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UNIVERSIDAD DE CARABOBO
FACULTAD DE CIENCIAS Y TECNOLOGA
DEPARTAMENTO DE QUMICA
DEDICATORIA
AGRADECIMIENTOS
UNIVERSIDAD DE CARABOBO
FACULTAD DE CIENCIAS Y TECNOLOGA
DEPARTAMENTO DE QUMICA
DESARROLLO DE UN MTODO DE CUANTIFICACIN DE
AZITROMICINA EN FORMULACIN FARMACUTICA POR
CROMATOGRAFA LIQUIDA DE ALTA EFICIENCIA
AUTOR: Luis E. Lpez P.
TUTOR ACADMICO: Dra. Ygmar Jimnez
Julio, 2016
UNIVERSIDAD DE CARABOBO
FACULTAD DE CIENCIAS Y TECNOLOGA
DEPARTAMENTO DE QUMICA
INDICE GENERAL
Dedicatoriaiii
Agradecimientos...iv
Resumen....v
uCaplot1. EL PROBLEMA..............................................................................................................
1.3. Planteamiento y justificacin del problema............................................................
1.4. Objetivo general......................................................................................................
1.4.1. Objetivos especficos.......................................................................................
1.4. Factibilidad y alcance.............................................................................................
1.5. Antecedentes...........................................................................................................
1.5.1. L. Miguel, C. Barbas (2003)............................................................................
1.5.2. Fuad Al-Rimawi y Maher Kharoaf (2010).......................................................
1.5.3. Gryssette Daher (2013)....................................................................................
uCaplot2. Marco terico...................................................................................................................
2.3. Cromatografa lquida de alta eficiencia.................................................................
2.4. Validacin de un mtodo cromatogrfico...............................................................
2.5. Parmetros necesarios para una validacin............................................................
2.5.1. Especificidad....................................................................................................
2.5.2. Linealidad y rango de trabajo.........................................................................
2.5.3. Exactitud.........................................................................................................
2.5.4. Precisin.........................................................................................................
2.5.5. Robustez.........................................................................................................
2.5.6. Estabilidad de soluciones...............................................................................
2.6. Parmetros necesarios para el estudio de la adecuabilidad...................................
Rs ...........................................................................................
As ..............................................................................
4.4. Precisin................................................................................................................
4.5. Estabilidad DE SOLUCIONES............................................................................
4.6. Exactitud...............................................................................................................
4.7. Robustez................................................................................................................
uCaplot5. Conclusiones..................................................................................................................
Recomendaciones............................................................................................................
Apndice..........................................................................................................................
Bibliografa consultada....................................................................................................
INDICE DE TABLAS
Tabla 2.1. Coeficientes de variacin porcentual esperados en funcin a la
concentracin del analito..........................................................................................
Tabla 2.2. Propiedades fsico qumicas de la azitromicina..............................................
Tabla 3.1. Esquema metodolgico del ensayo de especificidad......................................
Tabla 3.2. Esquema metodolgico del ensayo de linealidad...........................................
Tabla 3.3. Esquema metodolgico del ensayo de exactitud, repetibilidad y
estabilidad de soluciones..........................................................................................
Tabla 3.4. Esquema metodolgico del ensayo precisin intermedia..............................
Tabla 3.5. Factores y niveles a emplear en la evaluacin de la robustez.........................
Tabla 4.1. Parmetros cromatogrficos obtenidos para la determinacin de
azitromicina mediante el mtodo propuesto............................................................
Tabla 4.2. Mejores condiciones cromatogrficas obtenidas para la determinacin
de azitromicina mediante cromatografa lquida de alta eficiencia..........................
Tabla 4.3. ngulos de pureza del pico cromatogrfico de azitromicina sometida a
diferentes condiciones de degradacin.....................................................................
Tabla 4.4. Parmetros cromatogrficos obtenidos para la determinacin de
azitromicina sometida a diferentes condiciones de degradacin.............................
