Técnicas de diagnóstico parasitológico

Toma de muestras de materia fecal en rumiantes:

1) Las muestras se deben tomar directamente del recto utilizándose una bolsa
de polietileno.
2) Una vez tomada la muestra, se invierte la bolsa y se extrae el aire por
completo.
3) Las muestras se conservan refrigeradas hasta el arribo al laboratorio.

Técnica de HPG (recuento de huevos de nematodes gastrointestinales por

gramo de materia fecal):

Se utilizará la técnica de Mc Master modificada

BOVINOS:

1) Se colocan 3 g de materia fecal en un mortero y se mezclan gradualmente

con 57 cm3 de solución sobresaturada de cloruro de sodio (densidad 1200)
(dilución: 1/20).
2) Se vierte el contenido en un vaso de precipitado y se coloca sobre agitador
magnético.
3) Con pipeta Pasteur y tetina se toma contenido del vaso en agitación y se
carga la cámara de conteo (cámara INTA) que tiene 4 retículos de 0.5 cm3 de
capacidad cada uno, lo que da un volumen total de 2 cm3 con la precaución
que no quede excesiva cantidad de burbujas de aire, para lo cual resulta
práctico humedecer la cámara antes de su llenado.
4) Se deja reposar unos minutos y se transfiere al microscopio para su lectura.
Se cuentan todos los huevos de nematodes de los cuatro retículos y se
multiplican por el factor 10, lo que permite expresar el resultado en huevos por
gramo (h.p.g.) de materia fecal. En caso de contar 2 retículos, se multiplica el
número de huevos contados por el factor 20.

Este procedimiento también se utiliza para la determinación del recuento de

ooquistes de coccidios por gramo de materia fecal (técnica de OPG).

OVINOS:

1) Se coloca 1 g de materia fecal en un mortero, se mezclan gradualmente con

59 cm3 de solución sobresaturada de cloruro de sodio (densidad 1200)
(dilución: 1/60).
2) Se vierte el contenido en un vaso de precipitado y se coloca sobre agitador
magnético.
3) Con pipeta Pasteur y tetina se toma contenido del vaso en agitación y se
carga la cámara de conteo (cámara INTA) que tiene 4 retículos de 0.5 cm3 de
capacidad cada uno, lo que da un volumen total de 2 cm3 con la precaución
que no quede excesiva cantidad de burbujas de aire, para lo cual resulta
práctico humedecer la cámara antes de su llenado.
4) Se deja reposar unos minutos y se transfiere al microscopio para su lectura.
Se cuentan todos los huevos de nematodes de los cuatro retículos y se
multiplican por el factor 30, lo que permite expresar el resultado en huevos por
gramo (h.p.g.) de materia fecal.

Técnica de Flotación de Willis

1) Pesar 5 gr de materia fecal y colocar en un mortero para disgregar la

muestra con solución hipertónica de ClNa.
2) Volcar a un tubo de vidrio de 20 cc hasta formar un menisco de convexidad.
3) Colocar un cubreobjetos y dejar reposar por 15-20 minutos
4) Colocar el cubreobjetos sobre un portaobjetos y observar con microscopio.

Este procedimiento se utiliza para determinar presencia de huevos de

nematodes en pequeños animales, equinos, rumiantes y cerdos y también para
identificar a través del tamaño de las diferentes especies de coccidios
presentes en la materia fecal.

Técnica de Baermann

Procedimiento A

1) Envolver en gasa una cantidad aproximada de 5 gr de materia fecal y atar

con piolín.
2) Sumergir en un frasco con agua y dejar por 24 hs.
3) Retirar la muestra envuelta en la gasa y descartar.
4) Sifonar el sobrenadante y colocar el sedimento en una placa de Petri.
5) Agregar 2 gotas de Azul de Metileno y observar con lupa esterescópica.

Este procedimento se utiliza para determinar la presencia de nematodes que se

alojan en el aparato respiratorio (género Dictyocaulus).

Procedimiento B (con aparato de Baermann)

1) Se utiliza el aparato de Baermann que consiste en un embudo de vidrio

grueso o de plástico de 20 cm de diámetro con un tallo provisto de un caño
de goma cerrado por una pinza de Mohr.
2) Llenar el embudo con agua tibia (40°C) y colocar una malla metálica de 100
meshes de abertura.
3) Colocar sobre la malla 10 gr de materia fecal fresca de forma tal que
queden las heces cubiertas con agua.
4) Se deja a temperatura ambiente por 24 hs y se recoge el líquido abriendo la
pinza de Mohr.

Este procedimiento se utiliza para determinar presencia de nematodes

pulmonares (teñir previamente con azul de Metileno) y también se utiliza para
la recuperación de L3 de los coprocultivos.
Técnica de Dennis-Stone-Swanson

1) Pesar 5 gr de materia fecal y colocar en un mortero para disgregación.

2) Agregar agua y colar en un vaso cónico de 500 cc.
3) Completar volumen con agua y dejar reposar por 10 minutos.
4) Sifonar el sobrenadante y completar nuevamente volumen.
5) Dejar reposar por 5 minutos y sifonar nuevamente.
6) Completar volumen y dejar reposar por 3 minutos.
7) Sifonar y colocar el sedimento en una placa de Petri con el agregado de 2
gotas de Lugol.
8) Observar en lupa estereoscópica.

