Semana 6 – Taller Entregable

IDENTIFICACIÓN MOLECULAR: CALIDAD DE ÁCIDOS NUCLÉICOS

ELECTROFORESIS Y NANODROP

1. (1.0) Propongan diferentes explicaciones para los resultados de los corridos

electroforéticos de PCR que verán en los siguientes geles. Cada pozo corresponde a un
resultado único de una reacción PCR para la cual se usó ADN templado de diferentes
muestras bacterianas y una misma pareja de primers.

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ELECTROFORESIS Y NANODROP

2. (1.5) Se realizó la extracción de ADN total de 5 muestras de diferentes organismos y

microorganismos y se realizó una electroforesis de dicha extracción para comprobar la
integridad del ADN.
a) Señalen en el gel el peso de cada fragmento del marcador de peso.
b) ¿Qué pueden decir de cada una de las muestras (1-5) de acuerdo con el gel
en cuanto a tamaño, integridad y calidad? ¿El resultado es lo esperado?
c) ¿Cuál muestra escogerían para realizar ensayos posteriores como una
secuenciación de ADN total y por qué?

El marcador de peso usado en el gel va hasta 1Kbp y consta de 12 fragmentos. Tenga en

cuenta que hay un fragmento que pesa 25 bp y otro que pesa 50 bp. Los 10 fragmentos
restantes van de 100 bp a 1Kbp con diferencias de 100 pb.
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ELECTROFORESIS Y NANODROP

3. (2.5) Una de sus compañeras cuantificó por NanoDrop el ADN amplificado luego de
realizar una PCR a un gen 16S, obteniendo el siguiente resultado:

Su compañera se emociona porque la cuantificación que obtuvo fue de 0.257 µg/µL lo cual
es un valor alto para lo que ella esperaba y les dice: “Oigan, miren que la amplificación me
dio súper bien y tengo mucho ADN del gen 16S para mandar a secuenciar”. ¿Están de
acuerdo con esa afirmación de su compañera? Discutan y expliquen por qué sí o por qué
no e incluyan sugerencias para ella en caso de que lo consideren necesario.

4. BONO (Obligatorio para estudiantes virtuales) (1.0)

Completen el siguiente simulador en dificultad nivel 3 y respondan las siguientes
preguntas:
https://www.labxchange.org/library/items/lb:LabXchange:9548bee3:lx_simulation:1
a. ¿Qué ocurriría si no gira el gel en la cámara de electroforesis?
b. Teniendo en cuenta el proceso, imaginen ahora el siguiente caso en el que: 1)
ustedes dejaron los pozos del gel hacia el lado positivo, pero 2) después invirtieron
los cables que conectan a la cámara (conectaron los negros al rojo y viceversa) 3)
dejando correctamente conectados los cables a la fuente de poder ¿Qué pasaría?
c. Si añadiéramos un cuarto colorante de naturaleza de carga positiva ¿En qué
dirección migrarían las muestras? ¿Qué ocurriría si los pozos del gel estuvieran
ubicados en la mitad del gel? Realice un dibujo/esquema en donde muestre el
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ELECTROFORESIS Y NANODROP

resultado esperado para esta situación (una imagen similar al formato presentado
en la simulación)