TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO «Ciencia es verdad, técnica es libertad»

Instituto Tecnológico de La Paz Agosto – Diciembre 2021

Departamento de Ingenierías, Ingeniería Bioquímica
REPORTE DE PRÁCTICA 1 Y 2

Microscopía en células

Caro Martínez Yvonne

19310447, yvonnecaromartinez@gmail.com, K

Ruiz Romero Geovanni Alberto

Biología

Fecha: 2021-10-21

Resumen

La microscopía es esencial para la microbiología, en razón de que los organismos de tamaños muy
pequeños no pueden visualizarse a simple vista. Para poder obtener la visión adecuada del microscopio fue
necesario tener como objetivo identificar el microscopio óptico de campo claro y cada una de las partes que lo
conforman, comprendiendo la iluminación de Köhler para la aplicación en las muestras (músculo liso humano
y hongo rhizopus). Además de diferenciar las células eucariotas y procariotas. Obteniendo una visualización
de la conformación de las células, en algunos casos por medio de tinciones. Como lo fue en el método gram,
resultando gram negativo (rosa). La muestra para células eucariotas de agua estancada, dio efecto de tinción
con la agregación de azul metileno y Wright 10%, facilitando la diferenciación de las células. En el caso de
las muestras de célula animal, fueron implementadas por el laboratorio (paramecios y secta de testículos),
logrando observar tejidos y protozoarios. En la célula vegetal se tomó por muestra la epidermis de cebolla,
consistiendo en añadir solución fisiológica, teniendo la observación de divisiones celulares. Por consiguiente,
se identificaron los protozoarios de vida libre, por medio del microscopio. De igual manera en el frotis de
sangre las células fueron reconocidas con ayuda del efecto de Wright 10% y el microscopio. Por tanto, el
método que se empleó fue el correcto, comenzando el proceso desde del encendido del interruptor hasta el
movimiento del uso del tornillo micrométrico, implementándolo poder obtener una mejor percepción e
identificación de células.

Palabras clave

Microscopía, célula procariota, células eucariotas, protozoarios de vida libre, tejido.

Introducción y objetivos presentándose en los ojos, a través la percepción

de rayos luminosos que el exterior nos brinda
El sistema visual del ser humano está (Picquart, 2017).
encomendado a realizar la conversión de ondas
para la obtención de un espectro que sea visible,

