Tema 8 Lípidos PDF

CFGS LABORATORIO DE DIAGNSTICO CLINICO. TECNICAS DE ANALISIS BIOQUIMICO.
TEMA 8. LOS LIPIDOS EN EL LABORATORIO DE DIAGNSTICO CLNICO.

1. INTRODUCCIN.
Los lpidos son biomolculas orgnicas que tienen en comn varias
caractersticas:
No se disuelven en agua (hidrofbicas), formando estructuras denominadas

micelas.
Se disuelven en disolventes orgnicos, tales como cloroformo, benceno, aguarrs o

acetona.
Son menos densos que el agua, por lo que flotan sobre ella.
Son untosos al tacto.
Se trata de compuestos orgnicos que son steres o potenciales steres de cidos

grasos. Debido a la falta de solubilidad los lpidos para transportarse por la sangre
necesitan unirse a una protena.
Funciones biolgicas:
o
Son componentes estructurales de la membrana. (fosfolpidos de la bicapa

lipdica).
Reserva energtica (triglicridos).
Con frecuencia se combinan con otras biomolculas (azcares o glucolpidos,

protenas o lipoprotenas) para cumplir unas funciones biolgicas especializadas.
Propiedad reguladora (como las vitaminas y hormonas)
El tejido adiposo es aislante frente a las variaciones del medio externo y cojn
visceral y subcutneo para la proteccin de rganos internos.
En base a los esqueletos, los lpidos se pueden clasificar en:
Lpidos complejos: poseen cidos grasos como componentes. Se diferencian unos

de otros en la estructura del esqueleto al que se hayan unido los cidos grasos. Se
trata de lpidos saponificables porque producen jabones (sales de cidos grasos
formadas por hidrlisis alcalina).
Los ms importantes son:
Lpidos complejos
Esqueleto
Acilglicridos o acilglicerol
Glicerina
IES Ponce de Len - Utrera

Fosfolpidos
3-P-glicrido
Esfingolpidos
Esfingosina
Cera
Alcoholes no polares
Lpidos simples: no poseen cidos grasos y por tanto no son saponificables y no

producen jabones. Hay tres tipos: Esteroides, Terpenos y Prostaglandinas.
2. ESTRUCTURA Y FUNCIN.
cidos grasos: son los componentes caractersticos de todos los lpidos
complejos. Son cadenas alqulicas (cadenas hidrocarbonadas) con un grupo carboxilo
terminal, de manera que su frmula general es: RCOOH
La cadena hidrocarbonada puede tener de 14 a 22 tomos de Carbono; los cidos
grasos pueden ser:
o
Saturados: en su cadena alqulica no existen dobles enlaces.
Insaturados: en su cadena alqulica hay dobles y triples enlaces. Si tienen ms

de dos se les llama poliinsaturados; difieren entre si por la longitud de su
cadena y por el n y posicin de sus dobles enlaces.

Los cidos grasos que se precisan en la dieta, se llaman esenciales ya que si

estuvieran ausentes causaran problemas de salud importantes; el cido graso
esencial ms abundante es el linolico; junto con el -linolnico, no pueden ser
sintetizados y deben obtenerse de fuentes vegetales; el cido linolico es el precursor
del acido araquidnico, que tampoco existe en la dieta y que por ejemplo, es
fundamental
en
la
coagulacin;
los
cidos
grasos
son
precursores
de
las
prostaglandinas.
La funcin principal es la de participar en la sntesis de otros lpidos y ser fuente
de energa.
Acilglicridos: Es la familia ms abundante de lpidos y los principales
componentes de los lpidos de depsito o de reserva en clulas animales y vegetales.
A los que son slidos a T ambiente se les conoce como grasas y a los lquidos como
aceites. La mayor parte de las grasas naturales, son mezclas muy complejas de
triacilglicridos.
Son cidos grasos que mediante un enlace ster se unen a un alcohol, que en
concreto es la glicerina o el glicerol.

Una de las propiedades ms significativas de los triglicridos es su falta de

afinidad por el agua, debido a las largas cadenas hidrocarbonadas que, adems, hacen
que sean compuestos eficientes para el almacenamiento de energa, que es su
principal funcin, por:
-
A igualdad de peso, la cantidad de ATP que se obtiene de su oxidacin es 2,5

veces la obtenida por el glucgeno. (Los hidratos de carbono y las protenas
aportan 4 Kcal por gramo y las grasas, unas 9 Kcal).
Se puede almacenar como lquido pero sin asociarse al agua, mientras que el
glucgeno fija el doble de su peso en agua.
La mayor parte de los cidos grasos de los lpidos del cuerpo humano son
saturados o contienen un solo doble enlace (monoinsaturados), lo cual es una ventaja

porque son ms inertes y, por lo tanto, sirven como depsito de energa. La
composicin en cidos grasos de la grasa de depsito, refleja la composicin de los
lpidos ingeridos.
Fosfoglicridos: son componentes principales y caractersticos de las membranas
celulares; se les llama tambin fosfolpidos, pero no todos los lpidos que contienen
fsforo son fosfoglicridos (por ej la esfingomielina).
Tienen una cabeza polar adems de sus colas hidrocarbonadas, o sea, que son

lpidos polares anfipticos (poseen un extremo hidroflico [soluble en agua] y otro

hidrfobico [rechaza el agua]).
Estn compuestos por: 1 molcula de glicerol,
dos de a.grasos y un grupo fosfato, unido al
carbono terminal de la cadena del glicerol.
Segn el grupo de cabeza que se une al

