Endotelización Rápida de Injertos
Vasculares de Seda de Diámetro
Pequeño Disponibles en el Mercado
Magela Benavides García
Facultad de Automática y Biomédica, Universidad
Tecnológica de La Habana, Cuba
magela.bg@automatica.cujae.edu.cu
Resumen: Junto con una mayor incidencia de enfermedades
cardiovasculares, existe una gran necesidad de injertos
vasculares de diámetro pequeño. Se ha investigado la seda como
biomaterial para desarrollar este tipo de injertos gracias a
diferentes opciones de procesamiento. Se demostró que la
endotelización es extremadamente importante para garantizar la
permeabilidad y actualmente se investiga el comportamiento de
las células endoteliales en los andamios de ingeniería de tejido
vascular. En este artículo se revisa la endotelización de andamios
a base de seda partiendo de un estudio publicado en el 2018 que
muestra su potencial como injerto vascular de pequeño
diámetro. Se informaron resultados alentadores con estos
andamios tanto in vitro como in vivo cuando se implantaron en
ratas. Un estudio más reciente realizado por Alessandrino
informa por primera vez que se conozca sobre la implantación
de injertos de seda en animales más grandes, sus resultados
también se mencionan brevemente.
Palabras claves: seda, células endoteliales, injertos vasculares,
ingeniería de tejidos, andamios.
I. INTRODUCCIÓN
Según la Organización Mundial de la Salud,
aproximadamente 17,9 millones de personas murieron por
enfermedades cardiovasculares en 2016, lo que representa
el 31% de todas las muertes. Los posibles tratamientos
incluyen productos farmacéuticos, cambios en el estilo de
vida o cirugía. Se pueden implantar injertos vasculares
para reemplazar o evitar un vaso sanguíneo ocluido o
dañado. Los injertos autólogos, como los injertos de vena
safena o de arteria interna de mamíferos, se prefieren para
injertos de pequeño calibre. Sin embargo, su
permeabilidad es limitada y los pacientes pueden carecer
de vasos adecuados. Los injertos sintéticos también se
pueden utilizar como reemplazo, pero
desafortunadamente, tienen serias limitaciones ya que no
se pueden reparar, remodelar y carecen de potencial de
crecimiento [1].
Los andamios hechos de polímeros naturales han
despertado interés, sobre todo porque exhiben una
excelente biocompatibilidad, actualmente existe una
intensa investigación en curso para desarrollar injertos
vasculares de pequeño diámetro con un endotelio
funcional. Entre ellos, la seda es un candidato destacado
gracias a sus excepcionales propiedades mecánicas. Esta
revisión se centra en el trabajo realizado por Filipe et al.
donde, por primera vez, se informa la implantación in
vivo de un injerto de seda electrohilado. Los autores
concluyen planteando la necesidad de continuar las
investigaciones in vivo en modelos animales más
grandes, es por ello que se incluye un estudio realizado
en el 2019 por Alessandrino y col. en ovejas y cerdos
pequeños.
II. DESARROLLO DEL ARTÍCULO
La fibroína de Bombyx mori L., es un biomaterial, útil
en el contexto de la medicina regenerativa, que se ha
utilizado por sus características físico/químicas.
Actualmente se caracterizan a nivel físico y biológico
nuevos soportes preparados a partir de la fibroína de
seda y se evalúa su capacidad para la proliferación de
fibroblastos humanos. En 2018, Filipe et al. implantan
injertos de seda electrohilada de diámetro pequeño,
libres de células, en ratas durante 24 semanas. Los
injertos se describieron como estándar, ya que exhibieron
una endotelización completa y una muy buena
permeabilidad en un modelo animal sin celularización
previa. Recientemente se han realizado varias
investigaciones centradas en la fabricación de andamios
híbridos electrohilados utilizando polímeros sintéticos y
de seda. La idea es diseñar injertos más biomiméticos
aprovechando el comportamiento mecánico de los
polímeros sintéticos, se utiliza la seda por su buena
afinidad celular [2].
