22/03/2017

CLASES TEÓRICAS:
Viernes de 11:00 a 13:00 hs. (Campus Ntra. Sra. del PILAR)

TRABAJOS PRÁCTICOS:
Martes (INTA Castelar)

Com. A: 09:00 a 11:00 hs.

Com. B: 11:00 a 13:00 hs.

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DIRECCIONES ÚTILES:
http://helminto.inta.gob.ar/alumnos.htm

DIAGNÓSTICO PARASITOLÓGICO

OBJETIVO:
Determinar la presencia de parásitos adultos o de diferentes
estadios evolutivos.

En PARASITOLOGÍA, el análisis de materia fecal es el exámen

más frecuente, donde se pueden encontrar numerosos
parásitos, y con mayor frecuencia sus huevos.

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MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO

1. Métodos directos:
Búsqueda de los parásitos, sus huevos, ó sus larvas y posterior
identificación mediante exámenes macroscópicos ó
microscópicos.

Técnicas:
a) Flotación / sedimentación
b) Biológicas (inoculación experimental)

2. Métodos indirectos:
Test serológicos

EXAMEN DE MATERIA FECAL

1. MACROSCÓPICO:
Consistencia, color, sangre, moco, parásitos

2. MICROSCÓPICO:
Cualitativo:
a) Frotis directo
b) Enriquecimiento
(flotación y sedimentación)
http://cdigital.uv.mx/bitstream/123456789/30786/1/MendezManuel.pdf

Cuantitativo:
McMaster modificado (HPG: huevos por gramo)

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TOMA Y REMISIÓN DE MUESTRAS

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Ciclo biológico de los nematodes gastrointestinales

Entradas y Salidas:
Entran: L3
Salen: Huevos
Día 21

L3 L4 Adultos
Día 1
Huevos

L3

L3 L2 L1
10 DIAS

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DIAGNÓSTICO DE GASTROENTERITIS VERMINOSA:

Toma y remisión de muestras

1. Preparar el material necesario para la toma de muestra.

2. Confeccionar protocolo:

• Fecha
• Establecimiento
• Formulario de antecedentes • Profesional actuante
• Material remitido
• Explotación
• Anamnesis • Edad y cantidad de animales

3. Extracción de muestras

Algunas consideraciones de la toma de

muestra de materia fecal

• LA MUESTRA DEBE SER INDIVIDUAL

• TOMAR LA MUESTRA RECIENTEMENTE EMITIDA

(consultorio: termómetro)

• No mezclar (contaminar) la muestra con ORINA

• Análisis seriado (3 deposiciones de 3 días seguidos)

• Frasco limpio y desengrasado
• Formol al 5%
• Cucharitas plásticas o bajalenguas

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OBTENCIÓN DE LAS MUESTRAS DE MATERIA FECAL

EXTRACCIÓN DE LA MUESTRA DE MATERIA FECAL

SE REGISTRA LA IDENTIFICACIÓN DEL ANIMAL

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SE IDENTIFICA LA MUESTRA

• NO USAR CONSERVANTES QUÍMICOS (formol)

• ENVÍO en cajas de telgopor REFRIGERADAS

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PARA DIAGNÓSTICO DE HEMOPARÁSITOS.

• Obtención:
Venas marginal de la oreja o yugular.

• Envío:
Anticoagulada (EDTA) y refrigerada.

Para diagnóstico de TRICHOMONIASIS

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TRICHOMONIASIS
Enfermedad parasitaria producida por el protozoario Trichomona foetus.
El toro enfermo (portador asintomático crónico) transmite la enfermedad
durante el coito. También puede transmitirse a través del semen congelado.

www.veterinaria.uanl.mxx

Pérdidas económicas:
• Muerte del embrión (momificados), abortos (1° tercio de la preñez).
• INFERTILIDAD.

1- Toros
2- Vacas
3- Fetos abortados

www.engormix.com

• Obtención de prepucio:
- Raspado
- Lavado
• Envío:
- Hisopado
Medios de cultivo

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Ácaros de la sarna Miiasis

Piojos Garrapatas

SARNA Raspado de piel con vaselina

• Garrapatas Formol al 10%

• Piojos
• Miiasis

Ácaros productores de la sarna Psoróptica

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SARNA PSORÓPTICA

SARNA PSORÓPTICA

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Técnicas de diagnóstico más empleadas

en el laboratorio de Parasitología

• HPG (recuento de huevos por gramo de materia fecal)

• OPG (recuento de ooquistes por gramo de materia fecal)
• Cultivo de larvas (Técnica de Corticelli-Lai)
• Técnica de flotación de Willis
• Baermann
• Dennis, Stone y Swanson
• Necropsia parasitaria
• Lavado de pasto