.fosfrico, se distinguen varios tipos de
fosfolpidos, ej. lecitina, cuando posee colina.
Funciones de los fosfolpidos:

Componentes
estructurales
de
las
membranas celulares.
Papel
importante
en
la
inactivacin
de
ciertas enzimas.
Permite
el
funcionamiento
normal
del
pulmn, es decir, impide la atelectasia al final

de la fase de espiracin al disminuir la tensin
superficial de la capa acuosa superficial del alveolo.
Debido a sus propiedades detergentes juegan un papel importante en la bilis,
donde su funcin es solubilizar el colesterol, (una de su produccin y secrecin a la
bilis, puede producir clculos biliares de colesterol)
Esfingolpidos:
lpidos
complejos
Son
cuyo
esqueleto es la esfingosina
(alcohol).
Todos
los
esfingolpidos tienen tres

componentes bsicos:
una molcula de cido
graso.
Esfingosina (alcohol)
grupo de cabeza polar,
que
puede
ser
muy
grande y complejo

La unin del cido graso con la esfingosina se realiza por un enlace amida y forma lo
que se llama una ceramida (que posee dos colas no polares), y a la ceramida se le
une la cabeza polar.
Podemos diferenciar tres grupos:
1. Esfingomielina: membrana de tejido nervioso y cerebral.
2. Glucoesfingolpidos cidos: en la sustancia gris.
3. Glucoesfingolpidos neutros: que pueden localizarse sobre la membrana del
hemate dndole especificidad de grupo o en el sistema nervioso (cerebrsidos)
principalmente;
contienen
como
grupo
de
cabeza
polar
un
monosacrido
(galactosa en SNC sobre todo y tambin glucosa) por enlace -glucosdico.
Las funciones son:

Participan
en
la
transmisin
del
impulso
nervioso.
Modulan
la
funcin
de
muchos
neurotransmisores.
Confieren especificidad de grupo sanguneo y
de otros rganos y tejidos.
Participan de la Inmunidad de los tejidos.
LPIDOS SIMPLES: no contienen cidos grasos; aparecen en las clulas y en los

tejidos en cantidades menores, pero tienen intensa actividad biolgica pues parte de
ellos son algunas hormonas, vitaminas y otras biomolculas solubles en las grasas.
Podemos destacar tres grupos principales: terpenos, esteroides y prostaglandinas.

Terpenos: Entre sus caractersticas estn:
Algunos forman aceites esenciales obtenidos de plantas, como el mentol,

alcanfor.
El escualeno, es el precursor del colesterol.
Un grupo importante es el de los carotenoides, en el que el -caroteno es el

precursor de la vitamina A; tambin las vitaminas E, K y D son terpenos.
Esteroides: el primer precursor es el lanosterol que es el precursor del colesterol

en los tejidos animales. Son derivados del hidrocarburo saturado tetracclico
ciclopentanoperhidrofenantreno.
La molcula de colesterol comprende:

-
El ciclopentanoperhidrofenantreno.
Un grupo hidroxilo en el carbono 3.
Un doble enlace entre el carbono 5 y 6.
Un grupo metilo en el carbono 10.

Otro grupo metilo en el carbono 13.
Una cadena de 8 carbonos unida al carbono 17.
En cuanto a las propiedades del colesterol, se caracteriza porque presenta una baja
solubilidad en agua. La concentracin de colesterol en plasma es de 150-200 mg/dL.
Esta solubilidad en plasma se debe a que en sangre circula unido a lipoprotenas. En
concreto, el colesterol lo transporta la LDL y VLDL.
Slo un 30% circula libre y aproximadamente el 70% se encuentra esterificado con
cidos grasos. Para que la reaccin se efecte se requiere la enzima lecitncolesterolaciltransferasa (LCAT).
El colesterol puede venir de la dieta o por sntesis endgena.
Las funciones del colesterol son:
-
Componente de las superficies y membranas celulares.
Precursor inmediato de los cidos biliares.
Precursor de diversas hormonas como cortisol, aldosterona, estrgenos y

testosterona, y progesterona.
Prostaglandinas: son una familia derivada de los cidos grasos con potentes
actividades hormonales y reguladoras en cierto n de tejidos y por diferentes
caminos; todas proceden de la ciclacin del cido araquidnico que procede a su
vez del cido linoleico; las mas frecuentes son: PGE1, PGE1a, PGF2a que a su vez
son precursoras de otras tantas.
Tienen diferentes acciones biolgicas pero todas disminuyen la tensin arterial e
inducen la contraccin del msculo liso; la PGE2 y la PGE2a se usan para inducir parto
y aborto teraputico.

