UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN

MARCOS

FACULTAD DE QUIMICA E INGENIERÍA QUÍMICA

DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE QUÍMICA ORGÁNICA

CURSO: PRODUCTOS NATURALES

TRABAJO DE LABORATORIO N° 2

TRITERPENOS

PROFESOR: Nino Castro, Mandujano

ALUMNOS: Jimenez Zarate, Angelica Jasmin 16070084
Aliaga Cerron, Jhonny Roger 14070066

2021-0
Contenido
INTRODUCCIÓN ........................................................................................................................ 3
CLASIFICACIÓN DE LOS TERPENOS .................................................................................... 4
Los diterpenos ........................................................................................................................... 5
Biosíntesis de diterpenos ........................................................................................................... 5
Aplicaciones de terpenos........................................................................................................... 6
Extracción de terpenos con solvente ......................................................................................... 6
Extracción de terpenos sin solvente .......................................................................................... 6
PARTE EXPERIMENTAL........................................................................................................... 7
Información taxonómica ........................................................................................................... 7
Recolección de material ............................................................................................................ 7
Preparación de Extractos Crudos .............................................................................................. 7
Fraccionamiento y purificación ................................................................................................. 7
RESULTADOS Y DISCUSIÓN ................................................................................................... 9
BIBLIOGRAFÍA......................................................................................................................... 14
INTRODUCCIÓN

Los terpenos, también denominados isoprenoides, constituyen el grupo más abundante de

los aceites vegetales; de hecho, son los responsables de los aromas y sabores específicos
de las plantas, mientras mayor sea la cantidad de oxígeno en la molécula, mayor será su
aroma. Estos compuestos se forman a partir del isopreno (unidad de 5 átomos de carbono);
pueden contener desde una hasta ocho unidades. Las unidades pueden arreglarse
linealmente (como en el escualeno) o cíclicamente (como en la limonina). A pesar de que
los terpenos están presentes en la gran mayoría de formas de vida, las plantas en particular
destacan por albergar una impresionante diversidad de estos compuestos, teniendo
además una amplia heterogeneidad en cuanto a función y estructura. Dentro de los
terpenos se clasifica a los carotenoides que son tetraterpenos muy importantes en los
mamíferos, especialmente el β-caroteno que es precursor de la vitamina A (11-cis-
retinal). También las vitaminas liposolubles D (colecalciferol) y K son consideradas como
terpenos. Estos compuestos tienen funciones primordiales en las plantas como pigmentos
fotosintéticos (carotenoides), acarreadores de electrones (ubiquinona y plastoquinona),
reguladores de crecimiento y desarrollo (fitohormonas), en la glicosilación de proteínas
(dolicol) o como elementos estructurales y funcionales de la membrana celular
(fitoesteroles). Sin embargo, metabolitos terpenoides especializados han sido reconocidos
por su gran variedad de funciones biológicas, por ejemplo, moléculas como isopreno,
monoterpenos, sesquiterpenos y diterpenos están implicados en la protección contra el
estrés abiótico e interacciones bióticas. Los terpenos forman parte importante, aunque
algunas veces imperceptible, de la cotidianidad del ser humano, son utilizados por sus
diferentes propiedades, por ejemplo, saborizantes, colorantes, aromáticas, antitumorales,
antioxidantes, antibióticos, insecticidas, entre muchas otras más.
CLASIFICACIÓN DE LOS TERPENOS

Los compuestos terpenoides son los productos naturales más abundantes, actualmente se
han registrado 46000 compuestos, sin embargo, a pesar de la evidente diversidad en su
estructura y función todos los terpenos se derivan del isopentenil difosfato (IPP) o de su
isómero de doble enlace pirofosfato de dimetilalil, conocido como DMAP (Fig. 1). Estas
moléculas son unidades básicas de 5 átomos de carbono. Los precursores de los terpenos
se producen mediante dos rutas metabólicas: la vía del mevalonato (MVA) y la vía del
metileritritol fosfato (MEP); anteriormente se creía que la ruta MVA era la única vía de
síntesis de estos precursores, sin embargo, en la última década del siglo pasado, una
segunda ruta (MEP) fue detectada en bacterias. La ruta MVA es la única que produce los
precursores IPP y DMAP en animales y hongos; en el caso de las células vegetales esta
ruta produce IPP en el citosol, mientras que en los plastidios se lleva a cabo la ruta MEP
enlace pirofosfato de dimetilalil (DMAPP).

