Toxicología Ambiental 2021-1

UNIDAD III:
MECANISMOS DE LA
TOXICODINÁMICA DE LA
CONTAMINANTES

TOXICOLOGÍA HUMANA

MSc. Ing. Enrique Portilla

cportilla@continental.edu.pe Dirección de Calidad Educativa
 CONTENIDO DE LA CLASE

UNIDAD III:

10 TOXICOLOGÍA HUMANA

10.1 Generalidades
10.2 Evaluación de la toxicidad de substancias en humanos
10.3 Organismos de prueba para toxicología humana
10.4 Criterios de toxicidad y métodos
Propósito de la Clase

Comprender como se aplican los diferentes métodos de

pruebas toxicológicas, uso de organismos modelo y
criterios empleados en la toxicología humana.
10.1 Generalidades

§ Rutas de exposición
ü Ingestión
o Agua y alimentos
ü Inhalación
o Aire, vapor, polvo
ü Contacto: Piel, ojos
o Aire
o Agua (solidos suspendidos)
o Suelo

Gruiz Katalin et al 2015, Environmental toxicology

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10.1 Generalidades
Efectos adversos de substancias químicas en humanos

1) Toxicidad aguda:
o Una sola dosis
o Administración oral o dérmica 24 h
o Inhalación 4h

2) Toxicidad de un órgano especifico

o Una sola dosis
o Exposición no letal
o Reversible o irreversible

3) Neurotoxicidad
o Daño específico: cerebro, sistema nervioso central.

4) Toxicidad a dosis repetidas y toxicidad en órganos 5

10.1 Generalidades
Efectos adversos de substancias químicas en humanos

5) Toxicidad crónica
5) Exposiciones repetidas
6) Periodos largos, incluso durante toda la vida
6) Mutagenicidad
o Incremento de la ocurrencia de mutaciones en células.
7) Mutagenicidad de células germinales
o Afecta los óvulos y espermas
o Transmisibles a las nuevas generaciones
8) Carcinogenicidad
9) Genotoxicidad
o Alteración de la información genética
o Usualmente indicadores de mutagenicidad y carcinogenicidad.

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10.1 Generalidades
Efectos adversos de substancias químicas en humanos

10) Toxicidad reproductiva y del desarrollo

o Afecta la función sexual y la fertilidad
o Desarrollo del feto
o Lactancia
11) Corrosividad
o Daño irreversible en la piel y en ojos
12) Sensibilización
o Hipersensibilización/reacciones alérgicas
o Piel y vías respiratorias
13) Disrupción endocrina
14) Disrupción del sistema inmune
o Enfermedades alérgicas y autoinmunes

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10.2 Evaluación de la toxicidad de substancias en humanos

Etudios In vitro
• Células aisladas y cultivos de tejidos
• Predice toxicidad aguda

Estudios In vivo
• Orgasnismos (microrganismos, animales)
• exposición aguda, subcronica y crónica)

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10.2 Evaluación de la toxicidad de substancias en humanos

ü Modelización in sílico (númerica)

ü Experimentación in vitro (cultivos de células y tejidos)
ü Experimentación in vivo mediante uso de animales
ü Extrapolación de datos (animal-hombre)
ü Se aplican dosis altas en las pruebas
ü Se puede incurrir en sobreestimación
ü Se puede incurre en subestimación

Gruiz Katalin et al 2015, Environmental toxicology

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10.2 Evaluación de la toxicidad de substancias en humanos
Pruebas In vitro

1) Pruebas de citotoxicidad
o Trypan Blue Exclusion (TBE)
o Ensayo Neutral Red Uptake (NRU).
o Ensayo de actividad metabolica (MTT) Vembadi et al 2019

2) Corrosión e irritación cutánea

o Usa modelos 3D de piel humana
o The Skin Corrosion Test (SCT) + ensayo MTT
o Skin Irritation Test (SIT) + ensayo MTT

Shanmugapriya et al 2016

10
10.2 Evaluación de la toxicidad de substancias en humanos
Pruebas In vitro
TM
EpiSkin

3) Fototoxicidad cutánea
o Ej. Sensibilidad a la radiación UV luego de una
exposición a una substancia química.

4) Sensibilización cutánea
o Direct Peptide Reactivity Assay (DPRA)
o Human Cell Line Activation Test (h-CLAT)

https://vimeo.com/289239179 11
10.2 Evaluación de la toxicidad de substancias en humanos
Células aisladas y cultivos de tejidos

ü Línea celular de fibroblastos de ratón BALB/c3T3 para pruebas de citotoxicidad.

