Universidad Nacional de Asunción Facultad

de Ciencias Exactas y Naturales

Departamento de Educación a Distancia

* TINCIÓN DE FEULGEN
** Jose Manuel Peralta Roman

San Lorenzo – Ciudad Universitaria – Paraguay

Año 2022

* Informe Nº 1, presentado a la asignatura Biología Celular

** Estudiante de la carrera Lic. en Ciencias – Mención Biología

Profesora: Lic. Gloria Yaluff, MSc.

Encargada del Lab. de Genética: Lic. Sara Aguilar, MSc.

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INTRODUCCIÓN

En la microscopia, además de los límites que puede presentar un microscopio, uno de los
temas que influyen en la practicidad de la observación es la visibilidad. Como es el caso de una gota
de vidrio transparente, en la mayoría de los casos esta es claramente visible, pero si se encuentra
sumergido en una solución con el mismo índice de refracción que el del vidrio, la gota desaparecerá
(Karp et ál, 2019).

En el experimento presentado, el campo de la ciencia que estudia los componentes de la

célula y las sustancias que la componen es la citoquímica. Los preparados en realizados con técnicas
citoquímicas pueden ser fácilmente observados en microscopios tanto ópticos como electrónicos.
Para el caso del microscopio óptico es necesario realizar previamente una tinción que permita
observar los componentes de la célula (Junqueria et ál, 2012).

La presencia de ácidos nucleicos en el nucleolo se pudo confirmar gracias a que se demostró

que este componente absorbe la luz ultravioleta, y el empleo de técnicas citoquímicas demostró
que este poseía diferencias con la cromatina que se encuentra en el núcleo, ya que presenta
básicamente ARN y no ADN, lo cual si está presente en la cromatina. El nucleolo es teñido con el
verde metilo, pero no lo hace con la tinción de Feulgen, el cual es exclusiva para la tinción del ADN
(Paniagua et ál, 2007).

El test de Feulgen es uno de los primeros análisis citoquímicos de uso general para lograr la
tinción del ADN, sin teñir en el proceso el ARN. Consiste principalmente en producir una hidrolisis
del ARN mediante un ácido débil, en este caso una solución de ácido clorhídrico, en el proceso
también se elimina el ADN, pero de manera parcial. El principal efecto que posee esto sobre el ADN
es la liberación de las bases púricas, quedando libres solo los radicales aldehídos de las pentosas. A
continuación, estos radicales dan la reacción de Schiff al ser tratados con leucofuscina (Reactivo de
Schiff), demostrándose así la presencia del ADN (Paniagua et ál, 2007).

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OBJETIVOS

- Determinar experimentalmente el tiempo óptimo de la hidrólisis de las células vegetales utilizando

la tinción de Feulgen.

MATERIALES Y MÉTODOS

- Se cortaron los ápices de las raíces de Allium cepa.

- Se fijaron los ápices durante 20 minutos con metanol-ácido acético (3:1) en un vidrio reloj.

- Se lavaron los ápices en agua destilada por 10 minutos (se agitó cada 5 minutos).

- Se hidrolizaron con HCl 5N por 5, 10, 30 y 60 minutos, respectivamente.

- Se lavaron los ápices en agua destilada por 10 minutos (se agitó cada 5 minutos).

- Se colocaron los ápices en un vidrio reloj y con ayuda de un gotero, en total oscuridad, se agregó
el reactivo de Shiff hasta cubrir toda la muestra, se dejó por 30 minutos.

- Se lavaron los ápices en agua destilada por 10 minutos (se agitó cada 5 minutos).

- Se colocaron los ápices en una lámina y se agregó una gota de ácido acético al 50%, se realizó el
squash con ayuda de la goma de un lápiz de papel, se retiró el exceso de colorante con papel tissue.

- Se cubrió el preparado con la laminilla y se llevó a observación con 400X de aumento.

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RESULTADOS (Insertar fotografía de la hoja de resultados)

Células de Allium cepa con:

Fig. 1. 5 minutos de hidrólisis Fig. 2. 10 minutos de hidrólisis

A: 400X A: 400X

Fig. 3. 30 minutos de hidrólisis Fig. 4. 60 minutos de hidrólisis

A: 400X A: 400X

Nombre y Apellido

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DESCRIPCIÓN Y ANÁLISIS DE RESULTADOS (de acuerdo a los resultados obtenidos)

Tinción de Feulgen

Figs. 1, 2, 3 y 4. Células en mitosis con 5, 10, 30 y 60 minutos de hidrólisis. A:400X.