3. LIPOPROTEINAS.
Son unas macromolculas cuya funcin es empaquetar los lpidos insolubles en el
plasma y transportarlos desde el intestino y el hgado a los tejidos perifricos y desde
estos devolver el colesterol al hgado para su eliminacin del organismo en forma de
cidos biliares. Estn formadas por lpidos (de diferentes clases) y protenas, y por las
apoprotenas (de diferentes clases).
Las apoprotenas son las unidades proteicas que se encuentran en las lipoprotenas
pero que aun no se han incorporado a las partculas de lipoprotenas respectivas;
aunque la estructura de estos compuestos es variable, el componente de apoproteina
se asocia con determinadas funciones bioqumicas dentro del medio de los lpidos.
Vamos a ver algunas caractersticas importantes de cada una:
Apo AI: es el principal componente proteico de las HDL; funciona como activador
de la LCAT enzima que cataliza la formacin de steres de colesterol; elimina el
colesterol libre de los tejidos extrahepticos.
Apo B: dependiendo del n de aminocidos tenemos Apo B48 y Apo B100; la B48
se sintetiza en la pared intestinal, por lo que tiende a estar en los quilomicrones de
la linfa; la B100 que se sintetiza en el higado es la forma plasmtica mas comn;
se encuentra sobre todo en la LDL aunque tambin en la IDL y la VLDL;
Apo C: su principal funcin es activar a la LPL conduciendo a la descomposicin de

triglicridos a nivel celular con la posterior liberacin de cidos grasos a las clulas
para su metabolismo y almacenamiento; se sintetiza en el hgado y tiende a
asociarse con partculas de VLDL y HDL.
Apo E: funciona como marcador de los receptores hepticos; se sintetiza en el

hgado y se incorpora a HDL que la transfiere a QM
y VLDL que cuando se
degradan la devuelven al hgado.
Las lipoprotenas se diferencian entre s por la diferente proporcin de colesterol, TG y

fosfolpidos que contienen, as como por las apoproteinas que integran su estructura.
Se clasifican segn sus densidades especficas y son las siguientes:

Quilomicrones: Son las lipoprotenas de mayor tamao pero de menor densidad.

Tiene un alto contenido en triglicridos (85-95%). Tambin tiene colesterol libre
(1-3%), colesterol esterificado (2-4%) y fosfolpidos (3-6%). Adems, contiene las
siguientes apo: AI, AII, B48, C, E.
Despus de sintetizarse en las clulas intestinales, los quilomicrones se liberan al
sistema linftico y posteriormente entran en la circulacin sangunea (por el conducto
torcico). A lo largo del camino estos quilomicrones, que son relativamente pobres en
apopoteinas, recogen molculas de apo C porque se las quita a otra lipoprotena, la
HDL. La apo C que est presente en los quilomicrones activa a la LPL; esta enzima, va
hidrolizando a los Triglicridos. Los quilomicrones entonces contactan con los tejidos
(por los receptores para Apo CII) y le suministran cidos grasos, glicerol, diglicridos
y triglicridos y se convierten en quilomicrones residuales; estos van al higado
facilitando la endocitosis de los mismos y su degradacin para producir VLDL.
VLDL: Son lipoprotenas de muy baja densidad. Son sintetizadas en el hgado a
partir de los quilomicrones residuales. Van cargadas de triglicridos endgenos y
apoproteinas B100, C y E.
Como ocurre con los quilomicrones, la apoproteina C sirve como activador de la
enzima lipoproteinlipasa, que hidroliza los triglicridos para que sus componentes
pasen a los tejidos. Esto transforma a las VLDL en otras lipoprotenas llamadas IDL o
10

de densidad intermedia. Adems, las VLDL tambin reaccionan con las HDL para
cederles la apoproteina C y parte de su contenido en lpidos.
IDL: Al perder cada vez ms su contenido en lpidos, las VLDL se transforman en
partculas de IDL. Estas contienen cantidades desiguales de colesterol esterificado
y triglicridos, apo B y E (es necesaria para consumo heptico y post conversin a
LDL por accin de la lipasa heptica).
Se degradan al perder sus triglicridos y se transforman en LDL. No se identifican
normalmente en plasma por que su vida media es muy corta.
LDL: Tambin son lipoprotenas de baja densidad. La LDL formadas a partir de IDL
contiene esteres de colesterol, tanto endgenos como exgenos, y apo B. La apo
B100 es reconocida por unos receptores existentes en las membranas de las
clulas de forma que estas clulas captan a las LDL.
Dentro de la clula el colesterol esterificado pasa a ser colesterol libre si va a ser
utilizado. Si se va a almacenar se esterifica. Cuando los niveles de LDL son altos los
macrfagos fagocitan las LDL y se llenan de steres de colesterol, convirtindose
entonces en clulas espumosas.
Las clulas musculares lisas, como las que hay en las paredes de las arterias, tambin
acumulan steres de colesterol cuando hay mucha LDL, lo que favorece el desarrollo
de las placas de ateroma.
HDL: las HDL se producen tanto en el hgado como en las clulas de la mucosa
intestinal. Estn formadas bsicamente por apoprotenas, fundamentalmente AI y
II y C.
Contienen tambin fosfolpidos y steres de colesterol. Hay dos tipos de HDL:
-
Discoide.
Esfrica.
La esfrica transporta ms colesterol que la discoide porque se forma cuando la

discoide va recogiendo colesterol de las clulas. La HDL estimula a la enzima LCAT
(lecitin-colesterol-aciltransferasa) mediante la apo Al que cataliza la esterificacin del
colesterol. Por tanto, la HDL es responsable de la formacin de steres de colesterol
circulante, eliminando el colesterol libre de los tejidos, esto es el transporte inverso
de colesterol (proceso por el cul el colesterol captado por el HDL-C de las clulas
perifricas, llega al hgado para ser eliminado por las vas biliares).
11

