser iluminados, re-emiten luz en una
longitud de onda muy específica y que depende del tamaño de este. Cuanto más pequeños sean los
puntos, menor es la longitud de onda y más acotadas las propiedades cuánticas de la luz que emiten.
Por ello la luz emitida vira del azul al rojo a medida que el tamaño del punto se incrementa

Proteicos: GFP posee un barril beta formado por 11 cadenas e incluye una hélice alfa central que
atraviesa el barril en toda su longitud. En esta hélice hay tres aminoácidos consecutivos que forman
un cromóforo natural, de forma que cuando la GFP es iluminada con luz ultravioleta, produce una
brillante fluorescencia verde.

Conclusiones
 En esta práctica hemos aprendido el tema de la microscopia , sus tipos ,sus
funciones y como con el tiempo la tecnología ha ido mejorando y sacando
microscopios de última generación con los cuales se podría trabajar mejor, entre
ellas la que utilizamos con mayor frecuencia en el laboratorio de biología es el
microscopio optimo compuesto : Este consiste en dos sistemas de lentes, el objetivo
y el ocular, montados en extremos opuestos de un tubo cerrado , estos lentes de los
microscopios están dispuestas de forma que el objetivo se encuentre en el punto
focal del ocular y cuando se mira a través del ocular este nos proporciona a ver una
imagen virtual aumentada de la imagen real.

Mientras que el microscopio electrónico de barrido (MEB) produce una imagen que
da la impresión de ser en tres dimensiones. Este microscopio utiliza dos o tres
puntos de la muestra donde llegan los electrones que escanean la superficie del
espécimen a observar y salen como electrones secundarios siendo detectados por un
sensor y nos proporciona una imagen como el espécimen entero, a diferencia del
MET donde la imagen corresponde sólo a los electrones transmitidos.
Esta clase nos ha sido útil ya que nos explica detalladamente su función del
microscopio y además también nos enseña a investigar o profundizar los diversos
tipos de microscopios que existen en la actualidad, gracias a la tecnología.
 Deseamos que este informe pueda ser útil para cada uno de los lectores y sigan
investigando más a profundo el tema , ya que le brindamos nuestros conocimientos
y lecciones aprendidas en el laboratorio de biología.

Referencias
https://www.lifeder.com/aceite-de-inmersion/#:~:text=El%20aceite%20de%20inmersi%C3%B3n
%20es,aumentando%20su%20poder%20de%20resoluci%C3%B3n.

https://www.mundomicroscopio.com/partes-del-microscopio/#:~:text=La%20platina%20tiene%20un
%20agujero,ha%20colocado%20sobre%20la%20platina.

https://www.metrixlab.mx/tipos-de-portaobjetos-y-una-buena-seleccion/#:~:text=Un%20portaobjetos%20de
%20microscopio%20es,ser%C3%A1n%20examinadas%20con%20un%20microscopio.

http://www.scai.uma.es/areas/micr/sem/sem.html
https://www.ecured.cu/Microscopio_electr%C3%B3nico_de_barrido
https://www.redalyc.org/pdf/2091/209116189013.pdf