A. Primer injerto de seda electrohilada implantado en
animales
La seda responde a muchas características de un
andamio ideal por su excelente biocompatibilidad,
biodegradabilidad ajustable, versatilidad de procesamiento
y propiedades mecánicas excepcionales. Se despertó un
interés particular en el desarrollo de injertos vasculares de
pequeño diámetro que están muy sujetos a fallas, a
menudo, debido a la falta de un endotelio confluente y
funcional.

La fibroína de seda se ha sido utilizado durante décadas

como material de sutura y se considera biocompatible a
pesar de que se plantearon algunas preocupaciones a la luz
de efectos biológicos adversos, sin embargo, la respuesta
biológica a la fibroína de seda debidamente desgomada. y
esterilizada es comparable a la de los biomateriales más Fig. 1 Escáner de diapositivas Zeiss AxioScan
comunes. Hay muchas opciones de procesamiento Todos los análisis de imágenes se realizaron en Image
disponibles para lograr este emparejamiento mecánico: Pro Premier (versión 9.2) de Media Cybernetics,
después de desgomarse para eliminar la sericina, las fibras considerado uno de los mejores softwares de
de seda se pueden disolver para formar una solución de procesamiento de imágenes, proporcionando
fibroína y producir material de andamio como fibras, herramientas que facilitan la captura, la medición, el
hidrogeles, andamios porosos tridimensionales (3D), análisis y el intercambio de imágenes y datos valiosos.
películas, o incluso partículas. Entre sus funciones más interesantes destaca el poder
La seda fue electrohilada para diseñar estos injertos medir distancia entre objetos, superponer y comparar
vasculares mecánicamente robustos que apoyan la unión imágenes, procesar imágenes por lotes, además
de células endoteliales y la formación de monocapa proporciona tanto vista de macrográfica como basada en
mientras resisten la adhesión de sangre y montaje de código, segmentación inteligente y un avanzado
fibrina in vitro. administrador de características [4].
Se realizó SEM y análisis estadístico utilizando
B. Equipos e instrumentos
GraphPad Prism 7 versión 7.02 para Windows lanzado
Los experimentos realizados se llevaron a cabo de
por GraphPadSoftware Inc. Este combina gráficos
acuerdo con Australian code of practice for the car and
científicos, ajustes de curvas completo (regresión no
use of animals for scientific purposes. Después de
lineal), estadísticas comprensibles y organización de
preparados los injertos se desinfectaron empleando,
datos. Aunque no reemplaza a un programa de
además de etanol al 70%, una lámpara de luz ultravioleta
estadísticas de alto rendimiento permite realizar
a la que estuvieron expuestos por 30 min. Se les
fácilmente pruebas básicas, utilizadas comúnmente por
administran anestésicos a las ratas y se preparan para
investigadores de laboratorio y clínicos. Ofrece pruebas
cirugía. En este procedimiento se emplearon diferentes
t, comparaciones no paramétricas, ANOVA de 1, 2, y 3
instrumentos quirúrgicos debidamente esterilizados como
factores, análisis de tablas de contingencia y análisis de
plantea el código anteriormente mencionado. Las ratas
supervivencia. Las opciones de análisis se presentan en
fueron seguidas durante 3, 6, 12 y 24 semanas, momento
un lenguaje claro que evita la jerga estadística
en el que se extirpó el injerto para microscopía
innecesaria [5].
electrónica de barrido y análisis histológico.
Las muestras fueron fijadas en paraformaldehído al
C. Resultados
4% y procesadas para imágenes de microscopía
Los andamios de seda electrohilada proporcionan una
electrónica de barrido o análisis histológico. Los equipos
mecánica apropiada como injerto vascular material. Sus
para estos procedimientos fueron adquiridos en la
propiedades mecánicas se evaluaron en comparación con
empresa alemana Leica Microsystems. Se prepararon los
el ePTFE comercial y la aorta de rata nativa. Revelaron
portaobjetos y cubreobjetos y se fotografiaron en el Zeiss
un módulo de Young ligeramente más alto que la aorta
AxioScan, escáner de portaobjetos para campo claro o
de rata nativa y 7,6 veces más elástico que el ePTFE. De
fluorescencia que proporciona una calidad de imagen
manera similar, la resistencia máxima a la tracción de los
excepcional para microscopía virtual más exigente. Es
andamios de seda fue más similar a la de la aorta rata
altamente automatizado y fácil de operar. El módulo de
que ePTFE. Finalmente, los datos de alargamiento
software ZEN slidescan que emplea está diseñado
indican que toleran un mayor estiramiento antes de la
específicamente para el flujo de trabajo de capturas de
rotura en comparación con los injertos de ePTFE. En el
diapositivas virtuales, mientras que las herramientas de
análisis de presión los valores obtenidos fueron
análisis de imágenes ZEN preparan los datos con
inferiores a los de la aorta de rata nativa, pero superaron
precisión [3].