La HDL transporta los steres de colesterol desde los tejidos perifricos hacia el
hgado donde son degradados y transformados en colesterol libre, que a su vez se
transforma en cidos biliares y se excreta. De este modo, la HDL proporciona cierta
proteccin frente a la formacin de placas de ateroma. Las HDL interactan con los
quilomicrones ricos en triglicridos y con las VLDL, lo cual es importante para la
degradacin posterior de ambas.
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4. METABOLISMO.
Lpidos exgenos:
Los triglicridos constituyen el 98% de los lpidos de la dieta, siendo el resto el
colesterol y otros, entre los que estn los fosfolpidos. La incorporacin de los lpidos
exgenos se efecta en tres fases: digestin, absorcin y transporte.
Digestin: se lleva a cabo en el lumen intestinal e incluye alteracin de la naturaleza
qumica y/o del medio del lpido; la bilis liberada al duodeno por la vescula biliar esta
formada por cidos biliares conjugados, lecitina y colesterol.
Los cidos biliares son muy anfipticos (o sea, que a la vez son hidrfilos e
hidrfobos) y hacen como de puente entre los lpidos y el agua y rompen las gotas de
lpidos de la dieta en partculas ms pequeas llamadas micelas, que son ms
vulnerables a los enzimas digestivos. A este proceso de llama emulsificacin.
Los enzimas ms importantes que actan sobre las grasas son los pancreticos, y
son:
-
Lipasas: rompen los triglicridos en cidos grasos, glicerol y glicridos ms

pequeos.
Colesterol-esterasa: rompe el colesterol esterificado en colesterol libre y cidos
13

grasos.
-
Fosfolipasas: rompen los fosfolpidos en cidos grasos y molculas de glicerol con

cido fosfrico.
Absorcin: En el interior de la mucosa intestinal se vuelven a formar triglicridos y

steres de colesterol. Salen por el polo opuesto y pasan a la circulacin sangunea o
linftica.
Transporte: Los cidos grasos y los triglicridos que contengan cidos grasos de
cadena corta se unen a la albmina y van a la circulacin portal (de la vena porta).
Los glicridos o triglicridos y otros steres que contengan cidos grasos de cadena
larga se transportan unindose a unas protenas formando la lipoprotena llamada
quilomicrn.
Los quilomicrones circulan por el sistema linftico y despus desembocan en la
circulacin sangunea. Los triglicridos transportados por los quilomicrones van a los
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tejidos para almacenarse, para catabolizarse, para obtener energa o bien para la
sntesis de otros compuestos. Una parte importante de los quilomicrones se dirigen al
hgado, ya que ah se formarn los lpidos endgenos.
Lpidos endgenos:
Son los sintetizados por el propio organismo, concretamente por el hgado.
El organismo produce la mayor parte del colesterol de forma endgena. Las fuentes
dietticas tan solo son de 150 a 300 mg/da, mientras que el hgado sintetiza 1,5g al
da. El exceso de hidratos de carbono y protenas de la dieta se utiliza para formar
colesterol y cidos grasos.
Los lpidos endgenos son transportados en forma de lipoprotenas para su
uso en todo el cuerpo. Cuando se emplea el trmino grasas almacenadas nos
referimos a triglicridos y cidos grasos libres. El principal sitio donde se almacena es
en el tejido adiposo.
A pesar de la gran cantidad de energa que se almacena en estos tejidos el
organismo utiliza de manera preferente el glucgeno (entre otras cosas porque los
pasos para la degradacin de las grasas son muy lentos). Slo cuando escasean los
hidratos de carbono se utilizan las grasas.
Para catabolizar las grasas, se hidroliza el triglicrido formndose glicerol y
cidos grasos. Los cidos grasos penetran en el interior de la mitocondria a travs de
un transportador llamado carnitina y sufre lo que se llama una B-oxidacin, que
consiste en la liberacin repetida de 2 carbonos hasta formar acetil-CoA que entran en
el ciclo de Krebs para formar ATP.
Si hay una intensa formacin de acetil-CoA se satura el ciclo de Krebs. 2 molculas de
acetil-CoA
se
condensan
forman
(en
diferentes
reacciones)
cido
actico
(acetoacetato libre), el cual se transforma en cido b-hidroxibutrico ( que en

condiciones de ayuno extremo puede ser utilizado por SNC para obtener energa), y
ste en acetona. A estos se les llama cuerpos cetnicos. Los cuerpos cetnicos
sintetizados en el hgado, son transportados a los tejidos perifricos donde son
utilizados fundamentalmente por el msculo esqueltico y el msculo cardaco. El
mecanismo de utilizacin de los cuerpos cetnicos implica su transformacin en acetilCoA que se introduce en el ciclo de Krebs y produce energa.
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Cuando la alimentacin es normal la produccin de cuerpos cetnicos es

