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MARCHA FITOQUMICA PRELIMINAR DE LA ESPECIE CONIUM

MACULATUM L. (CICUTA)
*Chiappe, Andrea; Castaeda, Brian; Daz, Jonnathan; Rodrguez, Diego & Romero, Juan Manuel
Corporacin Tecnolgica de Bogot
Carrera 21 No. 53 D 35, Bogot Colombia
Tecnologa en Regencia de Farmacia
*Docente asesora en la investigacin

Resumen
Esta investigacin se divide en tres partes principales, las cuales son esenciales en el proceso de
una marcha fitoquimica preliminar convencional: Extraccin, identificacin y separacin
cromatografica de los metabolitos secundarios. En la primera parte (extraccin de metabolitos)
se hizo el correspondiente secado y macerado de las partes areas de las planta (hojas y flores),
por otro lado con el material seco se extrajeron el aceite esencial por el mtodo de arrastre por
vapor y el extracto etanlico con el mtodo Soxhlet. El aceite esencial no se obtuvo. En la
segunda parte se efectu la identificacin de metabolitos secundarios por medio de pruebas
especficas para cada grupo dependiendo de sus caractersticas qumicas y estructurales. La
preparacin de las muestras se hizo con una disolucin de la goma en etanol y ter de petrleo.
A cada muestra se le agrego un reactivo que determinaba la presencia de un tipo de metabolito
en particular. Se encontr la presencia de alcaloides en las races, hojas, semillas y frutos;
presencia de Flavonoides en la corteza y Cumarinas en los frutos, presencia de Carotenoides en
las flores, presencia de compuestos parecidos a los cardiotnicos (tremetona) en las hojas y
presencia de esteroides (estigmasterol y -citosterol) en las hojas. Por ltimo, se probaron varias
mezclas de solventes (polares y apolares), a diferentes proporciones para determinar cul de
ellos corra mejor con una muestra del extracto etnolico de la especie vegetal Conium
Maculatum L. en cromatografa en capa fina (TLC). Se determin que el mejor solvente fue la
mezcla entre Acetato de Isopropilo y cloroformo (1:1).
Palabras claves: marcha fitoquimica, metabolitos secundarios, muestra vegetal, cromatografa
en capa fina, cicuta, quimiotaxonoma y partes areas.
Abstract
This research is divided into three main parts, which are essential in the process of a
conventional preliminary phytochemical up : Extraction, chromatographic separation and
identification of secondary metabolites . In the first part (extraction of metabolites) and the
corresponding macerated dried aerial parts of the plant (leaves and flowers) , on the other hand
with the dry material was the essential oil is extracted by steam drive method and ethanol
extract with Soxhlet method. The essential oil was not obtained . Identification of secondary
metabolites was carried out by specific tests for each group depending on their chemical and
structural features in the second half. The sample preparation was done with a solution of gum in
ethanol and petroleum ether. To each sample was added a reagent which determined the
presence of a particular type of metabolite . The presence of alkaloids in the roots , leaves,
seeds and fruits was found ; Flavonoids present in the cortex and the fruits Coumarins ,
carotenoids present in the flowers , presence of cardiac -like compounds ( tremetona ) on the
leaves and the presence of steroids (stigmasterol and - citosterol ) in the leaves. Finally ,
various mixtures of solvents ( polar and nonpolar ) at different ratios to determine which one
best running with a sample of the ethanol extract of the plant species " Conium maculatum L. "
on thin layer chromatography (TLC ) were tested . It was determined that the best solvent was
the mixture of isopropyl acetate and chloroform (1:1).
Keywords: phytochemical up, secondary metabolites,
chromatography, hemlock, chemotaxonomy and aerial parts.

plant

displays,

thin

layer

Introduccin
La especie Conium Maculatum, se encuentra
en extensas regiones de Europa, Amrica, y
norte de frica; se encuentra comnmente
en zonas de un ambiente hmedo, la planta
apetece de los suelos muy ricos en
nitrgeno, por lo cual se puede encontrar en
zonas tales como alrededores de establos,
caminos transitados por el ganado y el
hombre. Es una hierba perenne glabra.