ü Queratinocitos normales (piel) humanos para pruebas de citotoxicidad
ü Línea celular de túbulo proximal del riñón LLC-PK1 para daño celular
ü Línea celular epitelial de riñón de perro MDCK para daño celular
ü Granulocitos / macrófagos (leucocitos) para la neutropenia aguda
ü Cromosomas de mamíferos para la prueba de aberración cromosómica in vitro
ü Células de mamífero para la prueba de mutación genética in vitro
ü Células de mamífero para el ensayo de intercambio de cromátidas hermanas in vitro
ü Células de mamífero para analizar daños y reparación del ADN

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10.3 Organismos de prueba para toxicología humana

Estudios In vivo

Microorganismos

Animales inferiores

Aves

Mamíferos

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10.3 Organismos de prueba para toxicología humana
Microorganismos

ü Salmonella para prueba de mutación inversa (Ensayo de

Ames).
ü Escherichia coli para ensayo de mutación inversa
ü Saccharomyces cerevisiae para ensayos de mutación
ü Saccharomyces cerevisiae para ensayos de recombinación
miótica
ü Saccharomyces cerevisiae con receptor clonado de
estrógeno para ensayos YES

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10.3 Organismos de prueba para toxicología humana
Animales inferiores
§ Drosophila melanogaster
ü Mosca de la fruta o mosca del vinagre. Usada en
pruebas de genotoxicidad.
§ Xenopus
ü Rana acuática comúnmente usada en ensayos de
Teratogenesis (FETAX).
§ Rhinella marina
ü Sapo gigante o sapo de caña.
§ Lithobates catesbeianus
ü Rana toro (rana acuática).
§ Necturus
ü Cachorro de agua (salamandra acuática).

15
10.3 Organismos de prueba para toxicología humana
Aves
§ Pollos domésticos
ü De crianza fácil.
ü Genética, embriología, toxicología, farmacología, etc.

§ Otras aves domésticas:

ü Anas platyrhynchos: Ánade real (pato común en el
hemisfério norte)
ü Colinus virginianus: Codorniz de Virginia
ü Coturnix japonica: Codorniz japonesa
ü Phasianus colchicus: Faisán común
ü Alectoris rufa: Perdiz roja

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10.3 Organismos de prueba para toxicología humana
Mamíferos

§ Rata gris/parda (Rattus norvegicus):

ü Peso: 250 a 500 g.

ü Resistente a las enfermedades.
ü Ampliamente usado en pruebas de toxicidad.
ü Raza Wistar: Rata albina, establecida en el instituto
Wistar, Chicago-EEUU (1906 – 1930).

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10.3 Organismos de prueba para toxicología humana
Mamíferos

§ Ratón casero (Mus domesticus):

ü Talla pequeña y rápida reproducción

ü *Más de 100 000 000 de ratones son usados
anualmente (más del 99 % de los animales usados
en la ciencia).
ü Debido a su alta incidencia de tumores son usados
en investigaciones de cáncer.
ü Mutante amarillo: estudios de pigmentación,
implantación, obesidad y esterilidad.
*https://www.sciencemag.org/news/2021/01/how-many-mice-and-rats-are-used-us-labs-controversial-study- 18
says-more-100-million#:~:text=Now%2C%20for%20the%20first%20time,99%25%20of%20all%20lab%20animals.
10.3 Organismos de prueba para toxicología humana
Mamíferos

§ Cuy doméstico, conejillo de indias (Cavia

porcellus):
ü Producción de anticuerpos
ü Investigaciones de nutrición, dental, radiación, tumores.

§ Hamsters (Mesocricetus auratus):

ü Tiene una característica única:
o Mejillas reversibles
ü Permite el estudio de:
o Implantes de tejidos
o Tumores
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10.3 Organismos de prueba para toxicología humana
Mamíferos

§ Conejos (Familia Leporidae):

ü Toxicología en productos cosméticos y farmacéuticos.
ü Producción de anticuerpos

§ Ovinos, caprinos, vacunos y cerdos:

ü Prioritariamente usados en transgénesis et inmunología.

§ Perros y gatos:
ü Beagles: Toxicología de químicos y efectos del tabaco.
ü Felis catus: Neurofarmacología, oncología.
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10.3 Organismos de prueba para toxicología humana
Mamíferos
§ Primates:

Mono ardilla (Saimiri sciureus) Macaco cangrejero (Macaca fasicularis)

Mono Rhesus (Macaca mulatta)

Babuino (Papio hamadryas) Macaco japonés (Macaca fuscata) Chimpancé (Pan troglodytes) 21
10.3 Organismos de prueba para toxicología humana
§ Cuidado animal y consideraciones de su uso
ü Se debe garantizar que los animales gocen de las 5 libertades y las 3Rs:
5 Libertades:
• Estar libre de sed, hambre y desnutrición
• Estar libre de incomodidades físicas o térmicas
• Estar libre de dolor, lesiones o enfermedades
• Ser libre para expresar las pautas propias de
comportamiento
• Estar libre de miedos y angustias
ü Es posible Reemplazar una prueba de toxicidad con animales
por otro método alternativo:
• Si la investigación se centra en mecanismos celulares.
• Se pueden emplear cultivos celulares o tejidos in vitro.
• Uso microorganismos o invertebrados menores.
ü Es posible Reducir el número de animales usados en las
pruebas de toxicidad:
• Maximizando la adquisición de datos (Diseño)
• Utilizando criterios de significancia estadística
consensuados.
ü Es posible Refinar el método a usar
• Aplicando el uso de indicadores bioquímicos y fisiológicos
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10.4 Criterios de toxicidad y métodos
§ Toxicidad aguda
§ Toxicidad a dosis repetidas y toxicidad en órganos
§ Genotoxicidad
§ Toxicidad crónica
§ Carcinogenicidad
§ Toxicidad reproductiva y del desarrollo
§ Penetración dérmica
§ Irritación de la piel y corrosión
§ Sensibilización de la piel
§ Irritación de los ojos y corrosión
§ Toxicocinética, farmacocinética y metabolismo
§ Neurotoxicidad
§ Toxicidad y disrupción endocrina
§ Fototoxicidad
23
10.4 Criterios de toxicidad y métodos
Toxicidad aguda