Este procedimiento se utiliza para determinar la presencia de Fasciola hepatica

y Macracanthorrinchus arundinaceus en materia fecal.

Técnica de lavado de pasto

a) Toma de muestras

1) Las muestra se deben recolectar en las horas tempranas del día, casi al
amanecer cuando la mayoría de las larvas se encuentran sobre los tallos y
hojas de las plantas.
2) El área elegida se divide por rutas en forma de W o N.
3) Los recolectores caminan a lo largo de las rutas parando cada tantos pasos
(a igual distancia entre paradas).
4) En cada parada se toma la muestra con tijera cortando el pasto a un puño
del suelo por encima y por debajo de la mano, colocando la muestra en una
bolsa plástica.

b) Procedimiento

1) En el laboratorio se sumerge la muestra de pastso en un balde con agua (0

litros) y se lo deja reposar por 24 hs.
2) A las 24 hs, se extrae el pasto que luego de escurrido se seca hasta
obtener peso seco constante.
3) El líquido remanente se deja decantar por 2 hs para luego sifonar el
sobrenadante y se vuelca el sedimento a una probeta de 2 lts.
4) Se deja decantar por 2 hs y se sifonea el sobrenadante pasando el
sedimento a una probeta de 1 lt.
5) Se repite como en 4) y se pasa a una probeta de 500 cc.
6) Se reptite como en 4) pero el sedimento se pasa a un tubo de centrifuga de
250 cc.
7) Centrifugar por 30 minutos a 2500-3000 rpm.
8) Descartar el sobrenadante y completar volumen con solución azucarada de
Benbrook.
9) Centrifugar durante 30 minutos a 2500-3000 rpm.
10) Volcar el sobrenadante a una probeta de 2 lt y completar con agua.
11) Dejar decantar por 2 hs y sifonar el sobrenadante.
12) Repetir pasos 4, 5, y 6 hasta llegar a un volumen final de 10 cc.
13) Dejar decantar por 1 h y sifonar hasta 1 cc.
14) Tomar 40 µl y colocar en portaobjetos.
15) Agregar Lugol y contar la cantidad de L3 en microscopio.
16) Repetir pasos 14 y 15 dos veces y sacar el promedio de las 3 lecturas.
17) El resultado se refiere a L3 por kg de pasto seco.

Necropsia parasitaria

Rumiantes

1) Una vez realizada la eutanasia, se coloca el animal sobre su lado izquierdo

y con la cabeza hacia la derecha del operador y las extremidades hacia el
mismo.
2) Levantar las sextremidades anteriores y realizar un corte a lo largo de la
axila. Cortar hacia atrás hasta la mitad del pecho y hacia delante hasta el
cuello.Cortar los músculos subescapulares y desarticular la extremidad
anterior totalmente hacia arriba y atrás.
3) Realizar una incisión en la línea media hacia atrás hasta el periné
haciéndolo arriba del pene o de la ubre. Cuerear hacia arriba hasta la línea
dorsal sobre las cavidades abdominales y toracica. La extremidad posterior
es desarticulada cortando el acetábulo, los ligamentos y músculos
adyacentes.
4) Cortar cuidadosamente a través de la pared abdominal desde la última
costilla y a lo largo de los procesos lumbares transversos hasta la pelvis
incidiendo el área inguinal.
5) Una vez que se presenta el cuajar se realizan 2 ataduras en ambos
extremos y se coloca el organo entero en un balde. El cuajar se abre a
través de la curvatura menor, se lava con agua y se coloca en una bandeja
con agua dejandolo reposar por 24 hs (maceración del cuajar). El contenido
del cuajar que queda en el balde se completa con agua hasta los 10 lt
(bovinos) o 4 lt (ovinos) y se extrae un muestra de 1lt con un cucharon
realizando movimientos en 8 con el fin de obtener una muestra homogenea.
6) El intestino delgado se separa del intestino grueso a la altura de la valvula
ileo-cecal y tambien se coloca en un balde en donde se abre a lo largo de
todo el organo para recuperar el contenido. Posteriormente el intestino se
lava con agua y se descarta. El contenido que queda en el balde se
completa con agua hasta volumen indicado previamente y se obtiene la
muestra como en el cuajar.
7) Del intestino grueso se procesa el ciego y el primer tercio del colon
descartandose el resto del organo, previa obtención de materia fecal del
recto. Se abre el organo en un balde y el contenido se completa con agua
hasta volumen indicado previamente y se obtiene la muestra como en el
cuajar.
8) Una vez recolectadas las muestras (cuajar, digestión de cuajar, intestino
delgado e intestino grueso) se procede a la clarificación de las mismas
pasándolas por un tamiz de 400 meshes (cuajar e intestino delgado) o de
100 meshes (intestino grueso). Se vuelca el remanente que queda en el
 tamiz en el recipiente de 1 lt y se completa el volumen con agua. Agregar
formol al 10% para preservar en caso de que no se proceda a la lectura.
9) Para proceder a la lectura, se extrae una muestra de 100 cc realizando
movimientos en 8 con el fin de obtener una muestra homogenea. La lectura
se realiza con lupa estereoscopica volcando el contenido (100 cc) en una
placa de Petri con el agregado de Lugol.
10) El resultado obtenido de la lectura de los 100 cc se multiplicará por el factor
de corrección (100 en bovinos y equinos y 40 en ovinos y cerdos) para
obtener la carga total del nematodes en los diferentes compartimientos.