Figura 1. Estructura química del precursor isopentenil difosfato (IPP) y su isómero de doble

Los terpenos son clasificados según el número de unidades (isopreno) por el que estén
conformados (Tabla 1); pueden arreglarse linealmente o pueden ciclarse. El primer grupo
se divide en mono-, sesqui-, di- y triterpenos, los cuales contienen de dos a seis unidades
de isopreno; este grupo incluye a los carotenoides y sesterterpenoides. El segundo grupo
incluye a los meroterpenos, los indol diterpenos y el diverso grupo de los prenilados
aromáticos. Los terpenos más simples (mono- y sesquiterpenos) son los principales
constituyentes de los aceites esenciales, son ampliamente utilizados en la industria de la
perfumería; en general los monoterpenos hidrocarbonados como α y β pineno, limoleno,
δ-3-careno, α-felandreno y mirceno se encuentran en la mayoría de los aceites esenciales
vegetales, particularmente de aquellos extraídos de hojas, semillas y flores; mientras que
los di y triterpenos son compuestos menos volátiles que los anteriores y se obtienen de
las resinas vegetales. Los carotenos (tetraterpenos) conforman más de 600 estructuras
conocidas.
Los diterpenos
Los diterpenos son metabolitos secundarios constituidos por 4 unidades isoprénicas en
unión cabeza-cola (C20). Se distribuyen ampliamente en el reino vegetal, en especial, en
las familias Lamiaceae y Euphorbiaceae. Estudios previos que utilizan isótopos como
marcadores sugieren que la biosíntesis de los diterpenos en las plantas tiene lugar en los
plásmidos vía DOXP/MEP (1-deoxi-D-xilulosa-5-fosfato/2-C-metil-D-eritritol-4-
fosfato), también llamada vía gliceraldehído fosfato/piruvato, a través del grupo GGPP
(2E, 6E, 10E-geranilgeranilpirofosfato). En la Fig.3. se muestra un esquema de la
biosíntesis de los diterpenos. Las diferentes reacciones que se producen durante la síntesis
de estos compuestos conducen a la formación de los más de 5000 tipos que se conocen.
Se clasifican de acuerdo con el número de ciclos y al modo de ciclación de su esqueleto
en los siguientes grupos: acíclicos(ej.: fitanos), bicíclicos (ej.: labdanos, clerodanos),
tricíclicos (ej.: abietanos, pimaranos, rosanos, casanos), tetracíclicos (ej.: kauranos,
beyeranos, atisanos, giberelanos,traquilobanos) y diterpenos macrocíclicos (ej.: taxanos,
cembranos, tiglianos, ingenanos, dafnanos). En la familia Lamiaceae, los grupos más
comunes de diterpenos son los labdanos, neoclerodanos, pimaranos, abietanos y
kauranos.
Biosíntesis de diterpenos
Tiene lugar en los plásmidos vía DOXP/MEP (1-deoxi-D-xilulosa-5-fosfato/2-C-metil D-
eritritol-4-fosfato). La síntesis se inicia con la condensación de piruvato y de D
gliceraldehído-3-fosfato (intermediarios de la vía glicolítica) generándose el intermedio
1-deoxi-D-xilulosa-5-fosfato. La transposición y reducción de este primer intermediario
conduce a la formación de 2-C-metil-D-eritritol-4-fosfato. Sucesivas reacciones llevan
finalmente a la síntesis de pirofosfato de isopentenilo (IPP) y dimetilalil-pirofosfato
(DMAPP). La adición secuencial de IPP sobre el farnesilpirofosfato (FPP) origina
geranilgeranilpirofosfato (GGPP) que es el precursor de los diterpenos en C20.
Aplicaciones de terpenos

Los terpenos se emplean como disolventes orgánicos para disolver flujos de rosina,
huellas digitales, grasas pesadas de petróleo y aceites.
Conforman la base farmacológica de la aromaterapia.
Utilizados dentro de la cosmética como colorantes y pigmentos
Utilizados para la preparación de perfumes
Tienen propiedades insecticidas capaces de atraer, repeler y matar a los insectos.
Extracción de terpenos con solvente
Actualmente, un método que ofrece mejores rendimientos son las extracciones basadas
en solventes, que se realizan con puntos de ebullición más bajos utilizando hidrocarburos
y gases como el butano, etanol, nitrógeno o CO2. Estos métodos incorporan bombas de
vacío para reducir el calor inicial, manteniendo las temperaturas lo suficientemente bajas
como para evitar degradar cualquier compuesto bioactivo.