Reino
Subreino
Divisin
Clase
Subclase
Orden
Familia
Subfamilia
Gnero
Especie

Plantae
Trachebionta
Magnoliophyta
Magnoliopsida
Rosidae
Apiales
Apiaceae
Apioideae
Conium
Conium Maculatum L.

Tabla No. 1 Taxonoma de la especie Conium


Maculatum L.

Las caractersticas morfolgicas son: un tallo


hueco, en donde se observan pequeas
manchas esparcidas a lo largo del tallo, de
color popular, con hojas de forma triangular
de tamao pequeo, verde-negro, son
blandas, divididas en gajos elpticos,
puntiagudos y dentados de hasta 5 cm de
largo y 4 cm de ancho. La altura de la planta
puede abarcar entre 1,20 hasta 2,00 metro
de alto. Tiene flores blancas pequeas de
forma ovoide, que se organizan en forma de
sombrilla. (San Andrs, M.I et al, 2000).

qumico frente a ciertas reacciones qumicas


estandarizadas.
Las reacciones qumicas estandarizadas
consisten en cambios qumicos en algn
grupo funcional de la estructura del
metabolito, y desde luego, la formacin de
otro compuesto qumico que al generar
cambio en la naturaleza y distribucin de los
enlaces, produce una manifestacin sensible
como cambio o perdida de color, o provoca la
precipitacin del nuevo compuesto o el
desprendimiento de gas (Rodrguez, 1997).

Figura 1. Conium Maculatum L. Fuente: Vetter (2005)

Las caractersticas fitoquimica de la planta


son que esta constituida por alcaloides de
piperidina: coniina (2-propilpiperidina), Nmetil-coniina
(1-metil-2-propilpiperidina),
conhidrine 2 - (1-hidroxipropil) - piperidina,
pseudoconhidrine
(5-hidroxipropil)
piperidina (stos estn saturados piperidina
alcaloides)
y
C-coniceine
(2n-propilpiperidina-1D), uno parcialmente insaturado
(ver. Fig. 2). Conhydrinone y N-metilpseudoconhydrine. (Corsi et al, 1991) De
igual manera presenta la presencia de
Flavonoides y Cumarinas en la corteza y el
tallo; esteroides en las hojas (estigmasterol y
-citosterol) (Fig. 3). (Radulovic, 2011)
Tambin se reporta la presencia de un
compuesto llamado Tremetona (Fig. 4)
(Garland, 1996).
La marcha fitoquimica preliminar se apoya
en un tratamiento general de extraccin y
sucesivas separaciones mediante solventes
de diferentes polaridades con el fin de
agrupar en fracciones los metabolitos
estructuralmente
semejantes
y
poder
caracterizarlos por su comportamiento

Figura 2. Alcaloides presentes en la especie Conium


Maculatum L. Fuente: Vetter (2005)

Los alcaloides presentes en la planta


presentan
caractersticas
toxicolgicas,
demuestran ser altamente txica para
muchas especies de animales, incluido el ser
humano, en donde se puede anotar que los
sntomas observados cuando es consumida
las
planta,
de
forma
natural
son:
Convulsiones, disfagia, disnea, dilatacin
pupilar, y muerte por parlisis respiratoria, y
en
recientes
investigaciones
se
ha
encontrado que algunos de los alcaloides
presentes en la planta, tiene efectos
teratognicos en los tejidos de la piel
(Larsson, 2004).

Imagen No. 1 Macerado y equipo Soxhlet


Figura 3. Estructura general de los esteroides
presentes en la especie Conium Maculatum L. (A.
Estigmasterol y B. -sitosterol) Fuente: Radulovic et al
(2011).

Identificacin
secundarios

de

metabolitos

Se concentr la muestra hasta la obtencin


de una goma, esta se diluy por un lado en
etanol y por otro en ter de petrleo. Se
cogi 1 mL de los extractos y se hicieron las
correspondientes pruebas de identificacin
con los reactivos indicados para cada
metabolito. (Tabla 2) Para las pruebas de
alcaloides se acidific el extracto etnolico.
Figura 4. Estructura general de la Tremetona.