mnima y su concentracin en sangre es baja (0,2 mM). Sin embargo, la falta de
alimentacin acelera la sntesis y aumenta los niveles en sangre hasta 3 5 mM, lo
cual es bastante alta (cetonemia). Esta es la respuesta normal del organismo a la
escasez de glcidos. Poco despus del ayuno la utilizacin de cuerpos cetnicos por
parte del msculo esqueltico y cardiaco reserva la glucosa para mantener al sistema
nervioso central. Las condiciones en las que aumenta la cetonemia son:
-
Ayuno prolongado.
Diabetes mal controlada.
Agotamiento de la reserva del glucgeno heptico.

La hipercetonemia produce cetonuria detectable de forma semicuantitativa
mediante tiras reactivas que cambian de color al contacto con la orina. Los cuerpos
cetnicos desprenden un olor caracterstico (manzanas asadas). Si hay mucha
cetonemia se produce un coma cetoacedtico.
5.
APLICACIONES CLNICAS.
La clnica mas o menos comn de las alteraciones del metabolismo de los lpidos
(hiperlipidemias e hipolipemias) est originada por los depsitos en cualquier rgano
de stos lpidos, siendo ms importante cuando se acumulan en hgado o rin e
impiden su funcionamiento; tambin en la piel, donde reciben el nombre de
xantomas; la restriccin del flujo sanguneo vital, promueve la formacin de cogulos
que obstruyen la circulacin lo que trae como consecuencia el infarto agudo de
miocardio y los accidentes cerebrovasculares, que constituyen la 1 causa de muerte.
El perfil de lpidos que el laboratorio proporciona representa solo un aspecto de la
evaluacin
de
factores
de
riesgo
que
se
relacionan
con
enfermedades
cardiovasculares. Dichos factores se clasifican como modificables y no modificables.

Los
no
modificables,
enfermedades
incluyen
coronarias.
Los
gnero,
edad
modificables
son
antecedentes
HTA,
familiares
tabaquismo,
de
obesidad,
inactividad fsica y dieta.

En trminos de factores de riesgo que se determinan en el laboratorio tenemos los
siguientes:
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Hiperlipoproteinemias:
Son anomalas del metabolismo de las lipoprotenas que se traducen en un aumento
de la concentracin plasmtica de uno o ms de estos lpidos y de sus componentes.
Se clasifican como primarias y secundarias.
En las primarias o familiar no se observa ninguna enfermedad subyacente. Se
cree que se deben a mutaciones en genes que codifican la sntesis de lipoprotenas,
receptores celulares o enzimas, o bien a otros factores desconocidos. Se transmiten
hereditariamente.
Las secundarias surgen como consecuencia de otros trastornos clnicos, como
por ejemplo la diabetes, el sndrome nefrtico, y sobre todo, por afecciones hepticas.
Se sabe que una alta concentracin plasmtica de lpidos ricos en colesterol
17

aumenta la incidencia de arteriosclerosis y de enfermedades coronarias. Las LDL y en

menor medida las VLDL y los quilomicrones, son aterognicos (capaces de producir las
placas de ateroma que contiene los mismos lpidos de las lipoprotenas del plasma).
Por otro lado, hay una relacin inversa entre la concentracin plasmtica de HDL y la
incidencia de arteriosclerosis y enfermedades coronarias.
Hipolipoproteinemia:
Cuando
los
niveles
manifestaciones
de
clnicas
lpidos
tan
descienden
graves
ms
demasiado
que
se
las
pueden
causadas
producir
por
las
hiperlipoproteinemias. Son enfermedades raras, como hipo-b-lipoproteinemia o

abetalipoproteinemia (ausencia de LDL). Cursan con mala absorcin de grasas,
anomalas neuromusculares, alteraciones de la retina y de la piel.
Anormalidades lisosmicas:
Son tambin enfermedades relativamente raras, familiares y hereditarias. Son
afecciones en los lisosomas en los que faltan las enzimas catablicas necesarias. Si
falta una determinada enzima se acumula el sustrato en el interior de la clula
originando un depsito de un determinado lpido. Las manifestaciones clnicas
dependern del tejido u rgano afectado.
Lipodistrofia:
El acmulo anormal de lpidos en los rganos da lugar a: lipodistrofia (celulitis) y
esteatosis heptica principalmente.
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6.
TCNICAS DE ANLISIS DE LOS LPIDOS EN EL LABORATORIO CLNICO:
El diagnstico de las dislipemias, tanto primarias como secundarias, se basa siempre

en la comprobacin, mediante el correspondiente anlisis bioqumico, de la alteracin
del parmetro o parmetros lipdicos en cuestin, debido a que estas alteraciones
suelen cursar de forma asntomtica.
En el estudio de los lpidos con fines diagnsticos se suele seguir la siguiente pauta:
1. Se comprueba la existencia de la dislipemia en cuestin, por medio del anlisis
clnico, realizado en condiciones basales, de diferentes parmetros; a saber:
Colesterol total: se suele determinar a toda la poblacin en general, tanto para el

despistaje de hiperlipemias, como para la prevencin del riesgo cardiovascular.
Niveles plasmticos de TG y de HDL-Colesterol: se suele determinar a pacientes

con niveles elevados de colesterol total, con antecedentes de enfermedades
cardiovascular o hiperlipemia familiar, o con otros factores de riesgo cardiovascular
Estudio de fracciones lipdicas y determinacin de ApoPs: se suele realizar para

estudiar las hiperlipemias primarias y a pacientes con niveles de lpidos (Colesterol
y/o TG) elevados, o con antecedentes familiares de hiperlipemia o aterosclerosis
precoz.
2. Se realiza el diagnstico diferencial entre las dislipemias primarias y secundarias.

