UNIVERSIDAD POLITÉCNICA

DEL ESTADO DE MORELOS

DETERMINACIÓN DE
CONCENTRACIONES DE MUESTRAS
PROBLEMA MEDIANTE
ESPECTROFOTOMETRÍA.

PRÁCTICA 4

HARO FURLONG VALERIA PAOLA

3°D

ANÁLISIS DE BIOPRODUCTOS

FECHA: 07 DE AGOSTO, 2020.

TÍTULO: Determinación de concentraciones de muestras problema mediante
espectrofotometría.

INTRODUCCIÓN
El estudio a nivel bioquímico de cualquier biomolécula requiere la utilización de técnicas
analíticas que permitan su determinación cualitativa y cuantitativa, así como su
caracterización físico-química y biológica. Uno de los métodos más sencillos, accesibles,
útiles y utilizados es la espectroscopía. La Espectrofotometría es una de las técnicas
experimentales más utilizadas para la detección específica de moléculas. Se caracteriza
por su precisión, sensibilidad y su aplicabilidad a moléculas de distinta naturaleza
(contaminantes, biomoléculas, etc) y estado de agregación (sólido, líquido, gas).
Se pueden identificar y cuantificar biomoléculas en solución y en muestras biológicas, con
el empleo 1 de reactivos específicos que reaccionan con el compuesto a analizar y forman
un producto coloreado que permite detectarlo en muestras complejas. El fundamento de la
espectroscopía se debe a la capacidad de las moléculas para absorber radiaciones, entre
ellas las radiaciones dentro del espectro UV visible. Las longitudes de onda de las
radiaciones que una molécula puede absorber y la eficiencia con la que se absorben
dependen de la estructura atómica y de las condiciones del medio (pH, temperatura, fuerza
iónica, constante dieléctrica), por lo que dicha técnica constituye un valioso instrumento
para la determinación y caracterización de biomoléculas. Las moléculas pueden absorber
energía luminosa y almacenarla en forma de energía interna. Esto permite poner en
funcionamiento ciclos vitales como la fotosíntesis en plantas y bacterias. Cuando la luz
(considerada como energía) es absorbida por una molécula se origina un salto desde un
estado energético basal o fundamental, a un estado de mayor energía (estado excitado). Y
sólo se absorberá la energía que permita el salto al estado excitado. Cada molécula tiene
una serie de estados excitados (o bandas) que la distingue del resto de moléculas. Como
consecuencia, la absorción que a distintas longitudes de onda presenta una molécula (esto
es, su espectro de absorción) constituye una seña de identidad de la misma. Por último, la
molécula en forma excitada libera la energía absorbida hasta el estado energético
fundamental.
La transmitancia nos da una medida física de la relación de intensidad incidente y
transmitida al pasar por la muestra. La relación entre %T y la concentración no es lineal,
pero asume una relación logarítmica inversa. La absorbancia (A) es un concepto más
relacionado con la muestra puesto que nos indica la cantidad de luz absorbida por la misma.
OBJETIVOS
General:
Determinar la concentración de azúcares mediante una curva de calibración con los datos
analizados.
Específico:
• Determinar si es aceptable el coeficiente de correlación de la curva de calibración.
• Calcular las concentraciones con la ecuación de la curva.

METODOLOGÍA

1. Se preparó una curva de calibración de Glucosa. Las concentraciones requeridas

fueron: 10, 20, 40, 60, 80 y 100 mg/mL (considere 10 mL de volumen final)..
2. Se colocó en un tubo 1.2 mL de cada concentración y se incluyó un blanco (sólo
H O).
2

3. Se agregaron 3 mL de H SO concentrado a cada tubo y se homogenizó.

2 4

4. Se colocaron los tubos en hielo durante 2 minutos.

5. Se leyeron en el espectrofotómetro a 315 nm.

RESULTADOS

Concentración
Concentración
Absorbancia real de azúcares
(mg/mL)
(mg/mL)
0 0
10 0.466 7.99
20 0.653 21.34
40 0.871 36.91
60 1.225 62.20
80 1.578 87.41
100 1.661 93.34
Muestra 1 0.532 12.70
Muestra 2 1.056 50.13
Muestra 1

0.532 = 0.014x+0.3542

x= 0.532-0.3542/0.014

x= 12.70

Muestra 2

1.056 = 0.014x+0.3542

x= 1.056-0.3542/0.014

x= 50.13
CONCLUSIÓN
En base a los resultados obtenidos de la curva de calibración, se puede observar que
muestra un coeficiente de correlación de 0.9807. Para que este valor sea aceptable, tiene
que ser de 0.99 aproximadamente; al no tener un valor cercano a este, lo mas
recomendable es que se vuelva a realizar la metodología, para así poder obtener un
resultado más preciso y exacto. Esto debido a que se pudieron haber cometido algunos
errores al momento de realizar el proceso.
Se cumplen con los objetivos planteados de la determinación de concentración de azúcares
mediante una curva de calibración con los datos analizados, y el análisis del coeficiente de
correlación obtenido.

BIBLIOGRAFÍA
• Nieves Abril Díaz, J. A.-V. (s.f.). Espectrofometría: Espectros de absorción y
cuantificación colorimétrica de biomoléculas. Obtenido de www.uco.es:
https://www.uco.es/dptos/bioquimica-
biolmol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMETRIA.pdf

• Harris, D. C. (2007) Analisis Químico cuantitativo sexta edición. Reverté,SA.