UNIVERSIDAD

NACIONAL JORGE
BASADRE GROHMANN

INFORME
PRACTICA NRO 2
PREPARACIÓN DE MEDIOS DE
CULTIVO

ALUMNO: OMAR ANTHONY ´PONCE

MAMANI
CODIGO: 2016-108034

TACNA-PERU
2021
 PRACTICA N°2: PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO
Área Laboratorio de Biotecnología Vegetal
Práctica No. 2 Duración 2h
Nombre de
Preparación de soluciones stock del medio de cultivo de Murashige y Skoog.
la Práctica

Unidad Temas Subtemas

Medios de Cultivo 4.1.- Generalidades
1 4.2. - Componentes del medio de
cultivo
4.3.- Preparación y manejo de
soluciones Stock
4.4.- Preparación de los medios de
cultivo
Equipamiento para el cultivo in 2.1 Áreas del laboratorio de cultivo
vitro de plantas. de tejidos.
2.2 Material y equipo de
laboratorio.
2.5 Componentes del medio de
cultivo.
2.6 Preparación y manejo de
soluciones Stock.
2.7 Preparación de los medios de
cultivo.

1. Introducción
La célula vegetal para su metabolismo requiere elementos esenciales, los cuales le permiten
completar su ciclo normal de vida; algunos los requieren en cantidades mayores, por lo que se
llama macroelementos (C, H, O, N, P, K, Ca, Mg y S); y los que requiere en menores cantidades
son llamados microelementos (Fe, Mn, Cu B, Mo, Zn, y Cl) (Vidalie, 1986).

Dentro del Cultivo de Tejidos Vegetales, la preparación del medio de cultivo es fundamental para
el éxito en el establecimiento de cualquier cultivo, sea cual fuere el objetivo del mismo, ya que a
través del mismo, se proporciona a los explantes en primera instancia de los nutrientes requeridos
para su óptimo desarrollo, así como carbohidratos, vitaminas, aminoácidos, entre otros, y
reguladores del crecimiento, con los cuales es factible de inducir determinados patrones de
desarrollo. Dicha solución generalmente se encuentra en estado semisólido por el empleo de agar,
phytagel o gelrite (López Peralta, 1985).

La base de los medios de cultivo, son las sales inorgánicas que constituyen los macro y
micronutrientes esenciales y/o benéficos para las plantas. Existiendo diversas formulaciones de
estas siendo las más conocidas, los medios de Murashige y Skoog (MS), Gamborg (B5), Kao y
Michayluk (KM), Heller, Chu, y Nitsch entre otros (Ozias-Akins & Vasil, 1985). El medio
“universal” por llamarlo de esta manera, por ser el más socorrido para la mayoría de las especies
y por la mayoría de los investigadores es el medio de Murashige y Skoog (Anexo 1) (Gamborg &
Shyluk, 1981).

Dentro del cultivo de tejidos vegetales, estos elementos se agrupan en compuestos orgánicos e
inorgánicos con un grado de reactivo específico, los cuales deben ser disueltos en agua. En
ocasiones se requieren concentraciones muy bajas de alguno de ellos, por lo que es necesario
preparar soluciones a una elevada concentración y a partir de esta diluirla hasta la concentración
requerida (Vidalie, 1986). Esto hace más rápida la futura preparación de medios y minimiza los
errores (debidos a las numerosas pesadas de cantidades muy pequeñas).

Para facilitar la preparación es necesario tener estándares de concentración conocida, llamadas

Soluciones Madre o Stock. Existen varias formas de expresar la cantidad de los compuestos en
una solución. Los principales son: porcentaje (%), molaridad (M) y partes por millón (PPM)
(Lopez Peralta, 1985). Algunos de las presentaciones que contienen estos elementos son
incompatibles químicamente (reaccionan entre si) y no se solubilizan, por lo que es necesario
agruparlos por afinidad química (Ozias-Akins & Vasil, 1985).

Por lo que, con la presente práctica, se pretende que el estudiante sea capaz de preparar las
Soluciones Stock, que permitan la adecuada preparación del medio de cultivo MS.

2. Competencia específica
Conocer las áreas de un laboratorio de biotecnología vegetal.
Preparar Soluciones Stock y medios de cultivo.

3. Competencias previas
Tener conocimientos básicos de química inorgánica y orgánica.
Tener conocimientos básicos de cristalería y materiales de uso común en un laboratorio.