Tabla 4.5. Estudio de la linealidad del mtodo para la determinacin de
azitromicina mediante cromatografa lquida de alta eficiencia..............................
Tabla 4.6. Repetibilidad y precisin intermedia del mtodo de determinacin de
azitromicina mediante cromatografa lquida de alta eficiencia..............................
10
11
INDICE DE FIGURAS
Figura 2.1. Informacin espectral..........................................................................7
Figura 2.2. Comparacin espectral de dos componentes.......................................9
Figura 2.3. Grfico de vectores para dos espectros..............................................10
Figura 2.4. Trompeta de horwitz..........................................................................14
Figura 2.5. Azitromicina......................................................................................19
Figura 2.6. Eritromicina.......................................................................................19
Figura 3.1. Metodologa general..........................................................................21
Figura 3.2. Preparacin de estndar y muestra....................................................23
Figura 4.1. Cromatograma del estndar de trabajo secundario azitromicina.......32
Figura 4.3. Cromatograma de la acetona.............................................................33
Figura 4.4. Cromatograma del diluyente..............................................................34
Figura 4.5. Cromatrograma de la azitromicina luego de ser sometida a
degradacin trmica......................................................................................38
Figura 4.6. Cromatograma del placebo sometido a degradacin cida................39
Figura 4.7. Cromatograma del placebo sometido a degradacin bsica..............39
Figura 4.8. Cromatograma del placebo sometido a degradacin reductiva.........40
Figura 4.9. Cromatograma del placebo sometido a degradacin oxidativa.........40
Figura 4.10. Cromatograma del placebo sometido a degradacin trmica..........41
Figura 4.11. Cromatograma del placebo..............................................................41
Figura 4.12. Cromatograma de la fase mvil.......................................................42
12
13
Captulo 1. EL PROBLEMA
1.3. Planteamiento y justificacin del problema
Laboratorios Elmor S.A. es una empresa qumico farmacutica dedicada
al diseo, manufactura y comercializacin de frmacos dedicados al tratamiento
y prevencin de enfermedades. Entre sus principales productos se encuentran:
tabletas, cpsulas sobres para administracin oral, soluciones inyectables,
jarabes, caramelos, vulos, cremas y supositorios. Laboratorios Elmor S.A.
pertenece a un mercado delicado, y debe garantizar un impacto positivo de sus
productos farmacuticos sobre la salud humana a travs de las Buenas Prcticas
de Manufactura y parmetros de calidad altamente rigurosos.
Entre su amplio catlogo de productos, la empresa ha desarrollado la
suspensin
Especificidad
Linealidad
Exactitud
Precisin
Robustez
Estabilidad de soluciones
Antecedentes
espectros , 2013)
vectores
espectrales
tienen
dos
propiedades(Acquity
UPLC
Figura 2.3. Grfico de vectores para dos espectros. Adaptado de Acquity UPLC Photodiode
Array e Detector, p.78, por Waters. Copyright Waters Corporation 2007-2009.
En la Figura 2.3, los ejes reflejan las unidades de absorbancia de las dos
longitudes de onda utilizadas para calcular la relacin de absorbancia de la figura
anterior. La cabeza del vector para el compuesto A se encuentra en la
interseccin de los valores de absorbancia (para el compuesto A), en las dos
longitudes de onda representadas por cada eje. El vector restante se deriva de
manera similar a partir del espectro de compuesto B (Acquity UPLC Photodiode
Array el Detector, 2009)
Los puntos del vector del compuesto B estn en una direccin diferente
que la del compuesto A. Expresado por el ngulo de contraste espectral, esta
diferencia refleja la diferencia entre los espectros.