Materiales y mtodos
Material vegetal
Se obtuvieron varias muestras vegetales de
las partes areas (flores y hojas) de la
especie Conium Maculatum L. en una zona
cerca a Chiquinquir, Boyac. Estas se
envolvieron en papel peridico y se dejaron a
la exposicin del sol por dos semanas en
donde se torno completamente seca.

Metabolito
secundario

Prueba
qumica

Reactivos

Extracto

Carotenoide
s

Salkoski

H2SO4 85%

Extracto
etreo

Reactivo de
LiebermanBurchard

Extracto
etreo

Cloruro
Frrico

Cloruro
Frrico 1%

Extracto
etnolico

Acetato de
Plomo

Acetato de
Plomo 10%

Extracto
etnolico

Esteroides y
Lieberman
trterpenoid
Burchard
es

Taninos

Obtencin de aceite esencial


Las muestras vegetales secas se pusieron en
un baln de dos bocas de 100 mL, se utilizo
la tcnica de arrastre por vapor, se uso agua
para la produccin de vapor, se recogi el
aceite obtenido en un enlermeyer de 100
mL.

Shinoda

HCl 10% y
Mg

Extracto
etnolico

Leucoantoci
anidas

HCl 10%

Extracto
etnolico

Quinonas

Comportami
ento ante
acido y
donador de
electrones.

Zinc, HCl
[ ] (NaOH
40%)

Extracto
etnolico

Saponinas

Espuma

Agua

Cardiotnic
os

Antrona

Reactivo de
Molish

Flavonoides

Obtencin de extractos etanlicos.


Previamente se macero una muestra vegetal
seca con etanol al 78% por 24 horas. Por otro
lado, en el laboratorio se cogi la muestra
seca y se puso en un baln de 100 mL, se
agreg Etanol absoluto, se monto el equipo
Soxhlet y se calent hasta obtener el
correspondiente extracto.

Extracto
etnolico

Gelatina-Sal

Extracto
etnolico
Extracto
etnolico

Molish

Sesquiterpe
nlactonas

Cumarinas

Hidroxamat
o frrico

Hidroxamat
o frrico

Erlich
Valser
Mayer
Alcaloides

Dragendorf
Schleiber
Wagner

Reactivo de
Antrona
Solucin
Metalnica
2N de
Clorhidrato
de
hidroxilamin
a, KOH 2N
Metalnico
Solucin
Metalonica
2N de
Clorhidrato
de
hidroxilamin
a, KOH 2N
Metalnico
Reactivo de
Erlich
Reactivo de
Valser
Reactivo de
Mayer

Extracto
etnolico

Reactivo de
Dragendorf

Extracto
cido

Reactivo de
Schleiber
Reactivo de
Wagner

Extracto
cido
Extracto
cido

Extracto
etnolico

Extracto
etnolico

Extracto
etanlico
Extracto
cido
Extracto
cido

Tabla 2. Reactivos y tipo de extracto utilizado en


las pruebas cualitativas de identificacin.

Separacin en Cromatografa en capa


fina (TLC)
Se prepararon 2 mL de tres mezclas de
diferentes solventes: ter de petrleo:etanol
(7:3); Cloroformo:acetato de Isopropilo (1:1)
y tolueno:etanol (3:7). Se satur la cmara
(vaso de precipitados) por 20 minutos y se
dej correr la fase mvil en una placa de
cromatografa de Almina. Se agreg
Vainillina a cada una de las tres placas
(Figura 13) y se calentaron en una plancha
de calentamiento hasta su correspondiente
revelado.
Resultados y discusin
Obtencin del aceite esencial
Para el mtodo de extraccin por arrastre
con vapor no se obtuvieron resultados,
debido a que la cantidad de aceite esencial
obtenida fue nula.
La extraccin del aceite esencial de una
muestra vegetal de la especie Conium