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Existen ocasiones donde la materia no es
visible, a causa de su dimensión, siendo necesario
que se presente en un microscopio, ayudando a
observar su estructuración. El microscopio es un
instrumento que permite visualizar y estudiar
aquellas estructuras de un tamaño diminuto. Es
por ello que el microscopio de campo claro es
indispensable para la observación
microorganismos (Kremer, 2012).
Así pues, el microscopio de campo claro
está conformado por oculares, cabezal, revólver
donde incluye los objetivos (4x, 10x, 40x y 100x)
permitiendo que se tenga una observación más
detallada de la muestra, platina con sus perillas de
movimiento x-y, foco, base, condensador, tornillo
micrométrico y macrométrico (Montalvo Arenas,
2010).
Para poder examinar las muestras, en este
caso de; Músculo humano liso, hongo Rhizopus,
mucosa bucal, agua estancada, epidermis de
cebolla, secta de testículos humanos y sangre.
Siendo necesario realizar la preparación de
algunas de las muestras (Rogers, 2008).
En el caso de algunas muestras es
necesaria la tinción gram para la identificación de
bacterias, obteniendo resultados por medio del
color que se presenta al final. Confirmando que
las bacterias sean gram positivas (mayor cantidad
de peptidoglicano) son color violeta o bacterias
gram negativas color rosa (menor cantidad de
peptidoglicano) (Angulo Rodríguez, Galindo
Uriarte, Avendaño Palazuelos, & Pérez Angulo,
2011).
Se necesita que las muestras sean
presentadas en el microscopio, empleando la
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técnica de microscopía, definiéndola como el
estudio detallado de los componentes de bacterias,
células, tejidos y esporas (Rogers, 2008).
Donde la célula se define como la unidad
estructural de la vida, ya que contiene actividad
biológica limitada por membrana y capaz de
autoreproducirse en un medio libre. Existen dos
de
tipos de células, eucariotas y procariotas. Las
células eucariotas poseen un núcleo definido,
además de poseer membrana celular. Estas células
se subdividen en vegetales y animales. En cambio,
las células procariotas contienen su material
genético difuso en el citoplasma, rodeada por una
pared rígida (Karp, 2014).
Asimismo, el objetivo planteado es la
identificación de cada una de las partes del
microscopio de campo claro, aprendiendo a
realizar la iluminación de Köhler, observando
diversos especímenes. Especificando la
diferenciación entre los diferentes tipos de células,
reconociendo las diversas formas, estructuras y
tamaños que cada una de las muestras presenta
(Kremer, 2012).
Tener conocimiento sobre cada tipo de
célula y subdivisión a implicado la examinación
de cada muestra, por medio de la microscopía,
realizando la observación de la estructuración de
las células, comparando colores, formas y
tamaños (Montalvo Arenas, 2010).
Materiales y métodos
En la primera práctica se identificaron las
partes que conforman el microscopio como lo son
los oculares, pinza para portaobjetos, diafragma,
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condensador, fuente de luz, platina, tornillo papel de seda el objetivo 100x. Posicionando la
macrométrico, tornillo micrométrico, perillas de segunda muestra de hongos rhizopus siguiendo los
movimiento x-y de la platina, revólver donde mismos pasos de la primera muestra.
incluye los objetivos 4x, 10x, 40x y 100x. Seguido
Se comenzó la segunda práctica tomando
se limpiaron los lentes del microscopio.
una muestra de mucosa bucal con un hisopo.
Posteriormente se prendió el interruptor y se
Realizando un frotis en un portaobjeto limpio,
encendió la fuente de luz, después se ajustó el
dejando secar por unos minutos en una varilla de
reóstato a 10, ajustando el condensador hasta el
tinción y se fijó con gotas de metanol por un
tope. Se colocó en la platina la muestra 1, la cuál
minuto. Después se realizó el método gram
era músculo liso humano (la muestra ya estaba
iniciando con un extendido con cristal violeta al
preparada y fue proporcionada por el laboratorio).
1% por un minuto. Para luego lavar el extendido
Seleccionando el objetivo 10x, ayudando a
con agua destilada. Se cubrió la muestra con
adaptar la distancia interpupilar, con ayuda del
Lugol, dejando pasar un minuto, para nuevamente
dióper y el ojo izquierdo. Para luego cerrar el
lavar con agua destilada y con alcohol-acetona
diafragma de campo y después abrirlo, teniendo
1:1, hasta el momento en que dejara de salir
un contraste con el diafragma de iris. Además, se
colorante. Para otra vez lavar con agua destilada.
ajustó el tornillo macrométrico provocando que el
Posteriormente se añadió una gota de safranina
escenario de la platina se encontrara lo más alto
0.5%, dejando pasar 1 minuto y se lavó de nuevo
posible y por tanto el tornillo micrométrico se giró
con agua destilada, para poder esperar el momento
un poco. Enseguida la posición en la que se
en que la muestra se secara. Se colocó un
encontraba el portaobjetos se ajustó con las
cubreobjetos limpio sobre el extendido y se
perillas de movimiento x-y, girándolas hacia
observó en el microscopio (técnica de microscopia
izquierda y adelante situando la muestra sobre el
con los objetivos de 10x, 40x y al momento de
círculo de luz en la parte del centro, logrando
usar el objetivo 100x se añadió aceite de
observar la muestra 1. Luego se seleccionó el
inmersión sobre el cubreobjetos). Para la
objetivo 40x, haciendo girar el revolver. Con el
examinación de la muestra de agua estancada, se
tornillo micrométrico se trató de mejorar el
añadió en dos laminillas limpias una gota de agua
enfoque, girando este mismo y logrando visualizar
estancada en cada uno, dejando secar por unos
la muestra. Seguidamente se posicionó el
minutos. Se fijó con cuatro gotas de metanol hasta
revólver, de manera que quedara en el centro la
que fue cubierta la muestra, dejando secar por 1
muestra entre el objetivo 40x y 100x, para añadir
minuto esta solución. Enseguida se hizo una
una gota de aceite de inmersión. Posteriormente se
tinción en la lámina con azul metileno por 10
posicionó el objetivo 100x, moviendo un poco el
minutos y la otra con Wright al 10% por 10
tornillo micrométrico, consiguiendo la
minutos. Después se aplicó la técnica de
visualización de la muestra. Enseguida se giró el
microscopia en ambas muestras (usando objetivos
tornillo micrométrico tratando de bajar la platina y
4x, 10x, 40x y añadiendo aceite de inmersión en el
se retiró el portaobjetos. Asimismo, se limpió con