Para ello, adems de la historia clnica y la exploracin fsica del paciente, se
determinan diferentes parmetros bioqumicos en sangre y orina (glucemia, urea,
pruebas d funcin heptica) que veremos en otros temas.
3. Para realizar un buen
estudio de la dislipemia primaria hay que realizar el
correspondiente estudio familiar, para clasificar el tipo de alteracin correctamente.

Muestras para la determinacin de Lpidos: en el estudio de los lpidos, es necesario,
estandarizar el procedimiento de extraccin de la sangre y las condiciones previas del
paciente, sobre todo para poder realizar correctamente el seguimiento de pacientes a
largo plazo.
Se recomienda en general las siguientes condiciones:
1.
En el momento de la extraccin el paciente no debe haber variado sus hbitos
19

alimentarios en las tres ltimas semanas.

2.
Ha de presentarse un peso corporal estable.
3.
La muestra extrada en decubito supino, contiene ms agua y por lo tanto la

concentracin de lpidos ser menor.
4.
Ha de estar en ayunas de 12 a 16 horas para garantizar la ausencia de

triglicridos exgenos; el ayuno tiene poco efecto sobre los niveles de colesterol
en plasma. Los fosfolpidos solo se analizan en casos de obstruccin biliar o a-blipoproteinemia.
5.
No debe haber ingerido bebidas alcohlicas en 72 horas, ya que el alcohol provoca

elevaciones agudas de la concentracin de triglicridos sricos.
6.
Si el paciente est tomando frmacos que estn afectando al metabolismo lipdico

hay suspender su administracin un mes o mes y medio antes.
7.
Se pude utilizar suero o plasma, generalmente se prefiere plasma con EDTA; los
anticoagulantes en general, provocan un efecto osmtico importante, lo que da
lugar a concentraciones falsamente disminuidas. No debe utilizarse heparina,
porque altera la movilidad electrofortica de las lipoprotenas; tampoco fluoruro
sdico porque disminuye un 25% los valores del colesterol total.
8.
Si se va a obtener plasma, la muestra de sangre recin extrada se coloca en bao

de hielo y se centrifuga lo antes posible (mejor antes de 3 h), ya que si se deja
mucho tiempo a temperatura ambiente se altera la composicin de lpidos y
lipoprotenas.
9.
Si se va a hacer un estudio de lpidos, conviene conservar el plasma refrigerado a

40C o bien congelar el suero.
10. En general, los niveles de todos los lpidos disminuyen con el almacenamiento, por
lo que las determinaciones deben realizarse lo ms pronto posible.
11. Si las muestras se dejan de un da para otro a 40C, antes de ser analizadas han de
homogeneizarse bien.
Anlisis del colesterol total: las 2/3 partes del Colesterol se halla esterificado y el resto
en forma libre; estas 2 fracciones suelen tener un comportamiento diferente en las
reacciones que determinan colesterol, por lo que se pueden medir sus niveles por
separado; es preciso saponificar los esteres en una etapa previa y despus hacer la
correspondiente determinacin colorimtrica.
Cuando se quiere medir colesterol hay factores preanalticos que influyen en los
resultados:
20

La medida del colesterol total se puede llevar a cabo mediante dos tipos de mtodos:
qumicos y enzimticos.
Mtodos Qumicos:
La mayor parte de estos mtodos se basan en la reaccin de su grupo
alcohlico con diferentes cidos para formar productos coloreados.
Estas reacciones son propias de todos los compuestos que presentan
estructura
esteroide
(andrgenos,
estrgenos,
vitamina
D),
por
lo
que
los
procedimientos que se realizaban directamente con las muestras de plasma, tenan