Maculatum L. (Cicuta) mostro un rendimiento


igual a cero. Esto pudo ser debido a que la
cantidad de aceite esencial depende de la
cantidad de material vegetal, para nuestro
caso la cantidad fue de 5 g, lo que limitaba
las posibilidades de obtener un rendimiento
considerable, cabe resaltar que esta es una
desventaja que presenta este montaje en
particular, debido a que el baln utilizado no
es suficientemente grande como para
almacenar una cantidad representativa de
material vegetal.
Sin embargo, podemos resaltar que el
arrastre con vapor de agua es til para
extraer sustancias voltiles, tales como los
aceites esenciales, los cuales no son ms
que una mezcla compleja de hidrocarburos,
terpenos,
alcoholes,
compuestos
carbonilicos, aldehdos aromticos y fenoles.
Estos se encuentran almacenados en las
glndulas, conductos, sacos o reservorios
dentro del vegetal, por lo cual Olaya et al.
(2003) recomienda desmenuzar bien la
materia vegetal para que estos reservorios
queden expuestos a la accin del vapor de
agua. El vapor por presin entra en contacto
con las clulas de las diferentes partes de la
planta y las rompe liberando la esencia y
atrapndola en las gotas del vapor que luego
se condensar. Frente a esto podemos
concluir que nuestra trituracin del material
vegetal no fue la adecuada, por lo cual estos
reservorios antes mencionados no tuvieron
una exposicin considerable ante el vapor de
agua circulante dentro del montaje.
Obtencin de extracto etanlico con
mtodo Soxhlet y Maceracin
Se obtuvieron 25 mL de extracto etanlico a
partir de 10 g de muestra vegetal seca. Esta
fue dejada 15 das en peridico con
exposicin continua al sol para eliminar la
humedad y luego fue puesta en un recipiente
de vidrio con etOH al 78% de pureza por dos
das ms.
La cantidad de extracto obtenido a travs del
mtodo Soxhlet fue de 50 mL. En el
procedimiento que tardo aproximadamente
una hora se produjeron cinco sifones, los
cuales son detallados en la tabla 1.
Nmero del sifn
1
2

Tiempo (min)
17
20

3
4
5

3
3
4

Tabla 3. Duracin de tiempo entre sifones.

Este procedimiento consiste en la extraccin


de metabolitos presentes en las plantas.
Las muestras vegetales se colocan en la
camisa de nuestro montaje, donde al hacer
ebullir el disolvente, en este caso etanol,
pasa a la parte superior o refrigerante, donde
se condensa y cae gota a gota sobre el
cartucho. Continuando as hasta que se
genera el sifn o volumen mximo que
pueda almacenar el brazo de sifn donde
todo el etanol que se encontraba con la
mezcla de las sustancias absorbidas cae al
baln a travs de un orificio que tiene el
brazo con la extraccin ya hecha.
Los resultados detallados en la Tabla 3
demuestran que se obtuvieron un gran
nmero de sifones a la hora de hacer este
procedimiento y podramos asumir que se
obtuvo un buen rendimiento de extracto
etanlico sin necesitar mayor cantidad de
solvente, siendo de esta manera un mtodo
econmico. Adems, siendo una extraccin
de tipo exhaustiva (Skoog 2001), esta puede
destilar, condensar y volver a pasar a travs
de la fase acuosa de forma automtica y
continua, generando as, un proceso que
equivale a varios centenares de extracciones
con un equipo que prcticamente no
requiere atencin y con un tiempo de
duracin de menos de una hora. Todo el
proceso permite una mayor solvatacin de
los metabolitos.
Esta tcnica tiene el
inconveniente de que puede causar dao a
los compuestos termolbiles, debido a que
se debe calentar constantemente el extracto
para llegar al punto de ebullicin del
solvente usado (Satyajit et al).
Segn
Skoog
(2001)
es
importante
determinar que las sustancias inicas y los
compuestos orgnicos polares estn en
mayor proporcin en la fase acuosa y que los
compuestos orgnicos apolares estn en la
fase orgnica. Por lo cual en esta tcnica no
se extraen compuestos apolares tales como
terpenos y en general aceites esenciales,
debido en parte a la naturaleza polar del
solvente y a que cuando se usan solventes
apolares estos se pegan a las paredes del
montaje (Valcrcel 1988).