en gran medida la presión arterial fisiológica. Además,
los injertos de seda resistieron una fuerza de extracción
de la sutura dentro del rango de los resultados publicados
anteriormente para los injertos de polímeros de diámetro
pequeño que también se implantaron en la posición de la
aorta abdominal de rata.
 En términos generales, las células endoteliales
interactuaron bien con la seda electrohilada, se adhieren
rápidamente y se extienden sobre la superficie de los
andamios después de solo 3 h en cultivo. Estas llegan a
formar una monocapa completa y funcional. Los ensayos
también demostraron la sorprendente compatibilidad
sanguínea. Se evidencia una menor formación de
coágulos en los andamios de seda con una adhesión de
glóbulos rojos insignificante, visible bajo microscopía
electrónica de barrido.
Después de establecidas las compatibilidades
mecánicas y biológicas de los andamios de seda estos
fueron implantados en la aorta abdominal de ratas,
demostraron un excelente manejo, se implantaron con
éxito en todos los animales, con explantaciones
realizadas a las 3, 6, 12 y 24 semanas. La supervivencia
fue del 94% para los injertos de seda, con solo una
muerte dentro de las 24h; sin embargo, el fracaso de
ePTFE fue mayor en 27% (6 de 22).
Las secciones transversales del injerto de seda
mostraron células endoteliales presentes a las 3 semanas,
con una cobertura completa de las regiones
anastomóticas a las 6 semanas y endotelio completo a las
12 semanas. El mayor factor determinante del fracaso del
injerto a largo plazo es la hiperplasia neointimal dentro
de la luz del injerto. Los resultados obtenidos sugieren
que la hiperplasia se estabiliza a las 6 semanas cuando la
endotelización también es casi completa y contribuye
potencialmente a la proliferación de SMC. La creciente
estabilidad de la neoíntima se inicia ya en la semana 6
después del implante. En los primeros momentos los
resultados muestran una respuesta inicial de cuerpo
extraño al injerto de seda; sin embargo, la respuesta
inflamatoria sugiere que los injertos se toleran muy bien
a medio plazo.
Fig. 2 (A) Esquema del procedimiento de implantación in vivo en rata. (B)
Injertos de control en la implantación y en los momentos de explantación a
las 6 y 24 semanas en la seda y (C) en el politetrafluoroetileno (ePTFE)
En conjunto, estos resultados ilustran la promesa de
que los conductos de seda electrohilada se utilicen como
vasos de pequeño diámetro, lo que representa una opción
rentable y sin células para los injertos sintéticos en uso
clínico. Las aplicaciones incluyen injerto de derivación
de arteria coronaria y aplicaciones vasculares periféricas.
D. Estudio en animales de mayor
tamaño
La experimentación animal es de suma importancia en el
desarrollo de injertos vasculares, para obtener resultados
preliminares antes de plantearse ensayos clínicos. Se han
utilizado diferentes modelos animales a lo largo de los años,
de hecho, las especies tienen un gran impacto en los
resultados, junto con la senescencia, que puede repercutir en
la edad del huésped e incluso en el número de pases de
células cultivadas, por lo tanto, es esencial no extrapolar los
resultados a humanos de manera demasiado directa. El hecho
de que se estudien los injertos muy cortos, a menudo debido
a limitaciones anatómicas en animales pequeños, también
sesga los resultados: los injertos a veces se ven
completamente endotelializados, aunque la parte media del
injerto probablemente no lo hubiera estado con un injerto
más largo. Por tanto, es sumamente importante elegir un
modelo adaptado a lo que se quiere observar y evaluar,
simulando los aspectos relevantes de la fisiología humana, y
no elegir un modelo animal con endotelización
transanastomótica rápida, ya que es irrelevante para los
humanos.