Un ngulo de contraste espectral puede variar de 0 a 90 . Un ngulo de
contraste espectral acercndose 0 indica poca diferencia de forma entre los
espectros de comparacin. La coincidencia de un espectro a si mismo produce un
ngulo de contraste espectral de exactamente 0 . El ngulo de contraste
espectral mximo, 90 , indica que los dos espectros no se superponen en
cualquier longitud de onda. (Acquity UPLC Photodiode Array el Detector, 2009)
10
11
t ob=
[ 100 R ]
DSR n
[Ec 2.1]
Siendo
t ob
DSR
la
12
%
100
10
1
0,1
0,01
0,001
0,0001
0,00001
0,000001
0,0000001
Analito
Fraccin
1
10-1
10-2
10-3
10-4
10-5
10-6
10-7
10-8
10-9
Otra Unid.
100%
10%
1%
0,1%
100ppm
10ppm
1ppm
100ppb
10ppb
1ppb
%CV
%CV
Repetibilidad
1,3
1,9
2,7
3,7
5,3
7,3
11
15
21
30
Reproducibilidad
2
3
4
6
8
11
16
22
32
45
13
[1 ( 0.5 logC ) ]
[Ec 2.2]
Convenientemente, el valor de C es equivalente a la concentracin del
analito cuando es expresado en g/mL. La constante de Horwitz se utiliza para
determinar criterios de aceptacin de precisin, donde se puede establecer una
reproducibilidad aceptable cuando el %CV es menor al %CVH y una repetibilidad
aceptable cuando el %CV calculado es menor a una fraccin del %CVH segn la
AOAC International(Appendix F: Guidelines for Standard Method, 2012)
2.4.5. Robustez
La robustez de un mtodo de anlisis es la medida que caracteriza su
capacidad de permanecer inafectado por pequeas variaciones en los parmetros
(condiciones de operacin).
14
Estabilidad de soluciones
La validacin debe contener informacin sobre la estabilidad de los
15
t 0=
Y
X
1 1
S p
+
nx n y
[Ec 2.3]
Donde
X y Y
nx y ny
son los
libertad, donde
n x + n y 2
grados de
Sp =
( n x 1 ) S 2x + ( n y 1 ) S 2y
n x +n y 2
[Ec 2.4]
2
Con S x
y Sy
la hiptesis nula si
|t 0|>t /2
donde
t /2
n x + n y 2
Salazar, 2008)
16
( )
N=16
[Ec 2.5]
Donde
tr
es el ancho de
la base del pico obtenida extrapolando las lneas relativamente rectas del pico
hasta la lnea base. El valor de
17
Rs =
2( t r 2t r 1 )
( W 1+ W 2 )
[Ec 2.6]
Donde
tr2
componentes,
W1
y
y
t r1
W2
W 0.05
2f
[Ec 2.7]
Donde
W 0.05
es la distancia
desde el mximo del borde delante del pico, la distancia es medida a un 5% por
encima de la altura desde la base del pico.
2.5.4. Factor de capacidad (k)
El factor de capacidad k es un valor prctico que expresa el grado de
interaccin del analito con la columna:
k=
t r t o
to
[Ec 2.8]
18
Donde
tr
to
el tiempo de
19
Nombre comercial
Azitromicina dihidrato
20
Nombre qumico
9-deoxo-9-aza-9-homoeritromicina A
dihidrato
Frmula molecular
C38 H 76 N 2 O14
Masa Molecular
785 g/mol
pKa
8,48
Punto de fusin
125 C
39 mg/mL
(ZITHROMAX, 2014)
21
ETAPA (1):
AJUSTE DEL
MTODO
ETAPA (2):
DETERMINACI
N DE
PARMETROS
DE
VALIDACIN
Condiciones
cromatogrficas
Tratamiento de la
muestra
Adecuabilidad
Especificidad
Exactitud, precisin,
linealidad
Robustez
22
23
Estndar,
Azitromic
ina
Pesar 50mg y
disolver en 50mL
de fase mvil.