4. Competencias genéricas a desarrollar

Instrumentales
Capacidad de organizar y
planificar actividades.
Habilidad para comunicación
oral y escrita
Habilidad para tomar
decisiones.
Habilidad para la selección y
el manejo de información a
través de las nuevas
tecnologías.
Habilidad para manejo de
equipo y reactivos utilizados
durante las prácticas.
Interpersonales
Habilidad para llevar a cabo
análisis y discusión de
información en equipo.
Habilidad para respetar y
valorar la participación de sus
compañeros de grupo.
Sistémicas
Capacidad para aplicar los
conocimientos en la práctica.
Habilidades para realizar
investigación
Capacidad para adaptarse a
diferentes ambientes de
trabajo.
Habilidad creativa.

5. Procedimiento
Equipo
Balanza granataria
Balanza analítica
Refrigerador
Plancha caliente con agitación
Materiales
10 Vasos de precipitados de
250 mL
1 Probeta graduada de 500 mL
1 Probeta graduada de 250 mL
10 Frascos ámbar de 500mL
con tapa
Papel aluminio grueso
Reactivos
Nitrato de Amonio (NH4NO3)
Nitrato de Potasio (KNO3)
Cloruro de Calcio
(CaCl2.2H2O)
Sulfato de Magnesio
(MgSO4.7H2O)
Fosfato de Potasio (KH2PO4)
 Espátula Etilendinitrotetracetato
Magneto disódico (Na2 EDTA)
Sulfato de Fierro
(FeSO4.7H2O
Ácido Bórico(H3BO3)
Sulfato de Manganeso
(MnSO4.4H2O)
Sulfato de Zinc (ZnSO4.7H2O)
Yoduro de Potasio (KI)
Molibdato de Sodio
(Na2MoO4.2H2O)
Sulfato Cúprico (CuSO4.5H2O)
Cloruro de Cobalto
(CoCl2.6H2O)
Glicina
Tiamina - HCl
Piridoxina – HCl
Acido Nicotínico
Myo-Inositol
Agua Destilada desionizada
Método
Solución 1 prepara la solución de Nitratos, que consiste en pesar:
41.25 g de NH4NO3 y 47.5 g de KNO3, se disuelven las sales en un matraz volumétrico usando
cerca de 150 ml y luego se afora a 250 ml, para esto se usa agua destilada y desionizada (solución
100X).

Solución 2 prepara la solución de Sulfatos, que consiste en pesar:

9.25 g de MgSO4·7H2O, 0.4225 g de MnSO4·4H2O, 0,215 g de ZnSO4·7H2O y 0.0006 g de
CuSO4·5H2O (en su defecto se pueden usar 2.5 mL de la Solución Mini Stock de este reactivo), se
disuelven las sales en un matraz volumétrico usando cerca de 150 ml y luego se afora a 250 ml,
para esto se usa agua destilada y desionizada. (solución 100X).

Solución 3 prepara la solución de Halógenos, que consiste en pesar:

11 g de CaCl2·2H2O, 0.0207 g de KI y 0.0006 g de CoCl2·6H2O(en su defecto se pueden usar 2.5
mL de la Solución Mini Stock de este reactivo), se disuelven en un matraz volumétrico usando
cerca de 150 ml y luego se afora a 250 ml. Se usa agua destilada y desionizada (solución 100X).

Solución No. 4 prepara la solución de Fosfatos, Boratos y Molibdatos, que consiste en pesar:

4.25 g de KH2PO4, 0.155 g de H3B03 y 0.0062 g de Na2MoO42H2O, se disuelven en un matraz
volumétrico usando cerca de 150 ml y luego se afora a 250 ml. Se usa agua destilada y
desionizada (solución 100X).

Solución No.  5 prepara la solución de Fe-Quelatos, que consiste en pesar 0.6962 g de

FeSO4·7H2O y 1.0324 g de Na2EDTA·2H2O, se disuelve primero el FeSO4·7H2O en 50  ml de
agua; separadamente se disuelve el Na 2EDTA·2H2O en 50 ml de agua, calentando un poco a
baño de María; se mezclan ambas soluciones; agitan bien y se dejan enfriar. Se completan con
agua destilada hasta obtener 250 ml, Esta solución se mantiene en la oscuridad, (solución 100X);
Solución 6 repara la solución de Orgánicos, que consiste en pesar.
2.5 g de Myo-Inositol, 0.0025 g de Tiamina·HCl, 0.0125 g de Piridoxina·HCl, 0.05 g de Glicina
y 0.0125 g de Ácido Nicotínico, se disuelven en un matraz volumétrico usando cerca de 150 ml y
luego se afora a 250 ml. Se usa agua destilada y desionizada (solución 100X).