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cubreobjetos de la muestra, para después girar el morado y el espacio en color claro son vasos
revólver en el objetivo 100x). Se realizó la sanguíneos, por lo que se visualiza la cromatina de
observación de paramecios, la muestra ya se color rosa, con una tinción de hematoxilina y
encontraba preparada (proporcionada por el eosina. Aunque en la fig. 1 c), se logra ver de una
laboratorio). Posteriormente se observó en el manera más enfocada un miocito liso con un
microscopio con cada uno de los objetivos. Para tamaño más grande. Teniendo un aumento total
luego analizar la muestra de secta de los testículos (Tabla 1) empleado en el objetivo 10x de 650 𝜇𝑚,
humanos, dado que la muestra ya se encontraba en el objetivo 40x es de 2600 𝜇𝑚 y en 100x es de
preparada (otorgada por el laboratorio) y 6500 𝜇𝑚.
enseguida se observó con la ayuda del
a)
microscopio (objetivos 4x, 10x, 40x y 100x).
Prosiguiendo con la muestra de agua estacada,
donde se colocó una gota de agua estancada en
una laminilla, poniendo un cubreobjetos sobre la
b)
muestra, para poder realizar la observación en el
microscopio con aumento de 10x y 40x, logrando
visualizar la muestra. Por último, para la muestra
de sangre, se limpió el dedo con un algodón con
alcohol, extrayendo la muestra con una lanceta c)

estéril (desechable), colocando la gota de sangre

en un extremo de la laminilla portaobjetos. Por lo
tanto, la gota de sangre se extendió con ayuda de
otro portaobjetos en posición de 45° deslizándolo Fig. 1 Músculo liso humano; a) Objetivo 10x,
hasta el otro extremo. Se dejó secar el frotis, b) Objetivo 40x, c) Objetivo 100x.

fijando la muestra con metanol por 1 minuto y se

realizó la tinción con Wright al 10% por 10 Tabla 1 Aumentos totales de músculo liso humano.
minutos. Asimismo, se colocó un cubreobjetos y Aumento Aumento
Aumento Total
añadió una gota de aceite de inmersión sobre este Ocular Objetivo
65x 10x (65𝑥)(10𝑥) = 𝟔𝟓𝟎 𝝁𝒎
mismo. Teniendo una observación con el objetivo
65x 40x (65𝑥)(40𝑥) = 𝟐𝟔𝟎𝟎 𝝁𝒎
100x.
65x 100x (65𝑥)(100𝑥) = 𝟔𝟓𝟎𝟎 𝝁𝒎

En la muestra de hongos rhizopus (Fig.2)

se observó la forma del esporangióforo (parte
Resultados
alargada, en forma de tallo), el cual sostiene el
esporangio (forma circular) ambos de color café,
En la muestra de músculo humano liso
en algunos casos se ve color verde. Dentro del
(Fig.1) se identificaron capas de miocitos lisos los
esporangio se pueden observar las esporas más
cuales son los puntos de forma ovalada de color

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detalladas en la fig. 2 c). Por lo que su aumento El agua estancada con azul metileno (Fig.
total (Tabla 2) empleado en el objetivo 10x es de 4), se identificaron algunas células eucariotas
650 𝜇𝑚, en el objetivo 40x de 2600 𝜇𝑚 y en 100x como lo son los protozoarios y algunas amebas,
es de 6500 𝜇𝑚. que se encontraban en movimiento. Ambos con
tinción azul. En cambio, en la muestra de agua
a)
estancada con Wright 10% (Fig. 5) se
identificaron algunos flagelos, los cuales tenían
una estructura alargada, delgada, helicoidal con un
diámetro uniforme.
b)
a) c)

c)
b) d)

Fig. 2 Hongos rhizopus; a) Objetivo 10x, Fig. 4 Agua estancada con azul metileno; a) Objetivo 4x,
b) Objetivo 40x, c) Objetivo 100x. b) Objetivo 10x, c) Objetivo 40x, d) Objetivo 100x

Tabla 2 Aumentos totales de hongo rhizopus. a) c)

Aumento Aumento
Aumento Total
Ocular Objetivo
65x 10x (65𝑥)(10𝑥) = 𝟔𝟓𝟎 𝝁𝒎
65x 40x (65𝑥)(40𝑥) = 𝟐𝟔𝟎𝟎 𝝁𝒎
65x 100x (65𝑥)(100𝑥) = 𝟔𝟓𝟎𝟎 𝝁𝒎
b) d)
La muestra de mucosa bucal (Fig. 3) se
logró ver células procariotas dado las bacterias
tuvieron una tinción gram de color rosado, es
decir que contienen una menor cantidad de
Fig. 5 Agua estancada con Wright 10%; a) Objetivo 4x,
peptidoglicano. En la fig.3 b) se observa de
b) Objetivo 10x, c) Objetivo 40x, d) Objetivo 100x
manera más clara.
Como célula vegetal se tenía la epidermis
a) b) de cebolla (Fig. 6), mostrándose con una tinción
morada, donde se alcanzaba a ver con color azul el
material genético de cada una de las células
eucariotas, encerradas por una membrana
Fig. 3 Mucosa bucal; a) Objetivo 40x, b) Objetivo 100x
mostrada con color morado más intenso.