Alessandrino y col. publicó el primer estudio que
conocemos que informa sobre la implantación de injertos de
seda en animales más grandes: cerdos pequeños y ovejas.
Dicho estudio presenta las propiedades de SilkGraft, un
injerto vascular de pequeño calibre fabricado íntegramente
con fibroina de seda pura [6].
La arquitectura de la pared consta de dos capas
electrohiladas (interior y exterior) y una capa textil
intermedia perfectamente integradas a nivel estructural y
funcional. La capa textil fue diseñada para conferir un alto
rendimiento mecánico y resistencia al dispositivo, mientras
que las capas electrohiladas permiten mejorar sus
propiedades biomiméticas y la integración de los tejidos del
huésped. El acoplamiento de matrices de fibroina de seda
electrohiladas y textiles para la producción de escamas
tubulares multicapa se reconoce como un enfoque válido
para superar las limitaciones que pueden sufrir los scaffolds
cuando la biomimetización debe ir acompañada de un alto
nivel de rendimiento mecánico, como en el caso de los
injertos vasculares. Sin embargo, lograr fuerte adhesión entre
las capas de electrohilado y textil puede ser un desafío,
porque las superficies textiles sobre las que se depositan las
fibras de electrohilado no son homogéneamente planas. Los
riesgos asociados con una mala adherencia entre las capas
pueden tener consecuencias muy graves en el rendimiento de
un dispositivo implantable en vivo. Recubrir la superficie
con líquido iónico antes del electrohilado crea una densa red
de fuertes puntos de soldadura permitiendo superar este
problema. La pared multicapa de la estructura tubular se
comporta como si estuviera hecha de una sola pieza, al
tiempo que armoniza la alta resistencia a las tensiones
mecánicas de las microfibras sin mostrar ningún
deslizamiento o separación mutuos. De hecho, el objetivo
principal era fabricar una máscara multicapa caracterizada
por un fácil manejo durante la cirugía y, una vez implantado,
capaz de lograr un rendimiento biomimético de alto nivel con
los tejidos vivos circundantes, evitando la aparición de
cualquier desajuste biomecánico con la arteria nativa.
In vitro los estudios de interacción celular realizados con
células endoteliales de la arteria coronaria humana adultas
(HCAEC), células del músculo liso aórtico humano
(HASMC) y fibroblastos adventicios aórticos humanos
(HAAF) demostraron que las capas electrohiladas favorecen Fig. 3 Estructura morfológica y físico-química de SilkGraft. (A) Imagen de
un dispositivo SilkGraft. (B) Sección transversal del injerto que muestra las
la adhesión, la supervivencia y el crecimiento celular. Las dos capas de electrohilado interna y externa que encierran la capa textil
tendencias de marcadores metabólicos específicos, como el intermedia. (C) Detalle de (B) mostrando una ampliación de la estructura de
consumo de glucosa y glutamina y la liberación de ácido la pared. (D) Capa textil intermedia acoplada a una capa de electrohilado,
láctico en el medio, mostraron un metabolismo activo y visible en el fondo. (E) Nanofibras de la fibroína de seda en la capa de
electrohilado.
proliferación hasta por 20 días. Se investigaron los patrones
de expresión de citocinas y quimiocinas para evaluar la III. CONCLUSIONES
actitud proliferativa y proinflamatoria de las células, ninguno
de los tres tipos de células secretaba cantidades significativas
Existe una fuerte y creciente necesidad de injertos
de citocinas, además, tenían una producción reducida de
vasculares de pequeño diámetro. Durante los últimos 15
colágeno. Se observó una buena hemocompatibilidad
años, la seda se ha investigado como un candidato potencial
mediante ensayos de activación del complemento, hemólisis
para crear andamios para tales injertos, con un enfoque en la
y hematología. El ensayo piloto preliminar en cerdos y
endotelización, un mecanismo decisivo para la supervivencia
ovejas para evaluar el comportamiento funcional del injerto
de un injerto. Se han probado muchas técnicas de
vascular implantado identificó a la oveja como el modelo
procesamiento que fomentan sus propiedades mecánicas, la
animal más apto para los próximos ensayos preclínicos a
biocompatibilidad, la degradabilidad, la disponibilidad y el
medio y largo plazo sobre todo por la buena accesibilidad de
precio razonable. El desarrollo de andamios de seda
sus vasos sanguíneos y porque están más cerca de los
recubiertos dio resultados significativos y alentadores en
humanos en términos de velocidad de endotelización lenta y
términos de endotelización y adhesión de las células
posibilidad de implantar injertos más largos. Estas pruebas
endoteliales. Actualmente se estudian dos enfoques para
confirmaron que el dispositivo es fácil de manipular y coser
desarrollar injertos vasculares basados en seda: pre-
quirúrgicamente.