Para evitar errores de pesado es recomendable preparar previamente las soluciones Mini Stock de
Sulfato de Cobre (CuSO4·5H2O) y de Cloruro de Cobalto (CoCl2·6H2O).

Solución Mini stock de Sulfato de Cobre, pese 0.0125 g de CuSO4·5H2O y disuelva en un

matraz con aproximadamente 20 mL de agua destilada desionizada, posteriormente afore a 50
mL (solución 1000X).

Solución Mini stock de Cloruro de Cobalto, pese 0.0125 g de CoCl2·6H2O y disuelva en un

matraz con aproximadamente 20 mL de agua destilada desionizada, posteriormente afore a 50
mL (solución 1000X).

6. Resultados y Discusión
Si se desea prepara una solución 100x de la solución 1: Nitratos, los cálculos para saber cuanto
debo pesar son los siguientes:

El medio MS debe tener 1650 mg L -1 de Nitrato de Amonio (NH4NO3) y 1900 mgL-1 de Nitrato de
potasio (KNO3), para no estar efectuado el pesado de cada reactivo al preparar el medio de
cultivo, lo mas común es preparar una solución concentrada que contenga ambos reactivos.

Lo primero es determinar cuanto debo agregar por litro de solución stock, en este caso:

NH4NO3 si necesitamos 1650 mg L-1 y vamos a hacer una solución 100x, entonces:

1650 x 100 = 165 000

KNO3 si necesitamos 1900 mg L-1 y vamos a hacer una solución 100x, entonces:

1900 x 100 = 190 000

estas cantidades son las que se requerirían para preparar un litro de Solución Stock, pero como se
van a preparar 250 mL, entonces:

Para el NH4NO3 si necesitamos 165 g (165 000 mg) en un Litro, para 250 mL:

165 es a 1
X es a 0.25

entonces:
X= 165 x 0.25
X= 41.25 g

Es decir que se requieren 41.25 g de NH4NO3 para preparar 250 mL de la Solución Stock 1; y:

Para el KNO3 si necesitamos 190 g (190 000 mg) en un Litro, para 250 mL:
 190 es a 1
X es a 0.25

entonces:
X= 190 x 0.25
X= 47.5 g

Por lo que es necesario adicionar también 47.5 g de KNO 3 para terminar de preparar 250 mL de
la Solución Stock 1

Estos procedimientos son similares para el resto de los componentes del medio de cultivo de
Murashige y Skoog.

7. Cuestionario
Complete el cuadro del Anexo 2, calculando lo que se requiere pesar de cada reactivo para
preparar 1000, 500 y 100 mL respectivamente de cada una de las 6 soluciones stock del medio de
Murashige y Skoog.
Preguntas: A) Describa con sus palabras que es un medio de cultivo. B) ¿Cuáles son los
componentes del medio MS y los aditivos que contiene el concentrado? C) ¿Por qué se debe
ajustar el pH del medio?

8. Evaluación de la Práctica
La evaluación se apegará a las preguntas realizadas en la práctica para su desarrollo y entrega del
informe en la próxima sesión.

9. Bibliografía
Lopez Peralta, C. (1985). Medios de Cultivo. En V. M. Villalobos Arámbula, Fundamentos
Teórico Prácticos de Cultivo de Tejidos Vegetales (págs. 25-53). Chapingo, México,
México: Centro de Genética, Colegio de Postgraduados.
Gamborg, O. L., & Shyluk, J. P. (1981). Nutrition, Media and Characteristics of Plant Cell and
Tissue Culture. En T. A. Thorpe, Plat Tissue Culture. Methods and Aplications in
Agriculture (págs. 21-44). New Yorl, USA: Academic Press Inc.
Vidalie, H. (1986). Cultivo In Vitro. México: Editorial Científica S.A de C.V.
Anexo 1

Sales nutritivas del medio Murashige y Skoog (1962).