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a) c) b) d)

b) d)
Fig. 8 Paramecios; a) Objetivo 4x,
b) Objetivo 10x, c) Objetivo 40x, d) Objetivo 100x

Dentro de protozoarios de vida libre fue

Fig. 6 Epidermis de cebolla; a) Objetivo 4x, tomada en cuenta con la muestra de agua
b) Objetivo 10x, c) Objetivo 40x, d) Objetivo 100x estancada (Fig. 9). Estas se derivaron en células
Como célula animal se tomó la muestra eucariotas, por lo que ya han sido mencionadas las
de secta de testículos humanos (Fig. 7). Donde se partes identificadas.
identificaron los túbulos seminíferos, los cuales se
a) b)
conformaban por espermátidas, músculo liso
alrededor de cada una, siendo notorio con color
morado y células de Leydig. También como célula
animal se analizaron los paramecios (Fig. 8),
Fig. 9 Agua estancada; a) Objetivo 10x, b) Objetivo 40x
observando unas estructuras en forma casi ovalada
En la muestra de sangre (Fig. 10) se
con dos picos que contenían un macronúcleo de
observó que eran células eucariotas,
color rosa y el resto de la estructura color azul.
especificándose como leucocitos, aunque unos se
a) c) encontraban un poco más obscuros que otros.

b) d)

Fig. 10 Sangre observada con objetivo 100x

Discusión
Fig. 7 Secta de testículos humanos; a) Objetivo 4x,
b) Objetivo 10x, c) Objetivo 40x, d) Objetivo 100x
Poder tener una herramienta básica para
la observación de muestras de carácter
a) c) microbiano, es decir un microscopio, ayuda a
tener una mayor facilidad de determinación y
observación, teniendo una ampliación de imagen,
ya que son fácilmente observables las muestras
con técnicas microscópicas, como es el contraste
de fases (Picquart, 2017) (Coquart, 2013)