muchas interferencias.
Para mejorar la especificidad, se introdujo una etapa previa de extraccin y
purificacin del colesterol, seguida de la hidrlisis y posterior reaccin coloreada;
estos procesos complicaban y alargaban el anlisis, y al aparecer los mtodos
enzimticos, los qumicos, han dejado prcticamente de utilizarse.
Uno de los pocos procesos que todava se utiliza, est basado en la reaccin
de Lieberman-Buchard que puede utilizarse en algunos autoanalizadores; la reaccin
es la siguiente:
1 se hidrolizan los steres de colesterol (con cloroformo fro) y se suprimen mediante
blancos apropiados aquellas sustancias que interfieren como la hemoglobina,
bilirrubina y otras (absorben en la misma longitud de onda que el producto coloreado
de la reaccin) para evitar resultados falsamente altos. Despus se saponifican para
liberar el colesterol libre y a continuacin se aplica el reactivo de L-B (anhdrido
actico, cido actico o cido sulfrico concentrado) para formar un complejo de color
verde que absorbe a 410 nm. Estos mtodos requieren un procedimiento manual largo
laborioso y peligroso, por lo que estn en desuso.
Mtodos enzimticos:
La mayora de ellos se refiere a colesterol total y se realiza la saponificacin
del colesterol esterificado y la reaccin coloreada total sin necesidad de emplear
etapas de extraccin y purificacin y sin emplear reactivos peligrosos ni corrosivos,
debido fundamentalmente a la especificidad de la reaccin enzimtica. Adems se
pueden automatizar.
Se realizan en tres pasos, cada uno de ellos debido a una enzima que se usa como
reactivo:
21

El H2O2 que es uno de los productos de la reaccin, se determina enzimticamente,

leyndose a 500 nm; de todas maneras, hay riesgos de que se vea afectado por otras
sustancias como bilirrubina (consume H2O2 y se lee a 500 nm), cido ascrbico
(vitamina C) o cido rico. Interfiere la turbidez del exceso de triglicridos.
En los adultos, la hipercolesterolemia se define como la concentracin de colesterol
srico superior a 200 mg/dL.
Determinacin de triglicridos.Todos los mtodos tienen dos pasos generales:
1. Hidrolizar los triglicridos en glicerol y tres cidos grasos.
2. Se mide el glicerol liberado.
Los mtodos a emplear pueden ser qumicos y enzimticos. Las reacciones bsicas
son:
22

Medimos la absorbancia del NADH a 340 nm. El nivel de referencia recomendado para
la trigliceridemia en adultos es de menos de 200 mg/dl. Sea cual sea el mtodo
empleado, hay que descontar la concentracin de glicerol endgeno presente en la
muestra. Para ello se han propuesto varias frmulas, pero el procedimiento habitual
consiste en restar al valor de TG obtenidos 10 mg/dl o 0,11 mmol/l que es el nivel
fisiolgico de glicerol plasmtico.
Mtodos de estudio de Lipoprotenas: para estudiar las diferentes fracciones de lipoPs
se suelen separar todas o algunas de ellas aprovechando su diferente movilidad
electrofortica o su diferente densidad d flotacin.
Las
tcnicas
que
se
pueden
aplicar
son:
electroforesis,
ultracentrifugacin,
precipitacin selectiva d determinadas fracciones y la combinacin d estas tcnicas.
Ultracentrifugacin:
Estudia la velocidad de flotacin de las partculas lipoproteicas en medios acuosos.
Esos medios tienen una densidad uniforme. La flotacin depende de:
-
Peso y forma de las partculas de lipoprotenas.
Diferencia de densidades entre el medio y la lipoprotena.
Este mtodo no se practica en laboratorios generales, solo en laboratorios especficos.

23

Electroforesis de lipoprotenas:
Se realiza en el laboratorio clnico para separar las diferentes fracciones lipoproteicas
y poder valorar cualitativa y semicuantitativamente el perfil lipoproteico completo; es
el lipidograma.
La electroforesis de lpidos se utiliza para separar las diversas lipoproteinas por
diferencias de sus cargas netas. El mtodo es una electroforesis de protenas (con
solucin tampn a pH 8,6 y de soporte de acetato de celulosa), pero usando un
colorante de lpidos como el aceite rojo en vez de colorante de protenas.
El patrn se produce por diferencias en la velocidad de migracin desde el punto de
aplicacin al nodo. Las bandas se identifican comparndolas con las de las protenas
sricas.
24

Precipitacin selectiva de fracciones lipoproteicas:

Se usa para el aislamiento y posterior determinacin de fracciones de HDL-colesterol
y LDL-colesterol.
HDL-Colesterol:
Es
un
mtodo
de
precipitacin.
Se
utilizan
como
agentes
precipitantes cationes bivalentes, como el calcio (Ca++) o el manganeso (Mn++) en

solucin de heparina. Esta solucin hace precipitar a las lipoprotenas que contengan
apo B, que son todas menos las HDL que quedan en el sobrenadante.
Los pasos a seguir son:
1.
Se determinan los niveles totales de triglicridos y colesterol en suero.
2.
Se aade la solucin precipitante y se centrfuga.
3.
Se determina el colesterol del sobrenadante.
Un aspecto importante es inspeccionar el tubo tras la centrifugacin para asegurarse

de que se ven las dos fracciones fcilmente separadas. El sobrenadante se aspira y se
pasa cuidadosamente al tubo donde se vaya a determinar el contenido en colesterol, y
se vuelve a comprobar que el lquido sigue claro.
LDL-colesterol: El colesterol contenido en las LDL se calcula una vez que se ha hecho
la cuantificacin de la HDL-colesterol.
1 Se determina Crol total y TG en plasma.
2 Se determina HDL-Crol en el sobrenadante del precipitado.
3 Se calcula aplicando la siguiente frmula:
LDL = Colesterol total - (HDL + [TG/5])
VLDL= TG/50.
Esta frmula se basa en que los triglicridos son transportados por las LDL y la
relacin triglicridos/colesterol de las LDL es constante, de forma que las LDL
transporta 5 veces ms de triglicridos que colesterol, excepto si el contenido total de
triglicridos es mayor de 400 mg/ 100 ml.
Anlisis de apoprotenas.
Se hace mediante tcnicas inmunolgicas. Se usan anticuerpos especficos frente a la
apoprotena que se quiere detectar. Se emplea sobre todo el mtodo de la
inmunonefelometra. Este mtodo consiste en medir la dispersin de un rayo de luz
25