Una de las alternativas más utilizadas es la extracción con CO2. Este proceso utiliza calor
y presión para convertir el CO2 gaseoso en un fluido supercrítico, que se hace pasar a
través de la materia vegetal produciendo una resina concentrada que necesita ser refinada
en un horno de secado al vacío, aislando los terpenos del concentrado para que puedan
extraerse por separado, y garantizando que no queden restos de disolventes o restos de
agua. El CO2 no es inflamable, lo que hace que este proceso sea más seguro y eficiente.

Extracción de terpenos sin solvente

Para elaborar un extracto sin solvente se utilizan los principios del calor y la presión,
como se ha hecho en el negocio de los perfumes y los aceites esenciales desde hace cientos
de años. Con dos métodos principales: destilación por vapor e hidrodestilación.

La destilación por vapor implica suspender la materia prima vegetal sobre un recipiente
con agua hirviendo. A medida que el vapor pasa a través del material vegetal, los aceites
más ligeros, que incluyen ciertas clases de terpenos, se extraen del destilador hasta que
entran en contacto con un condensador, que enfría y licua el agua y los aceites. Los aceites
más ligeros flotan en la superficie del agua y se pueden recoger fácilmente.

La hidrodestilación es similar, excepto que el material vegetal se coloca directamente en

el agua hirviendo.

La ventaja de estos métodos es que, al no introducir disolventes, no hay peligro de diluir

el extracto con residuos químicos externos. Sin embargo, la destilación al vapor requiere
de una cantidad significativa de calor, con un tiempo de permanencia prolongado, lo que
puede alterar e incluso destruir muchos compuestos vegetales, incluidos los terpenos.
PARTE EXPERIMENTAL

Información taxonómica

❑ Reino: Plantae
❑ División: Tracheophyta
❑ Clase: Magnoliopsida
❑ Orden: Lamiales
❑ Familia: Lamiaceae
❑ Subfamilia: Nepetoideae
❑ Tribu: Mentheae
❑ Género: Salvia
❑ Especie: Salvia leucantha Figura 2. Hojas y flores de Salvia leucantha. Fuente: Krzysztof Ziarnek,
Kenraiz [CC BY-SA 4.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0)]

Recolección de material
El material vegetal se recolectó en el municipio de Chipaque en Cundinamarca a una
altura de 2668 msnm cuyas coordenadas son: Latitud 04° 56’ 10.58” N, Longitud 73° 50’
5.97” O. El municipio presenta un clima templado, óptimo para la adaptación de la
especie en estudio y alcanza temperaturas que oscilan los 17 y 20 °C. Los ejemplares se
recolectaron de acuerdo con los parámetros indicados en el Jardín Botánico José Celestino
Mutis.
Preparación de Extractos Crudos
507 g de material vegetal (hojas) seco y molido fueron sometidos a una extracción por
maceración en frio con éter de petróleo durante un mes reconstituyendo el solvente cada
72 horas, los extractos fueron concentrados a presión reducida en un rotaevaporador
obteniendo el extracto éter de petróleo (E. EdP) (12,7011g). El material vegetal utilizado
durante la maceración con EdP se dejó secar a temperatura ambiente y se sometió a una
segunda extracción con etanol aplicando el mismo procedimiento del extracto anterior
obteniéndose el extracto etanólico (E. EtOH) (38.098 g).
Fraccionamiento y purificación
Los extractos se fraccionaron por cromatografía en columna (CC) repetitiva utilizando
como fases móviles diferentes mezclas de disolventes que en ensayos previos por
cromatografía en capa fina (CCD), permitieran una buena separación y selectividad, lo
cual dependió de la naturaleza del extracto/fracción.
Tabla 2. Condiciones para la cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas (CG-EM)

Cromatógrafo de gases SHIMADZU QP-2010 PLUS, equipado con un

puerto de inyección split/splitess (250°C, relación de split10:1), y un
Equipo inyector automático Shimadzu AOC20i. Se utilizó una columna capilar
SHRXI-5MS (SHIMADZU) de 30m x 0,25mm (ID) x 0,25 μm (df), con fase
estacionaria 5% fenilo 95% dimetilpolisiloxano.
50 °C (2 min) a15 °C/min, hasta 200 °C (2 min), finalmente, la
Condiciones del Horno
temperatura aumentó a 10 °C/min hasta alcanzar 300 °C (2 min).
Los espectros de masas se obtuvieron por ionización electrónica (EI)
con una energía de 70 eV. Las temperaturas de la cámara de
Condiciones ionización y de la línea de transferencia fueron de 230 y 275 ºC,
respectivamente. El gas de arrastre utilizado fue helio (Aga Fano, S.A,
grado 5,0), con flujo constante de 1,2 mL /min
Equipos utilizados en la Cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas
(CG-EM)