Llevar a
ultrasonido por
5min, filtrar por
micro filtro de
0,45m en un
vial y llevar al
HPLC
Muestra,
suspensin
de
azitromicina
200mg/5mL
Tomar una
alcuota de
2,5mL en 200mL
de fase mvil.
Filtrar el
sobrenadante
por micro filtro
de 0,45m en un
vial y llevar al
HPLC
Agitar durante
30min
mecnicamente
y centrifugar por
20min
24
Conc del
muestra
activo (%)*
Placebo
0
(0 mg/mL)
Dilucin
2,5mL en 200
mL de fase
mvil
50mg en
Principio
100 (1mg/mL) 50mL de fase
activo
mvil
Placebo
cargado
100
(1mg/mL)
2,5mL en
200mL de
fase mvil
Degradacin
cida
Bsica
Oxidativa
Reductiva
Trmica
Acida
Bsica
Oxidativa
Reductiva
Trmica
No aplica
Criterio de aceptacin**
25
Conc del
activo*
muestra
(%)
70
80
90
Principio
activo
100
110
120
130
Inyeccin
Dilucin
Rplicas
por
Criterio de aceptacin**
rplica
35mg/50mL de
fase mvil
40mg/50mL de
fase mvil
45mg/50mL de
fase mvil
50mg/50mL de
fase mvil
55mg/50mL de
fase mvil
60mg/50mL de
2. La varianza es
constante para todas las
concentraciones.
3. Distribucin aleatoria
de los
fase mvil
65mg/50mL de
fase mvil
residuos(coeficiente de
Durbin Watson > 0.05)
26
27
Parmetro
Exactitud
Repetibilidad
Solucin
muestra
Placebo
cargado
Placebo
Estabilidad de
cargado
Placebo
soluciones (24 h)
Estabilidad de
cargado
Placebo
soluciones (48 h)
cargado
Con
c
Rplicas
(%)*
Inyeccin
Criterio de
Prueba
por rplica
aceptacin**
estadstica
70
% recobro
100
130
3
3
1
1
(98,0-102,0)%
100
CV2,0%
100
100
t-Student
CV2,0%
Prueba F y
t-Student
%D 2,0% con
respecto al
t-Student
%R
28
( %R)
Solucin
Conc
Rplica
Criterio de
Prueba
(Equipo)
A
muestra
Placebo
(%)*
(inyeccin)
estadstica
(HPLC 3)
B
cargado
Placebo
100
3 (1)
aceptacin**
%D 3,0% con
(HPLC 2)
cargado
100
3 (1)
Placebo
(HPLC 1)
cargado
respecto al
%R
obtenido en la
100
3 (1)
t-Student,
Fisher
repetibilidad
CV2,0%
( %R)
29
Nivel
Criterio de aceptacin
20
18
pH
6,7
6,8
Longitud de onda
210
212
inyeccin L
30
ADECUABILIDAD
La eleccin del tipo de empaque y polaridad de los solventes a emplear
31
y el acetonitrilo
( c =190 nm)
32
Figura 4.9. Cromatograma del estndar de trabajo secundario Azitromicina. Fase mvil:
metanol-acetonitrilo-buffer de fosfato 30mM de pH 6,7 (75:10:15 v/v), flujo 1,0ml/min, volumen
de inyeccin 20L. Columna X-Bridge C-18, 250mm de largo, 4,6mm de dimetro interno y
tamao de partcula 5m. Deteccin UV: 210nm
Resultados
Criterio de aceptacin**
Asimetra
1,2
2,0
Platos Tericos
9580
>2000
Factor de Capacidad
1,5
(1-10)
Coeficiente de variacin
Area: 0,9
Altura: 0,8
2,0%
**Criterio de aceptacin segn protocolo de validacin CCQ-VA-025 ao 2015 (Duque, Lara, &
Perez, 2015)
33
K'
tiempo de elucin
t
( 0) segn el cromatograma de la Figura 4.2, el cual fue
34
35
4.9.