Se observaron unas células vegetales en interfase proveniente de raíces de Allium cepan, a

un aumento de 400X. Las células en su mayoría poseían una forma cuadrangular, las coloraciones
del núcleo presentaba distintas tonalidades de fucsia, dependiendo de los tiempos de hidrolisis a
los que fue expuesto. En el caso de los minutos 10 y 5, están presentaban leves diferencias entre
ellas, en general ambos poseían pocas pigmentaciones del color. En el caso del tiempo de 30 y 60
minutos, presentaban coloraciones más intensas, especialmente en la de 60 minutos, el cual poseía
pigmentos muy intensos del fucsia. Los nucleolos eran pobremente visibles en las muestras de 5 y
10 minutos, en el caso de los tiempos superiores, eran muy apreciables gracias al contraste que
poseían estos con el resto de la coloración del núcleo.

El ADN presente en el núcleo puede ser observado gracias a la tinción del Feulgen. Las
muestras se hidrolizan en una solución acida débil, este proceso extrae el ARN, el cual desaparece,
mientras que el ADN queda presente. La hidrolisis acida extrae las purinas del ADN a nivel de unión
desoxirribosa y los grupos aldehídos reaccionan con el reactivo de Schiff. En el caso de los tiempos
de 5 y 10 minutos, fueron tiempos muy precarios para la correcta apreciación del núcleo y del
nucleolo, debido al poco contraste que presentaban estos. Mientras que, en los tiempos de 30 y 60
minutos, la eliminación de las purinas del ADN fue bastante óptimas para la correcta observación
del ADN y de la distinción del nucleolo gracias al alto contraste que presentaban, siendo así estos
dos últimos tiempos los tiempos adecuados para la correcta realización de la tinción (Robertis et ál,
2000).

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CONCLUSIONES

Se pudo determinar con éxito el tiempo optimo necesario para una correcta tinción,
utilizando la técnica de la tinción de Feulgen, esto gracias a los diferentes tiempos de hidrolisis débil
a la que fueron expuestas las muestras durante las sesiones de prácticas experimentales en el
laboratorio, siendo estos tiempos los de 5 minutos, 10 minutos, 30 minutos y 60 minutos
respectivamente. De igual manera se adquirieron los conocimientos necesarios para elaboraciones
futuras de muestreas utilizando esta técnica.

BIBLIOGRAFIA

-JUNQUERIA, L, C. CARNEIRO, J. (2012). Biología Celular y Molecular. GUANABARA KOOGAN.

https://www.imosver.com/es/libro/biologia-celular-e-molecular-92012_0010173403.

-KARP, G.; MARSHALL, W.; IWASA, J.2019. Biología celular y molecular. McGRAW-HILL.
https://books.google.com.py/books?id=soD-ygEACAAJ&dq=Biologia+celular+karp&hl=es-
419&sa=X&redir_esc=y

-PANIAGUA, R., NISTAL, M., SESMA, P., ALVAREZ-URIA, M., FRAILE, B., ANADON, R., SAEZ, J. H.
(2007). Biología Celular. McGRAW-HILL. https://books.google.com.py/books/about/Biolog
%C3%ADa_celular_3a_edici%C3%B3n.html?hl=es&id=uqZtGQAACAAJ&redir_esc=y

-ROBERTIS, E. M. F., HIB, J. (2000). BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR de DE ROBERTIS. El Ateneo.

https://books.google.com.py/books?id=5i72QgAACAAJ&hl=es

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Valoración 2 puntos
Formato
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Las descripciones están completas en base a
los resultados obtenidos, expresadas en
tiempo pasado y con una extensión mínima
de 5 líneas cada una.
Contenido
El análisis sustenta a cabalidad lo que se
menciona en la descripción, tiene una
extensión mínima de 5 líneas y está
correctamente citado.
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Puntualidad ---------------------------
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Práctica de
Laboratorio
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Total de puntos
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1 puntos
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La metodología está completa y se redacta
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Los resultados están completos y correctamente
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lo observado en la práctica, no están
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El análisis no sustenta a cabalidad lo que se
menciona en la descripción, tiene menos de
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