Aunque al principio fue ms lenta la


generacin de los sifones, por la espera de
que el etanol llegara a su punto de
ebullicin, esta se volvi ms constante a
medida que pasaba el tiempo. El intervalo de
tiempo del primer sifn fue de 17 minutos, el
del segundo de 20 minutos, el tercero y
cuarto de 3 minutos y el quinto de 4 minutos.
Esta secuencia nos da a entender que el
procedimiento avanza a intervalos grandes al
momento de iniciar y que luego estos van
siendo ms cercanos, siendo a su vez ms
contantes las descargas del sifn, hecho que
es normal entre 5 y 20 minutos (Nez
2008). El aumento de nmero de sifones y
reduccin del tiempo de contacto entre el
material y el solvente conlleva a que pueda
haber una disminucin de los metabolitos
presentes en cada descarga. Por lo cual no
hay seguridad de que por el nmero de
sifones obtenidos se hayan extrado en su
totalidad los metabolitos de la planta.
Identificacin
secundarios

de

Metabolito
secundario
Carotenoides

Salkoski

Result
ado
+

Taninos

Cloruro frrico

Acetato de
plomo
Gelatina sal

Shinoda

Leucoantiocia
nidinas

Flavonoides

Quinonas
(Comportami
ento ante
acido y
donador de
electrones)

Prueba

Metabolitos

HCl [

NaOH 40%

Saponinas

Espuma

Cardiotnicos

Antrona

Observac
iones
Formacin
de
coloracin
azul en la
interfase
No hubo
reaccin
No hubo
reaccin
No hubo
reaccin
Coloracin
amarilla.
No hubo
reaccin.
Coloracin
amarilla.
No hubo
reaccin
No hubo
reaccin.
Precipitaci
n del Zn
Coloracin
amarilla.
Precipitaci
n del Zn
No hubo
formacin
de
espuma
Coloracin
azul-

Molish
Sesquiterpen
lactonas
Cumarinas

Hidroxamato
frrico
Hidroxamato
frrico
Erlich

Alcaloides

Esteroides

Valser

Mayer

Dragendorf

Schleiber

Wagner

Lieberman
-Burchard

verdosa
Cloracin
violeta
No hubo
reaccin
No hubo
reaccin
No hubo
reaccin
No hubo
reaccin
No hubo
reaccin
No hubo
reaccin
No hubo
reaccin
No hubo
reaccin
Formacin
inmediata
de
coloracin
verde.
Despus
de 5
minutos
se sigue
la
tendencia.

Tabla 4. Resultados obtenidos a partir de las


pruebas de identificacin de la marcha
fitoquimica preliminar.

Para el anlisis de taninos en la cicuta los


resultados fueron negativos en las tres
diferentes
pruebas
realizadas,
segn
Valderrama (2002) este tipo de compuestos
en la familia Apiaceae se encuentra en
plantas forestales y de corteza abundante, la
especie Conium Maculatum L. no posee un
volumen de tallo o corteza abundante por lo
que la presencia de este tipo de metabolitos
queda descartada.

OH

HO

2-

FeCl3

OH

HO

CO 2

R CO NH R CO NH R``

HO

OH

HO

CO 2
OH

HO

CO 2

CO 2

Figura 6. Prueba de la gelatina - sal

En la identificacin de Saponinas, no se
produjo ninguna espuma al agregar los
reactivos correspondientes, Segn Tundas
(2009) las saponinas en la familia Apiaceae
se encuentran solo en algunos casos,
comnmente en las especie Physospermum
vercillatu, de la cicuta no hay un reporte
sobre la presencia de este tipo de
compuestos.
Aunque bibliogrficamente no se reporta la
presencia de Carotenoides en la Conium
Maculatum L. podemos suponer que algunas
flores fueron aadidas a nuestra muestra, y
por consiguiente a nuestro extracto. Los
Carotenoides son compuestos que pueden
actuar como pigmentos en las flores,
dndoles su color caracterstico. Podemos
inferir en la idea de que la presencia positiva
de estos se debe al anlisis indirecto de las
flores de esta planta, las cuales tienen un
color amarillo.
La presencia de quinonas en medio bsico
fue positiva, aunque en la literatura no se
encuentra caracterizaciones que hablen
sobre su contenido en este tipo de plantas o
familia.
OH

3HCl
O

2H /Zn

Zn

++

OH

OH

Prueba del cloruro frrico


-

HO

OH

OH
Fe (OR)