Mejores
condiciones
cromatogrficas
obtenidas
para
la
210 nm
Flujo
1,0mL/min
Volumen de inyeccin
20L
Columna
10 minutos
36
4.3. ESPECIFIDIDAD
Se degrad el analito y placebo por separados (ver Tabla 3.1 del
Captulo 3) para evaluar la especificidad del mtodo Cromatogrfico;
investigndose la existencia de coelucin de algn producto de degradacin o
excipiente con el analito. Para ello, se realiz el anlisis que integra la
informacin obtenida a diferentes longitudes de onda, adems del tiempo y la
absorbancia. Segn la Tabla 4.3, los resultados indican que el ngulo de pureza
(purity angle) se mantiene inferior al ngulo lmite (angle thershold), lo cual
implica que el pico del analito es espectralmente puro segn protocolo de
validacin CCQ-VA-025, ao 2015 (Duque, Lara, & Perez, 2015)
Tabla 4.10. ngulos de pureza del pico cromatogrfico de azitromicina sometida
a diferentes condiciones de degradacin
Degradacin
Angulo de pureza
cida
(Purity angle)
1,1
Bsica
0,5
0,7
Reductiva
0,6
0,8
Oxidativa
NC
NC
Trmica
0,4
0,6
1,4
NC: No cuantific
Placebo cargado; Angulo de pureza 1,1, Angulo lmite 1,5
37
Inyeccin
Factor de
Platos tericos
(min)
7,523
Asimetra
1,1
7044,7
7,464
1,2
7429,2
1
2
7,562
7,417
1,1
1,2
7225,1
8240,4
7,561
1,1
7254,8
7,461
1,2
8014,1
NC
NC
NC
NC
NC
NC
7,191
1,2
9021,4
7,191
1,2
9021,4
NC (no cuantific)
tr
7,191minutos).
38
39
Figura 4.13. Cromatograma del placebo sometido a degradacin cida. 5mL HCl 0.5N. Fase
mvil: metanol-acetonitrilo-buffer de fosfato 30mM de pH 6,7 (75:10:15v/v), flujo 1,0mL/min,
volumen de inyeccin 20l. Columna X-Bridge C-18, 250mm de largo, 4,6mm de dimetro y
tamao de partcula 5m. Deteccin UV:210 nm
Figura 4.14. Cromatograma del placebo sometido a degradacin bsica. 5mL NaOH 0.5N.
Fase mvil: metanol-acetonitrilo-buffer de fosfato 30mM de pH 6,7 (75:10:15v/v), flujo
1,0mL/min, volumen de inyeccin 20l. Columna X-Bridge C-18, 250mm de largo, 4,6mm de
dimetro y tamao de partcula 5m. Deteccin UV:210 nm
40
Figura 4.15. Cromatograma del placebo sometido a degradacin reductiva. 5ml HCl
0.5N+5mLNaOH 0.5N+Zinc. Fase mvil: metanol-acetonitrilo-buffer de fosfato 30mM de pH
6,7 (75:10:15v/v), flujo 1,0mL/min, volumen de inyeccin 20l. Columna X-Bridge C-18,
250mm de largo, 4,6mm de dimetro y tamao de partcula 5m. Deteccin UV:210 nm
Figura 4.16. Cromatograma del placebo sometido a degradacin oxidativa. 5mL de perxido
de Hidrgeno. Fase mvil: metanol-acetonitrilo-buffer de fosfato 30mM de pH 6,7 (75:10:15v/v),
flujo 1,0mL/min, volumen de inyeccin 20l. Columna X-Bridge C-18, 250mm de largo, 4,6mm
de dimetro y tamao de partcula 5m. Deteccin UV:210 nm
41
Figura 4.17. Cromatograma del placebo sometido a degradacin trmica. 50-60C. Fase
mvil: metanol-acetonitrilo-buffer de fosfato 30mM de pH 6,7 (75:10:15v/v), flujo 1,0mL/min,
volumen de inyeccin 20l. Columna X-Bridge C-18, 250mm de largo, 4,6mm de dimetro y
tamao de partcula 5m. Deteccin UV:210 nm
42
t
( 0) de la acetona, es
43
Coeficiente de correlacin
ajustado
99,3283%
Estadstico Durbin-Watson
0,8595
44
(X 100000.)