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El sistema del microscopio óptico de
campo claro ha funcionado con la ayuda de los
rayos de luz que se dirigían hacia la muestra de
músculo liso humano (Fig. 1) y la muestra de
hongos rhizopus (Fig. 2) pasando por el
condensador provocando que esta misma luz sea
concentrada. Mediante el uso de los objetivos que
ayudan a ampliar la imagen en los oculares (Clark,
Martinko, Madigan, & Dunlap, 2015) (Sánchez,
Rita, García, & Ninfa, 2015).
El hecho de realizar la microscopía hace
necesario pasar por un proceso de investigación
científica, es decir tener conocimiento del
procedimiento, haciendo una indagación sobre el
tema, ya que el principal encargado de que sea
realizado este proceso, es el científico. El
científico se ocupa en una investigación
determinada, visto que el microscopio es un
equipo de vital importancia en la investigación,
referente a la composición de la muestra (Kremer,
2012) (Baena Paz, 2017).
En la muestra de músculo liso humano
(Fig.1), se encontraron miocitos lisos. Estos tienen
la capacidad de contraerse, formado por haces en
paralelo, es decir son células musculares lisas,
organizadas en grupos que hacen un tejido
conjuntivo fibroso. La longitud que se tiene es de
20 mm y 500 mm. Además de formar parte de la
porción contráctil de la pared de diversos órganos
del cuerpo humano (García Mauriño, Carbonell,
Calvo, De Vega, & Sánchez, 2016).
Comparada con la muestra de hongo
rhizopus (Fig. 2) era más variado lo que se
presentaba, dicha visualización es más clara en la
fig. 2 c), ya que el espécimen tenía esporas, siendo
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más detallado su contenido. Por lo tanto, la
iluminación de Köhler es necesaria para luz que se
presenta al momento de visualizar las muestras.
Dado que no influye si la muestra es muy obscura
o clara. En ambos se logra ver el espécimen
(Audesirk, Audesirk, & Byers, 2013) (Rogers,
2008).
Las células son pequeñas cavidades
regulares, dentro de ello son derivadas las células
procariotas, tienen paredes celulares, que se
ensamblan a partir de polisacáridos complejos
unidos con otras sustancias en una supramolecular
que rodea completamente la célula (Dávila &
McKay, 2014).
La estructuración de la muestra de
mucosa bucal (Fig. 3), se visualiza de una manera
distinta a las demás muestras. Puesto que se
observaron células procariotas. Las bacterias se
encontraban con una tinción gram negativa.
Debido a que la sustancia para este método está
compuesta por un componente cromóforo y un
auxócromo. Como resultado es provocado este
teñido (color rosa), debido a que era una cápsula
bacteriana y la tinción fue por la presencia de
menor cantidad de peptidoglicano. Este
polisacárido ayuda a fortalecer la pared celular
que se encuentra (Angulo Rodríguez, Galindo
Uriarte, Avendaño Palazuelos, & Pérez Angulo,
2011) (Kremer, 2012) (López Jácome, y otros,
2013).
Otro tipo de célula es la eucariota, son
aquellas que suelen ser hasta 1000 veces más
voluminosas que las procariotas. Además, el ADN
es 1000 veces más abundante. Para el análisis de
esta célula se tomó el agua estancada, conforme a
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ello se derivaron dos portaobjetos. En uno se
añadió Wright 10% (Fig. 5), donde se observó
cada flagelo, caracterizándose delgada y diámetro
uniforme. En cambio, en el otro portaobjeto con
azul metileno (Fig. 4) se reconoció el tamaño y
estructuración de la célula eucariota, visualizando
algunas amebas que se encontraban
movimiento, a causa de las corrientes en el
citoplasma. La tinción de azul metileno es
necesaria para que sean vista desde los oculares la
muestra. Puesto que las células normalmente no
tienen color. Esta tinción sucede porque las
células se encuentran con una carga negativa y la
tinción actúa como carga positiva, debido a ello se
observa mejor el detallado de la estructura,
logrando observar la membrana celular,
presentándose en ambos de diferente forma. Con
Wright 10% se presentó de una manera alargada,
en cambio con azul metileno fue circular, ya que
interfieren las distintas bacterias (Cano Pulgarín,
2014) (Cortez, y otros, 2017).
Dentro de las diferencias de la célula animal y
vegetal fue muy notoria la coloración de la
muestra. Puesto que la muestra de epidermis de
cebolla (Fig.6), representando la célula vegetal era
completamente color morado separado
membranas y se lograban ver más células en
conjunto, incluyendo el material genético que
contenían, se hacía diferenciar la división celular,
dado que es necesario para el crecimiento de
células y desarrollo (Audesirk, Audesirk, & Byers,
2013).
Para el análisis de célula animal, se
tomaron dos muestras, una muestra de secta de
testículos humanos (Fig. 7), donde se encontraron
túbulos seminíferos, los cuales dan lugar donde se
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lleva a cabo el proceso de espermatogénesis.
También se analizó la muestra de paramecios
(Fig. 8), con tonalidad rosa el núcleo y azul el
resto de la célula. En el caso de la célula vegetal
fue encontrado el cloroplasto y la membrana
celular. En cambio, la pared celular en la célula
en animal no se derivó, puesto que no poseen pared
celular. Además de no contener cloroplastos y
contenían vacuolas pequeñas. Por consecuente si
se lograron identificar estas mismas (Abbas,
Lichtman, & Pillai, 2018) (Bassas, 2001).
Dentro de protozoarios de vida libre (Fig.
9) se encontraron las mismas características que
en la tinción con Wright 10% y azul metileno, a
excepción de que esta muestra no contenía
ninguna tinción y la observación de los
protozoarios tenía color gris. Por lo que ya han
sido mencionadas las partes identificadas
(Challoner, 2006).
El análisis del frotis sanguíneo (Fig. 10)
se observó que eran células sanguíneas,
especificándose como leucocitos, sirviendo como
centinelas clave y potentes defensores contra
agentes patógenos invasores (Karp, 2014).
por
Conclusiones
En conclusión, se demostró que se
observaron muestras por medio del microscopio
óptico de campo claro. Identificando cada una de
las partes que lo conforman. Comprendiendo la
forma en la que se debe de enfocar las muestras
(músculo liso humano y hongo rhizopus).
Obteniendo una visualización de diferentes tipos
de células. Siendo específicas, ya que se mostraba
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Patria. doi: 978-607-744-748-1
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equence=1&isAllowed=y
la célula vegetal se encontraron las estructuras,
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ITLP – Ingeniería bioquímica [2021] - 10