EXÁMEN DE MATERIA FECAL

MACROSCÓPICO

MICROSCÓPICO
Cualitativo
Directo
Enriquecimiento
 Flotación
 Sedimentación

Cuantitativo
McMaster modificado (HPG) (ovinos/bovinos)
Parasitómetro

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Técnica del HPG

(Huevos por gramo de materia fecal)

Técnica del HPG

• Muestreo individual
• Método cuantitativo
• Indica el grado de contaminación de las pasturas

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Técnica del HPG:

elementos para su realización

Técnica del HPG:

metodología
Pesar 5 g de materia fecal

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Técnica del HPG: metodología

1 2

3 4

Técnica del HPG: metodología

Cámara de McMaster

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Técnica del HPG

Haemonchus, Ostertagia, Trichostrongylus

Cooperia, Bunostomum

Nematodirus
Strongyloides papillosus
Trichuris
Cestodos

Huevo de Nematodo Gastrointestinal Indiferenciado

Doble membrana

Cámara de aire

Células blastomerales

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Técnica del HPG

Trichuris

Cestodos
Nematodirus

Técnica del HPG: interpretación

El número de huevos eliminados en materia fecal depende:

1. Género de parásitos: poseen diferente “potencial biótico”

Haemonchus: 10.000 huevos por día
Ostertagia y Trichostrongylus: 200 a 300 huevos por día

2. Edad de los animales: hasta 15 meses

3. Estado inmunitario de los animales:

• Stress
• Desnutrición
• Enfermedades concomitantes

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¿ Cómo se expresa el valor final del HPG ?

El número de huevos contados (N) se multiplica por:

Lectura de 2 celdillas Lectura de 4 celdillas

BOVINOS N x 14 Nx7

OVINOS N x 20 N x 10

BOVINOS:
Si se leen 4 celdillas (2 ml) de la Cámara de McMaster

2 ml N huevos
70 ml 70 x N / 2: 35 N

5 gramos 35 N
1 gramo 35 N x 1 g / 5 g: 7 N

Si se leen 2 celdillas (1 ml) de la Cámara de McMaster

1 ml N huevos
70 ml 70 x N / 1: 70 N

5 gramos 70 N
1 gramo 70 N x 1 g / 5 g: 14 N

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Técnica del OPG

(Oooquistes de coccidios por gramo de materia fecal)

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TÉCNICA DE FLOTACIÓN
DE WILLIS

Técnica de flotación de Willis

 Método cualitativo y de concentración

• Principio: recuperación de los huevos y ooquistes por flotación.

• Diagnóstico de huevos de nematodes GI y coccidiosis.

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Técnica de flotación de Willis

Metodología:

1- Triturar 5 g de heces en un mortero con solución salina

sobresaturada.
2- Filtrar con un colador común.
3- Verter el contenido en un tubo de Willis de 20 cc y dejar
reposar 30’.
4- Colocar un portaobjetos encima del tubo.
5- Invertir el portaobjetos y observar al microscopio.

Técnica de flotación de Willis

Metodología:

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CULTIVO DE LARVAS
(Técnica de Corticelli-Lai)

Técnica de cultivo de larvas (Corticelli-lai)

• Método cualitativo
• Permite diagnosticar los géneros de las L3 infectivas de NGI

• Cámara húmeda
• Placas de Petri
• Duración: 10 días a temperatura ambiente o estufa

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Técnica de cultivo de larvas (Corticelli-lai)

A los 10 días, se invierte la placa de Petri chica,

y por hidrotropismo las L3 se dirigen hacia el agua

Técnica de cultivo de larvas (Corticelli-lai)

Las L3 obtenidas del cultivo se concentran por sedimentación.

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Larva 3 obtenida mediante la Técnica de Corticelli y Lai

(coloración con Lugol)

Larva 3 obtenida mediante la Técnica de Corticelli y Lai

(coloración con Lugol)

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Estructura de una
L3 infectiva de nematodes
gastrointestinales

Clave para identificación de larvas infectantes de

nematodes gastrointestinales de bovinos y ovinos
Strongyloides Bunostomum Ostertagia Haemonchus Cooperia Nematodirus
papillosus Spp.

Trichostrongylus

Oesophagostomum y
Chabertia

http://cnia.inta.gov.ar/helminto/Niec/fig4.htm

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TÉCNICA DE BAERMANN

Técnica de Baermann

• MÉTODO CUALITATIVO
• PRINCIPIO:
Por hidrotropismo +, las larvas pasan de las heces hacia el agua.

• Metacromáticas
Características de las larvas Azul de metileno
de Dictyocaulus spp.:

Lila
• Cola corta
• Lazy (perezosas)

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Técnica de Baermann
Metodología:

• En el embudo lleno de agua tibia se coloca una

malla metálica de 150 µm.

• Sobre la misma se distribuye una capa delgada

de materia fecal fresca, de manera que las heces
queden cubiertas por el agua.