Figura 3. Cromatógrafo de gases SHIMADZU QP-2010 PLUS, equipado con un puerto de

inyección split/splitess

Figura 4. inyector automático Shimadzu AOC20i

Figura 5. columna capilar SHRXI-5MS (SHI-

MADZU) de 30m x 0,25mm (ID) x 0,25 μm (df)
RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Análisis Fitoquímico Preliminar

Los resultados obtenidos en la análisis Fitoquímico preliminar fueron clasificados según
el protocolo propuesto por Ugochukwu et al., 2013, en donde (-) significa NO detectado
y (+) significa detectado. Dichos resultados se muestran en la tabla numero 3:

Tabla 3. Análisis Fitoquímico Preliminar de Salvia leucantha hojas

La identificación de terpenos arrojó resultados positivos. Se realizó la caracterización

cualitativa haciendo uso de la prueba de Lieberman Burchard y utilizando como patrón
colesterol. De esta manera se observó que cuando se trata tanto el patrón como el extracto
de EdP con el reactivo mencionado se observa una coloración que va desde azul hasta
verde intenso dando positiva esta prueba para terpenos y esteroles.
Fraccionamiento y Purificación
Extracto soluble en éter de petróleo
Una vez detectados los grupos de metabolitos, se procedió al fraccionamiento del extracto
soluble en EdP. Para ello se realizó una CC en fase normal sobre gel de sílice, el
monitoreo se llevó a cabo por CCD. Después de purificaciones sucesivas, se obtuvieron
tres compuestos de tipo terpenoide, los cuales se analizaron por CG-EM y respectiva
comparación con la librería NIST-08, la cual arrojó porcentajes de coincidencia mayores
al 95 %, cuyas estructuras y espectros de masas se exponen en la Figura 1.
 Acetato de lupeol

Acetato de α-amirina

Tocoferol
 α-amirina

γ- sitosterol

Figura 6. A) Estructuras de los compuestos aislados de la extracto soluble en EdP (1-3) y del
extracto etanólico (4-5); B) Espectros de masas a 70 eV de los compuestos aislados 1-5.