endotelización in vitro y endotelización in vivo. La primera
La tecnología de producción permite la fabricación de
opción permite implantar un injerto ya funcional pero
SilkGraft en una amplia gama de diámetros internos, además,
costoso y no disponible para emergencias. El segundo, tener
se caracteriza por una estructura ligera pero mecánicamente
injertos listos para ser implantados, es mejor en términos de
resistente. Es probable que el peso ligero traiga ventajas
disponibilidad y precio, pero implantar un injerto sin un
biológicas porque la carga de material extraño en el sitio de
endotelio funcional puede conducir a su falla.
implantación se reduce significativamente, evitando así
Independientemente del enfoque, si queremos lograr utilizar
tensiones excesivas en los tejidos circundantes durante la
la seda como material de prótesis vascular es necesario elegir
remodelación. El protocolo de fabricación incluye varios
cuidadosamente los parámetros experimentales. Al estudiar
tratamientos de lavado con soluciones hidroalcohólicas, que
los injertos acelulares, el modelo animal elegido para la
tienen como objetivo no solo lograr la eliminación completa
implantación es esencial, ya que los mecanismos de
de los coadyuvantes de procesamiento, sino también
endotelización difieren ampliamente de una especie a otra. Si
consolidar las nanofibras de fibroina de seda recién hiladas
se opta por injertos acelulares, es fundamental desarrollar
que aún son predominantemente amorfas y más sensibles a
andamios que incluyan factores que promuevan los
los efectos físicos. El índice de cristalinidad IR confirmó que
mecanismos de endotelización que realmente ocurren en los
las nanofibras del dispositivo final están completamente
seres humanos. En conclusión, todavía no existe una solución
cristalizadas, característica estructural es muy importante
para satisfacer la necesidad de injertos vasculares de
para la funcionalidad del dispositivo. Finalmente, es
diámetro pequeño, e incluso aunque se informan resultados
importante destacar que SilkGraft está diseñado como un
alentadores para los biomateriales a base de seda, todavía
dispositivo “listo para usar”, que ya no requiere la siembra
queda un largo camino por recorrer para desarrollar tejidos
previa con células, lo que elimina los retrasos y costos
de ingeniería basados en la seda.
relacionados y minimiza los pasos para la preparación del
injerto antes de la implantación.
REFERENCIAS
[1] CORDELLE, J. y S. MANTERO Insight on the endothelialization
of small silk-based tissue-engineered vascular grafts The
International Journal of Artificial Organs, 2020, ISSN.
[2] FILIPE, E. C., et al., Rapid Endothelialization of Off-the-Self
Small Diameter Silk Vascular Grafts. Rapid Endothelialization of
Off-the-Self Small Diameter Silk Vascular Grafts, 2018, 3, [fecha
de consulta: https://doi.org/10.1016/j.jacbats.2017.12.003
[3] Digitaliador de portaobjetos de microscopio AxioScan. Disponible
en: https://www.medicalexpo.es/prod/zeiss-microscopy/product-
104077-858602.html
[4] [Media Cybernetics Releases Image-Pro Premier 3D 9.2. 2016.
[Disponible en: https://www.prnewswire.com/news-
releases/media-cybernetics-releases-image-pro-premier-3d-92-
300291120.html
[5] Prism-GraphPad. Disponible en:
https://www.graphpad.com/scientific-software/prism/
[6] ALESSANDRINO, A., et al. Three-Layered silk fibroin tubular
scaffold for the repair and regeneration of small caliber blood
vessels: from design to in vivo pilot tests Frontiers Bioengineering
and Biotechnology, 2019, 7, ISSN.