20
Area de pico
18
16
14
12
10
0.7
0.9
1.1
1.3
1.5
Concentracion
Figura 4.20. Grfica del modelo ajustado para la determinacin de azitromicina por
cromatografa lquida de alta eficiencia.
45
4.5. PRECISIN
La precisin est relacionada con la dispersin de las medidas alrededor
de su valor medio. Esta se evalu en funcin de la repetibilidad y la precisin
intermedia segn protocolo de validacin CCQ-VA-025, ao 2015 (Duque, Lara,
& Perez, 2015) (ver Seccin 3.4.4.1 del Captulo 3), expresadas a travs del
coeficiente de variacin. Los resultados se muestran en la Tabla 4.6.
Tabla 4.13. Repetibilidad y precisin intermedia del mtodo de determinacin de
azitromicina mediante cromatografa lquida de alta eficiencia.
Repetibilidad
Precisin intermedia
CRP*
S
CV
102,1
2,60
2,6%
*Concentracin Relativa Promedio
CRP*
100,7
S
2.13
CV
2,1%
S: desviacin estndar
CV: coeficiente de variacin porcentual
Las concentraciones relativas por rplica se encuentran en la Tabla A.1 de los Apndices.
(H ,0 )
46
( 2x = 2y )
H
( 0)
( x= y )
47
Concentracin relativa a
48 horas
la declarada
%R
pCalculado
100%
102,1
0,737
%R
pCalculado
100,7
0,799
%R
: Porcentaje de recobro promedio
*
=0.05
Los porcentajes de recuperacin por rplica se encuentran en la Tabla 5.3, ver Anexos
48
%R
obtenido a 24 y
H
( 0) con un nivel de significancia del
ensayo de repetibilidad.
El analito no se degrada bajo las condiciones normales del laboratorio,
temperatura de (223) C y humedad relativa (505) %. Establecindose el
perodo de ejecucin del mtodo de 48 horas.
4.7. EXACTITUD
La exactitud del mtodo, corresponde a la diferencia entre el valor
obtenido (media) y el valor aceptado. Esta se estudi, segn la Seccin 3.6.3 del
Captulo 3, en los extremos de la linealidad y el 100% de la misma, los
resultados se muestran en la Tabla 4.8.
49
%R
CV
pCalculado
100,7
0,5
0,125
100,3
1,1
0,721
100,0
0,8
1,000
%R
declarada (terica)
70%
100%
130%
100,7
101,1
100,2
99,3
101,5
100,0
99,2
100,1
100,7
%R : Porcentaje de recobro
CV: Coeficiente de variacin
=0.05 *
La Tabla 4.8 evidencia que tanto el
%R
criterios de aceptacin establecidos en la Tabla 3.3 (% recobro entre 98,0102,0% y CV2,0%). Adems, se evaluaron los resultados a travs de las
siguientes hiptesis estadsticas:
H 0 : X=(hiptesis
nula)
H a : X (hiptesis alternativa)
Los valores de p obtenidos son superiores a 0,05 (ver Tabla 4.8), razn
por la cual se acepta la hiptesis nula
50
( X =)
adecuada.