Sol. Stock
Peso
Reactivo Químico Fórmula mg·L-1 100x
Molecular
g/250 mL
Solución 1: Nitratos
Nitrato de Amonio NH4NO3  80.04 1650 41.25
Nitrato de Potasio KNO3 101.108 1900 47.5
Solución 2: Sulfatos
Sulfato de Magnesio MgSO4·7H2O 246.48 370.00 9.25
Sulfato de Manganeso MnSO4·4H2O 169.01 16.90 0.4225
Sulfato de Zinc ZnSO4·7H2O 278.54 8.60 0,215
Sulfato de Cobre CuSO4·5H2O 249.68 0.025 0.0006
Solución 3: Halógenos
Cloruro de Calcio CaCl2·2H2O 147.02 440 11
Yoduro de Potasio KI 166.01 0.83 0.0207
Cloruro de Cobalto CoCl2·6H2O 237.93 0.025 0.0006
Solución No. 4 : PO4, BO3, MoO4
Fosfato de Potasio
KH2PO4 136.09 170 4.25
Monobásico
Ácido Bórico H3B03  61.83 6.20 0.155
Molibdato de Sodio Na2MoO42H2O 241.95 0.25 0.0062
Solución No.  5:  Fe-
Quelatos
Sulfato Ferroso de FeSO4·7H2O 278.028 27.85 0.6962
Etilendinitrotetracetato
Na2EDTA·2H2O 372.30 37.25 1.0324
disódico
Solución 6: Orgánicos
Myo-Inositol C6H12O6 180.16 100 2.5
Tiamina·HCl C12H17ClN4OS·HCl 337.27 0.10 0.0025
Piridoxina·HCl C8H11NO3·HCl 205.60 0.50 0.0125
Glicina NH2CH2COOH 75,0666 21 0.05
Ácido Nicotínico C21H27N7O14P2 123,1094 0.50 0.0125
Anexo 2

Completa la Tabla con la cantidad que debes pesar para preparar 1000, 500 y 100 mL de Solución
Stock de cada una de las 6 soluciones del medio de Murashige y Skoog.

Sol. Stock 100x

Reactivo Químico mg·L-1
g/1000 mL g/500 mL g/100 mL
Solución 1: Nitratos
Nitrato de Amonio 1650 165g 82.5g 16.5g
Nitrato de Potasio 1900 190g 95g 19g

Solución 2: Sulfatos
Sulfato de Magnesio 370.00 37g 18.5g 3.7g
Sulfato de Manganeso 16.90 1.69g 0.845g 0.169g
Sulfato de Zinc 8.60 0.86g 0.43g 0.086g
Sulfato de Cobre 0.025 0.0025g 0.00125g 0.00025g

Solución 3: Halógenos
Cloruro de Calcio 440 44g 22g 4.4g
Yoduro de Potasio 0.83 0.083g 0.0415g 0.0083g
Cloruro de Cobalto 0.025 0.0025g 0.00125g 0.00025g

Solución No. 4 : PO4, BO3, MoO4

Fosfato de Potasio 17g 8.5g
170 1.7g
Monobásico
Ácido Bórico 6.20 0.62g 0.31g 0.062g
Molibdato de Sodio 0.25 0.025 0.0125g 0.0025g

Solución No.  5:  Fe-Quelatos 2.785g 1.3925g 0.2785g

Sulfato Ferroso 27.85
Etilendinitrotetracetato 3.725g 1.8625g
37.25 0.3725g
disódico

Solución 6: Orgánicos
Myo-Inositol 100 10gr 5g 0.1g
Tiamina·HCl 0.10 0,01g 0.005g 0.001g
Piridoxina·HCl 0.50 0.05g 0.025g 0.005g
Glicina 21 2.1g 1.05g 0.21g
Ácido Nicotínico 0.50 0.05g 0.025g 0.005g
CUESTIONARIO:

A) Describa con sus palabras que es un medio de cultivo.

Es una solución donde se compone de macro y micronutrientes para el crecimiento óptimo de

tejidos vegetales, se usan en laboratorios de biotecnología.

B) ¿Cuáles son los componentes del medio MS y los aditivos que contiene el concentrado?

 Agar(gel)
 Macronutrientes (C, H, O, N, P, K, Ca, Mg y S)
 micronutrientes (Fe, Mn, Cu B, Mo, Zn, y Cl)
 Carbohidratos
 Vitaminas
 Aminoácidos y extractos naturales
 Agua.

C) ¿Por qué se debe ajustar el pH del medio?

Para que los nutrientes sean asimilados por los tejidos vegetales de manera satisfactoria y así mismo
también tenga una correcta fertirrigacion.