causada por la turbidez de la muestra, que a su vez depende de la cantidad de

complejos antgeno-anticuerpo. Su uso est extendido para la cuantificacin de apo Al
y apo B. Otros mtodos que se usan son RIA (radioinmunoanlisis) y ELISA.
La apo Al se asocia sobre todo con la HDL y no est en la LDL. Luego, puede servir
para la diferenciacin de ambas lipoprotenas. Sin embargo, tambin est en los
quilomicrones y las VLDL, por lo que no nos va a dar resultados definitivos.
Las muestras normales obtenidas en ayunas solo tienen trazas de VLDL y
quilomicrones. En este caso, la prueba de Al proporciona una aproximacin bastante
razonable de los niveles de HDL. Por el contrario, la apo B se encuentra sobre todo en
la LDL y no est en la HDL. Su mtodo de deteccin servir de diagnstico precoz de
hipercolesterolemia primaria.
Aspecto del suero: test de Havel.
Se observa la apariencia de la muestra contenida en un tubo de vidrio y que ha estado
en reposo en frigorfico durante 12 horas a una temperatura de 40C.
La prueba sirve para conocer la existencia o no de quilomicrones. Es econmica y fcil
de realizar. Es necesario analizar la muestra en tubos transparentes y que la etiqueta
no tape la muestra, especialmente el menisco. Si se forma una capa cremosa en la
superficie del suero, ste contiene quilomicrones, y puede indicar que la muestra no
se tom en ayunas o hay una alteracin de la lipoproteinlipasa. Si toda la muestra
est muy turbia indica un alto nivel de VLDL.
26

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TEMA 8. LOS LIPIDOS EN EL LABORATORIO DE DIAGNSTICO CLNICO.

TEMA 8. LOS LIPIDOS EN EL LABORATORIO DE DIAGNSTICO CLNICO.

No se disuelven en agua (hidrofbicas), formando estructuras denominadas

Se disuelven en disolventes orgnicos, tales como cloroformo, benceno, aguarrs o

Son untosos al tacto.

Se trata de compuestos orgnicos que son steres o potenciales steres de cidos

Son componentes estructurales de la membrana. (fosfolpidos de la bicapa

Reserva energtica (triglicridos).

Con frecuencia se combinan con otras biomolculas (azcares o glucolpidos,

Propiedad reguladora (como las vitaminas y hormonas)

En base a los esqueletos, los lpidos se pueden clasificar en:

Lpidos complejos: poseen cidos grasos como componentes. Se diferencian unos

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Lpidos simples: no poseen cidos grasos y por tanto no son saponificables y no

Saturados: en su cadena alqulica no existen dobles enlaces.

Insaturados: en su cadena alqulica hay dobles y triples enlaces. Si tienen ms

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Los cidos grasos que se precisan en la dieta, se llaman esenciales ya que si

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Una de las propiedades ms significativas de los triglicridos es su falta de

A igualdad de peso, la cantidad de ATP que se obtiene de su oxidacin es 2,5

saturados o contienen un solo doble enlace (monoinsaturados), lo cual es una ventaja

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lpidos polares anfipticos (poseen un extremo hidroflico [soluble en agua] y otro

Segn el grupo de cabeza que se une al

Funciones de los fosfolpidos:

pulmn, es decir, impide la atelectasia al final

esfingolpidos tienen tres

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(galactosa en SNC sobre todo y tambin glucosa) por enlace -glucosdico.

Las funciones son:

LPIDOS SIMPLES: no contienen cidos grasos; aparecen en las clulas y en los

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Terpenos: Entre sus caractersticas estn:

Algunos forman aceites esenciales obtenidos de plantas, como el mentol,

El escualeno, es el precursor del colesterol.

Un grupo importante es el de los carotenoides, en el que el -caroteno es el

Esteroides: el primer precursor es el lanosterol que es el precursor del colesterol

La molcula de colesterol comprende:

Un grupo hidroxilo en el carbono 3.

Un doble enlace entre el carbono 5 y 6.

Un grupo metilo en el carbono 10.

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Otro grupo metilo en el carbono 13.

Una cadena de 8 carbonos unida al carbono 17.

Componente de las superficies y membranas celulares.

Precursor inmediato de los cidos biliares.

Precursor de diversas hormonas como cortisol, aldosterona, estrgenos y

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Apo C: su principal funcin es activar a la LPL conduciendo a la descomposicin de

Apo E: funciona como marcador de los receptores hepticos; se sintetiza en el

y VLDL que cuando se

degradan la devuelven al hgado.

Las lipoprotenas se diferencian entre s por la diferente proporcin de colesterol, TG y