DINA ISMAEL BARDAN MICROBIOLOGÍA CLÍNICA

ACTIVIDAD Nº 1:

Analiza las imágenes que se adjuntan e indica en cada caso la información que aportan
acerca del microorganismo.

Puntos a considerar:

1. Tipo de microorganismo
2. Información que aporta la tinción realizada en relación a:
o Tamaño y morfología
o Agrupación
o Otros aspectos (pared celular, cápsulas, esporas…)

Imagen 1: Tinción de Gram-1.

Estamos ante una tinción de gran positiva debido a que se ha

teñido de azul.
Estamos ante una muestra de bacterias con una forma irregular,
destacamos algunas formas en Y, características del género
Actinomyces.
El objetivo usado es el máximo posible, 1000X con su aceite de
inmersión. Usamos este aumento para poder ver en detalle a las
bacterias ya que al ser microorganismos de tan pequeño calibre
resulta más sencillo poder identificarlas.

Imagen 2: Tinción de Gram-2.

Se trata de bacterias agrupadas en cadenas, estas reciben el

nombre de estreptobacilos, ya que son bacterias con forma de
bacilo en cadenas.

Para poder visualizar con claridad la muestra se ha empleado un

aumento de 1000X, al igual que en el resto de las preparaciones.
Esto supone el empleo de aceite de inmersión debido al uso de
los 100 aumentos.
Se trata de una tinción gran positiva debido a su color violeta
característico.

Imagen 3: Tinción de Gram-3.

Nos encontramos ante una colonia bacteriana. Para poder

visualizar la muestra se ha empleado un aumento de
1000X, empleando para ello el correspondiente aceite de
inmersión. Por otro lado, podemos observa su forma de
bacilo característico.

Las bacterias tienen pequeño tamaño por ello empleamos

la mayor resolución posible. Además, el interior de las
bacterias es homogéneo, es decir, no podemos observar
estructuras celulares. En cuanto a la agrupación celular
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podríamos decir que se trata de diplobacilos o incluso agrupaciones irregulares, en empalizada o

letras chinas.

Se trata de una tinción con gran negativo debido a que las bacterias quedan teñidas de un rojo
característico.

Imagen 4: Montaje húmedo.

Se ha empleado el montaje húmedo, una de las

técnicas de observación en fresco mas utilizadas. Esta
técnica consiste en colocar el producto a examinar
directamente entere el porta y cubreobjetos y enfocarlo
al microscopio.
Debido a su forma esférica nos decantamos por los
cocos, bacterias con esta forma.

En cuanto a la agrupación de estos microorganismos,

diremos que se trata de diplococos, ya que se agrupan de tal forma que cuando la célula madre
se divide en un plano, las células hijas permanecen juntas tras la división.

ACTIVIDAD Nº 2:

Elabora un protocolo en el que se muestren todos los pasos necesarios para realizar el
procedimiento de tinción de gram (incluyendo la preparación de frotis) indicando como
quedarían teñidas las bacterias después de cada paso. Señala en el esquema los puntos
críticos del procedimiento.

1. Añadir el colorante: Cristal violeta, duración de 1 minuto.

2. Lavar con agua.
a. Evita que el chorro incida directamente sobre la muestra. Para evitar que el
agua se lleve todo nuestro preparado.
b. El chorro de agua debe caer en la parte superior del portaobjetos y resbalar por
la muestra.
3. Aplicar mordiente yodo-lugol durante 1 minuto.
4. Lavar con agua (teniendo en cuenta las indicaciones anteriores).
5. Aplicamos el decolorante: alcohol, acetona y lavar
a. Aplicamos hasta que deje de salir color, aproximadamente 3 segundo.
6. Aplicamos el contracolorante, safranina y esperamos un minuto.
7. Lavar.
8. Dejamos secar.
9. Gran listo para su interpretación al microscopio óptico
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ACTIVIDAD Nº 3:

Imagina que tienes que repartir un caldo de cultivo de un microorganismo de nivel 3 en

tres tubos, añadiendo 1 ml a cada uno de ellos.

Detalla:

a. El material que necesitarías. Como nos encontramos ante microrganismos de nivel 3, el

EPI empleado seria:

• Los equipos protectores de los ojos y cara:

Gafas de seguridad.
Pantallas faciales.
• Los equipos protectores de las vías respiratorias:
Mascarillas frente a aerosoles.
• Los equipos protectores de manos y brazos:
Guantes: de un solo uso, ajustados a las manos del trabajador.
Manguitos.
• Los equipos protectores de la totalidad del cuerpo:
Batas: cerradas por delante y con los puños cerrados.
Calzado (es recomendable evitar modelos que no cubran por completo el pie)

El material de manipulación será:

Debe ser el mínimo posible. Usaremos tres tubos, una micropipeta de 1ml o una pipeta
con su prepipeta. En caso de usar la micropipeta debemos disponer de la punta de
micropipeta, al tratarse del mismo compuesto no es necesario cambiarla tras cada
reparto de cultivo.
Además, seria conveniente, disponer de una gradilla para colocar los distintos tubos de
ensayo

b. Los pasos del procedimiento de preparación de las alícuotas.

Usaremos una cabina de tipo IIA. Seguimos los siguientes pasos:

• Purgado. Ponemos en marcha la cabina durante 5-10 minutos

• Comprobar estabilización del manómetro
• Limpiar la superficie de trabajo con alcohol al 70%
• Lavarse las manos, cerrarse la bata y los puños de las mangas, colocarse guantes y
mascarilla cuando proceda.
• Durante la manipulación: descontaminamos el material con etanol al 70% antes de
introducirlo en la cabina. Colocamos el material sin obstruir rejillas de entrada de
aire, colocar el material en origen “lógico”, evitando hacer movimientos bruscos. Si
necesitamos introducir nuevo material, esperamos 2-4 minutos fuera de la cabina
antes de entrar para que se estabilice el flujo laminar.
• Movimientos lentos.
• En caso de vertido, desinfectar rápidamente.
• Si suena alguna alarma de la cabina, no usarla.
• Al finalizar el procedimiento, vaciamos la cabina de cualquier material, limpiamos
y descontaminamos con alcohol etílico al 70%. Dejamos la cabina encendida 15
minutos conectando la luz UV.
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c. Las medidas de seguridad que adoptarías en la operación.

En primer lugar, el EPI nombrado anteriormente. A continuación, el uso de una cabina de

seguridad para realizar el procedimiento. Por último, para deshacernos del sobrante del caldo el
cual presenta microorganismos nivel III, en caso de no necesitarlo más, lo pasamos por el
autoclave antes de descartarlos por el fregadero o inactivarlos con lejía antes de tirarlos.