• Recoger el sedimento en 24 h (L1).

• Colorear con “azul de metileno” y leer con lupa.

Técnica de Baermann
Metodología:

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TÉCNICA DE
DENNIS, STONE y SWANSON

Técnica de Dennis Stone y Swanson

Fasciola hepatica y Macracanthorynchus hirudinaceus

Método cualitativo
Principio: recuperación de los huevos por sedimentación

Fasciola hepatica adulta

Huevos de Fasciola hepatica

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Técnica de Dennis, Stone y Swanson

Metodología:

1- Triturar 5 g de heces (ovinos) y 10 g (bovinos y equinos)

en un mortero con agua corriente.

2- Filtrar con un colador común.

3- Verter en un vaso cónico y completar con 500 cc de agua.

4- Dejar reposar 10’, sifonar, y completar hasta 500 cc con agua.

5- Repetir el paso anterior por 5’ y luego por 3’.

6- Tomar el sedimento y leer con lupa agregando lugol.

Técnica de Dennis, Stone y Swanson

Metodología:

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TÉCNICA DE
NECROPSIA PARASITARIA

NECROPSIA PARASITARIA

APARATO GASTROINTESTINAL

Es el método más preciso porque nos permite recuperar,

contar e identificar los géneros de parásitos presentes.

Se estudian cada órgano por separado.

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NECROPSIA PARASITARIA:
separación de cada uno de los compartimientos

NECROPSIA PARASITARIA

APARATO GASTROINTESTINAL

• Se recupera 1 litro del lavado de cada órgano

• Se adiciona formol al 10%
• Se envía el cuajar “refrigerado” para realizar la técnica
de maceración para diagnóstico de “ostertagiosis inhibida”

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1 2
3 4

NECROPSIA PARASITARIA: lavado del cuajar

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NECROPSIA PARASITARIA: lavado del cuajar

Observación de vermes adultos

(Haemonchus placei)

Edema, congestión y petequias de la mucosa del cuajar

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OSTERTAGIOSIS
Nódulos de Ostertagia ostertagi en el cuajar de bovino

Lesiones leves (score I) Lesiones severas (score III)

Ostertagiosis inhibida: “Técnica de maceración del cuajar”

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1 2

3 4

NECROPSIA PARASITARIA: lavado intestinal

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NECROPSIA PARASITARIA
HÍGADO

• Se realiza inspección, palpación y cortes.

• Se observa permeabilidad de la vesícula biliar

(Fasciolosis crónica).

NECROPSIA PARASITARIA
HÍGADO

Ejemplar adulto de Fasciola hepatica

Fasciola hepatica: adultos y estadíos juveniles (fasciolómulos)

Quistes hidatídicos: vesícula con líquido a presión

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NECROPSIA PARASITARIA
PULMÓN

Dictyocaulus viviparus (bovinos)

Dictyocaulus filaria (ovinos)

NECROPSIA PARASITARIA
PULMÓN

Dictyocaulus spp.

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TÉCNICA DE
LAVADO DE PASTO

1. Recolección de la muestra

2. Lavado

3. Observación y conteo de las larvas

Técnica de “Lavado de pasto”

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Técnica de “Lavado de pasto”:

recolección de la muestra

• Se hace temprano en la mañana

• El área elegida se divide en rutas
• Se corta un puñado de pasto con tijera (1 puño)
• Se procede al lavado

Técnica de “Lavado de pasto”:

• Cada muestra se sumerge en balde con agua y se deja por 24 hs.

• Se extrae el pasto y se deja secar hasta peso constante.
• Se deja sedimentar el agua en el balde por 1 hora.
• Se sifona hasta que queden 2 litros en el balde y se transpasa a
una probeta de 2 litros.

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Técnica de “Lavado de pasto”:

• Se concentran las larvas por sifonación y sedimentación hasta un

volumen de 250 cc.
• 1º centrifugación a 2000 rpm durante 30’ con agua.
• 2º centrifugación a 2000 rpm durante 30’ con Benbrook.
• Se lleva a 2 litros de agua y se procede nuevamente a concentrar por
sifonación y sedimentación.
• Se concentra hasta obtener un volumen de 10 cc.
• Se procede a la lectura.

Técnica de “Lavado de pasto”:

observación y conteo de L3

• Se lleva a 1 cc y se toman 3 muestras de 40 µl c/u

• Se colocan en portaobjetos y se agrega lugol
• Se cuentan las L3
• Se promedian los conteos y se calcula el N° L3/kg de pasto seco

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Niveles de infección de las pasturas por NGI y potencial de

pérdidas productivas en las distintas categorías

Fuente: Steffan P., Fiel C., Ferreyra D.

Niveles de infección de las pasturas por NGI y potencial de

pérdidas productivas en las distintas categorías

Fuente: Steffan P., Fiel C., Ferreyra D.

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