Compuesto 1: Sólido blanco (13,3 mg), obtenido mediante purificación por CC, eluido
con Hex:Me2CO (7:3) (Rf en CCD equivalente a 0,74). El compuesto dio prueba positiva
al reactivo de Lieberman–Burchard y al reactivo en placa con vainillina- H2SO4, lo que
indica que posiblemente se trata un compuesto con núcleo triterpénico. El análisis del
espectro de masas permite establecer la fórmula molecular C32H52O2, a partir del ion
molecular m/z 468. Los fragmentos más importantes para el diagnóstico estructural son:
m/z 249, que coincide con la eliminación de parte de la estructura hidrocarbonada
correspondiente a los anillos C (parcialmente), D, E y el grupo isoprenilo. El fragmento
m/z 189 (249-AcOH), que corresponde a la eliminación del grupo acetato. El patrón de
fragmentación del compuesto 1 pertenece a las rupturas típicas de triterpenos
pentacíclicos que, de acuerdo con lo mencionado, este compuesto fue identificado como
con el acetato de lupeol (1), cuya comparación con la librería NIST-08 mostró un 97% de
coincidencia.
Compuesto 2: Sólido marrón (5,6 mg), obtenido por CC utilizando un sistema
cromatografico Hex-Me2CO (7:3) como fase móvil (Rf en CCD de 0,80). Igualmente se
sometió a las pruebas de Lieberman–Burchard y revelado en placa con Vainillina- H2SO4,
cuyo resultado en ambos casos fue positivo, lo cual es característico para compuestos del
tipo triterpeno. El Espectro de masas permitió establecer el patrón de fragmentación en la
cual se observó la presencia del ion molecular m/z 468, con la fórmula molecular,
C32H52O2. Los fragmentos m/z 249, 218, 203, y 189 constituyeron a los denominados
picos diagnóstico para esqueletos tipo amirina. El fragmento m/z 218 es el más
representativo, porque corresponde a un reordenamiento Retro-Diels-Alder (RDA), en el
anillo que posee el doble enlace, siendo una evidencia de la existencia de esa instauración.
De acuerdo con el anterior análisis, este compuesto fue identificado como el acetato de α
-amirina (2), cuya comparación con la librería NIST-08 mostró un 95% de coincidencia.
Compuesto 3: Sólido blanco (7,1 mg), soluble en EdP y CHCl3, obtenido por CC utilizan-
do como fase móvil Hex:Me2CO (7:3). El espectro de masas muestra una señal a 430
uma, lo que es indicativo de la señal correspondiente al ion molecular. Se observa el pico
base con m/z 165 formado por la ruptura del anillo saturado contiguo al anillo de benceno
sustituido. Se presentó el ion de m/z 205 relacionado con la pérdida de la cadena lateral
hidrocarbonada. El análisis por espectrometría de masas (EM) a 70 eV y la respectiva
comparación con la biblioteca NIST-08 reporto un 96% de concordancia con α -tocoferol
(3).
Compuesto 4: Corresponde a un sólido blanco que peso 6.3 mg, soluble en EdP y CHCl3,
eluido tras una CC cuya fase móvil fue DCM-AcOEt (7:3) (Rf =0.64). Este compuesto
fue revelado con Vainillina-H2SO4 y Lieberman–Burchard, dando prueba positiva para
ambos casos, indicando que probablemente se trata de un triterpeno. El espectro de masas
mostró el ion molecular en m/z 426 acorde a la fórmula molecular C30H50O. Se observa
un pico de pequeña intensidad con m/z 411, correspondiente a la pérdida de un grupo CH3
a partir del ion molecular, siendo el pico base del espectro m/z 218, el cual se forma tras
una reacción de Retro Diels-Alder en el anillo C, a partir del cual se originan los iones
con m/z 203 por la pérdida de un grupo CH3 y m/z 189, debido a la pérdida del grupo
C2H5 por la ruptura del enlace que une a los anillos D y E. También se presenta un ion a
m/z 207 que contiene a los anillos A y B. Los resultados obtenidos están en
correspondencia con lo reportado para la α -amirina, cuya comparación con la librería
NIST-08 arrojo un 95% de coincidencia.
Compuesto 5: Corresponde a un sólido gris (4,1 mg) fue monitoreada por CCD utilizan-
do una mezcla de disolventes DCM-MeOH 8:2 (Rf = 0,68) y posteriormente revelada con
Vainillina-H2SO4, generando un punto de color morado, indicando la presencia de
terpenos, para lo cual se confirmó con la prueba de Lieberman–Burchard. En el espectro
de masas muestra el perfil de fragmentación característica de esteroides, en el cual se
observaron señales a m/z 396, correspondientes a un fragmento del esteroide con una
pérdida de una molécula de agua (m/z M+-18), (proveniente del grupo OH de la posición
3). Este fragmento sufre una nueva fragmentación dando origen al fragmento a m/z 255,
el cual se forma por la pérdida de la cadena lateral unida carbono 17. Por otra parte, se
ven claramente el fragmento del esteroide a 273 m/z obtenido a partir de la pérdida de la
cadena lateral por parte del esteroide original y la posterior perdida de una molécula de
agua (m/z M+-18), proveniente del grupo OH de la posición 3. De esta manera el
compuesto 5 fue identificado como el γ -sitosterol, cuya comparación con la librería
NIST-08 arrojo un 95% de coincidencia.

El estudio fitoquímico preliminar realizado a la especie Salvia leucantha dió como

resultado la identificación de triterpenoides como acetato de lupeol, α -amirina, acetato
de α -amirina y γ -sitosterol, indicando que esta especie, al igual que otras del mismo
género y familia, son ricas en triterpenos como Salvia argéntea (Lakhal et al., 2014),
Salvia chinensis (Wang et al., 2009), Salvia multicaulis (Ulubelen et al, 1998), Salvia
viridis (Rungsimakan & Rowan, 2014), Salvia glutinosa (Topcu et al., 1997) y Salvia
przewalskii (Xue et al., 2014).
BIBLIOGRAFÍA

 Cely Veloza WF, Matulevich J, Castrillón W. Triterpenos y Esteroles de

Salvia Leucantha (Lamiaceae) y Evaluación de su Capacidad Antioxidante.
Rev Fac Ciencias Básicas. 2014;10(1):68.

 https://www.investigacionyciencia.es/revistas/investigacion-y-
ciencia/neurociencia-de-la-identidad-549/los-terpenos-de-las-plantas-8599
 https://www.fundacion-canna.es/los-terpenos

 https://www.lifeder.com/salvia-leucantha/

 JESÚS PALÁ P. CONTRIBUCIÓN AL CONOCIMIENTO DE LOS

ACEITES ESENCIALES DEL GÉNERO Eryngium L., EN LA PENÍNSULA
IBÉRICA [Doctorado]. UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID;
2002.