Los porcentajes de recuperacin obtenidos para el mtodo desarrollado
(99,2-101,1%, con un promedio de 100,3%) son comparables a los reportados
por Zubata et al (Zubata, Ceresole, Rosasco, & Pizzorno, 2002) en la
cuantificacin de azitromicina tabletas por cromatografa lquida de alta
eficiencia (98,7-100,0%, con un promedio de 99,4%)
4.8. ROBUSTEZ
La robustez de un mtodo de anlisis es la medida que caracteriza su
capacidad de permanecer inafectado por pequeas variaciones en los parmetros
analticos (condiciones de operacin). El objeto de ste ensayo fue determinar
bajo qu condiciones analticas se puede obtener resultados confiables.
Esta se estudi, segn la Seccin 3.6.5 del Captulo 3, bajo un diseo de
experimentos con arreglo factorial
Longitud de
Factor
Volumen de
onda (nm)
210
inyeccin (L)
20
212
3
4
Experiment
o
CV
Conc.
pH
(%)*
rea
Altura
6,7
100,6
0,3
0,3
20
6,7
101,2
0,1
0,2
210
18
6,8
100,1
0,2
0,3
210
18
6,7
99,5
0,1
0,2
51
212
18
6,7
101,4
0,7
0,8
212
18
6,8
100,3
0,9
0,9
7
8
210
212
20
20
6,8
6,8
99,5
100,3
0,9
0,3
0,8
0,3
*Concentracin relativa
**CV: Coeficiente de variacin de la precisin del sistema.
Las reas y alturas por inyeccin correspondiente a la precisin del sistema se encuentran en la
Tabla 5.2, del apndice A
Figura 4.21. Diagrama de pareto de los efectos (la respuesta es la Concentracin Relativa;
=0,05; A: Longitud de Onda, B: Volumen de inyeccin; C: pH)
52
mediante
de
anlisis
univariado
(no
determinaron
la
53
Captulo 5. CONCLUSIONES
Se desarroll un mtodo lineal, exacto, preciso y robusto por
cromatografa lquida de alta eficiencia para la determinacin de azitromicina en
suspensin
200mg/5mL emplendose
un
equipo
HPLC
con
detector
54
RECOMENDACIONES
55
APNDICE
Tabla A.17. Concentracin relativa de azitromicina obtenida durante el ensayo
de precisin intermedia y repetibilidad
Parmetro
Precisin intermedia
Analista
Conc
(Equipo)
A
(%)*
102,9
(HPLC 3)
B
103,6
99,2
99,5
98,3
100,4
105,7
104,1
102,1
101,2
101,2
98,2
(HPLC 2)
C
(HPLC 1)
Repetibilidad
A
(HPLC 3)
*Concentracin relativa
56
Inyeccin #
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
rea
1568360
1574537
1565293
1566078
1563634
1569631
1565971
1569756
1565637
1565338
1512870
1509530
1506752
1508530
1505834
1569631
1565971
1569756
1565637
1565338
1635377
1638420
1650902
1657090
1661566
1518527
1511892
1508165
1495692
1486774
1328065
1338576
1347101
1350892
1358928
1568360
1574537
1565293
1566078
1563634
57
Altura
144991
145479
145039
144609
144576
144857
144500
144518
144587
145055
139753
139217
138944
138976
138807
144857
144500
144518
144587
145055
150255
150787
152470
152183
153037
141946
140987
140013
139488
138592
121721
122370
123500
123506
124302
144991
145479
145039
144609
144576
Concentracin relativa
a la declarada (terica)
100%
Area
24 horas
1568360
1574537
1565293
1566078
1563634
48 horas
144991
145479
145039
144609
144576
rea
1635377
1638420
1650902
1657090
1661566
58
Altura
150255
150787
152470
152183
153037
Figura A.22. Cromatograma tpico del producto azitromicina 200mg/5mL. Fase mvil:
metanol-acetonitrilo-buffer de fosfato 30mM de pH 6,7 (75:10:15 v/v), flujo 1,0ml/min, volumen
de inyeccin 20L. Columna X-Bridge C-18, 250mm de largo, 4,6mm de dimetro interno y
tamao de partcula 5m. Deteccin UV: 210nm
59
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