ü Una sola dosis o múltiples dosis

en un periodo corto de tiempo.
ü Dosis alta: oral, contacto,
inhalación o inyección en el
tejido muscular.
ü El efecto ocurre dentro de los 14
días después de la exposición.
Organización para la Cooperación y el Desarrollo Económico (OECD)
Gruiz Katalin et al 2015, Environmental toxicology

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10.4 Criterios de toxicidad y métodos
Toxicidad a dosis repetidas y toxicidad en órganos

ü Exposición sub-crónica:
Exposición sobre una parte de
la esperanza de vida
ü Exposición crónica: Exposición
sobre la mayor parte de la
esperanza de vida.

Organización para la Cooperación y el Desarrollo Económico (OECD)

Gruiz Katalin et al 2015, Environmental toxicology

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10.4 Criterios de toxicidad y métodos
Genotoxicidad

§ Mutación genética in vitro:

ü Prueba de Ames

§ Mutación cromosómica in vitro:

ü Ensayo de micronúcleos.

§ Mutación cromosómica in vivo:

ü Ensayo de micronúcleos.

§ Carcinogenicidad genotóxica in vivo:

ü Ensayo de roedores. Una prueba de mutación inversa de Salmonella typhimurium: el número de reveladores es
proporcional a la mutagenicidad de la sustancia química analizada.

Gruiz Katalin et al 2015, Environmental toxicology

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10.4 Criterios de toxicidad y métodos
Toxicidad crónica

ü Describe los efectos adversos de una sustancia durante un período de tiempo largo
(meses o años).

ü Se realiza mayormente sobre roedores.

ü El objetivo es obtener información acerca de:

o La identificación de las propiedades peligrosas de una sustancia química.
o La identificación de los órganos afectados.
o Caracterización de la relación dosis-respuesta.
o Identificación de un nivel de efecto adverso no observado (NOAEL) o para el establecimiento
de una dosis de referencia.
o La predicción de los efectos de toxicidad crónica a niveles de exposición humana.

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10.4 Criterios de toxicidad y métodos
Carcinogenicidad
§ Pruebas con animales
ü La prueba OCDE TG 451 sobre roedores a largo plazo es la
prueba convencional de carcinogenicidad.

§ Pruebas sin animales

ü Ensayo de embrión de hámster sirio (SHE): detecta los
primeros pasos de la carcinogénesis
ü Ensayo SHE de pH bajo: detecta los primeros pasos de la
carcinogénesis.
ü Ensayo Balb / c 3T3: detecta cambios carcinogénicos
posteriores Organización para la Cooperación y el Desarrollo Económico (OECD)
ü C3H/10T1/2: detecta cambios carcinogénicos posteriores Gruiz Katalin et al 2015, Environmental toxicology

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10.4 Criterios de toxicidad y métodos
Toxicidad reproductiva y del desarrollo

Malformaciones de embriones Xenopus embrios debido a mutaciones genéticas Gruiz Katalin et al 2015, Environmental toxicology

(Hikasa et al., (2002) The Xenopus receptor tyrosine kinase Xror2 modulates morphogenetic movements of the 29
axial mesoderm and neuroectoderm via Wnt signaling
10.4 Criterios de toxicidad y métodos
Penetración dérmica

Gruiz Katalin et al 2015, Environmental toxicology

ü Pruebas in vivo: Efectos locales o

sistemáticos en roedores.
ü Pruebas in vitro: Cultivos de tejidos de
piel humana o animal.
Método in vitro para pruebas de penetración dérmica 30
10.4 Criterios de toxicidad y métodos
Toxicidad y disrupción endocrina

§ Ensayo YES/YAS
ü Prueba in vitro
ü Yeast Estrogen Screen assay
ü Ensayo estrógeno de levadura
ü Saccharomyces cerevisiae
ü Levadura de pan, vino, cerveza

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Preguntas

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Trabajo grupal

Como podría evaluar el efecto(s) del componente de su caso de estudio

sobre la salud humana?

• Plantee los objetivos.

• Que métodos usaría (in vitro/in vivo) y que organismo modelo.
• Que referencias existen sobre la proposición planteada.

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