- -

puente de hidrogeno

HO

R CO NH R CO NH R``
OH

HO

+ (Ac)2 Pb

Pb-O-R + 2H 3C-CO 2H
OH

OH

Figura 5. Prueba del acetato de plomo

Figura 7. Comportamiento ante acido y donador de


electrones

pruebas realizadas, sin embargo, en la


literatura no se reporta presencia de estos
metabolitos en las hojas de la Conium
Maculatum L.
OH
H

OH

OH

OH

OH

OH

Los resultados de las pruebas para la


deteccin de Flavonoides dieron negativo,
segn Larsson (2004) la familia Apiaceae
presenta tejidos que son intermediarios en la
biosntesis de Flavonoides, pero estos se
encuentran mayoritariamente en la corteza.
No se encuentra una caracterizacin fiable
en donde se detalle la presencia de este tipo
de compuestos en la especie Conium
Maculatum L.

OH
OH

H2SO 4

OH

O
OH

Figura 11. Prueba de Molish


O

Mg/ 2HCl

MgCl 2

Figura 8. Prueba de Shinoda

Los resultados para las Cumarinas fueron


negativos en las diferentes pruebas. Segn
Larsson (2004) en la Conium Maculatum L.
se ha evidenciado la presencia de furano
Cumarinas lineales, pero su lugar de
biosntesis y acumulacin no ha sido bien
identificado. Se dice que su concentracin se
da primordialmente en las frutas.

La identificacin de esteroides fue positiva


mediante la reaccin de Lieberman-Burchard.
El cambio a color verde fue inmediato,
despus de pasados 5 minutos se sigui la
misma tendencia. Segn Radulovic et al
(2011) los esteroides predominantes que se
encuentran en la especie Conium Maculatum
L. son el estigmasterol (stigmasta-5,22-dien3-ol) y el -sitosterol (estigmast-5-en-3-ol).
Las estructuras de estos compuestos pueden
ser detallados en la Figura 3. Segn
Rodrguez (1999) el mecanismo de reaccin
para esta prueba no ha sido descubierto.
-

HgCl 2 + 2I -------2 Cl + HgI 2

CH3

O
H3C

H2N

OH

PRECIPITADO ROJO
Na OH

HgI 2 + I ------- HgI

O
CH2

24

COMPLEJO DE COLOR PARDO

H3C
H3C
CH2

H3C
OH

Fe

3+

HCl

Hg

Figura 9. Prueba del Hidroxamato frrico

NH 2I

Hg
COLOR AMARILLO INTENSO
Figura 12. Reaccin general para la identificacin de
alcaloides.

Figura 10. Prueba de Erlich

Los resultados para los metabolitos de tipo


cardiotnico fueron positivos en las dos

La cicuta es una planta que est compuesta


mayoritariamente
por
alcaloides.
Los
resultados para este tipo de metabolito
secundario fueron negativos en todas las
diferentes pruebas efectuadas. Frente a esto,
Farnsworth (1966) informa que si hay
presencia de un compuesto alcaloide el cual
no tiene el nitrgeno heterocclico, si no que
ms bien es un protoalcaloide las pruebas
especificas darn falsos negativos. De igual
manera ocurre con los compuestos que
tienen un grupo oxigeno enlazado con el
nitrgeno. Al observar la figura 2, en donde

se
detallan
los
diferentes
alcaloides
reportados en la cicuta se puede detallar
como este postulado no se cumple en
nuestro caso en particular, debido a que la
mayora de estos compuestos son alcaloides
verdaderos, que si pueden ser fcilmente
detectados
por
las
pruebas
de
reconocimiento. Para determinar las posibles
causas de estos falsos negativos se tuvieron
que mirar otras caractersticas y aspectos de
la planta. Entre ellos, la concentracin de
estos alcaloides en las diferentes partes de la
planta (cabe resaltar que en nuestros
experimentos solo se usaron las hojas y
alguna que otra flor) y la concentracin de
metabolitos secundarios dependiendo del
tiempo vegetativo o de crecimiento de la
planta.
La especie Conium Maculatum presenta la
presencia
del
alcaloide
coniina,
este
compuesto segn Gonzales (2010) se
encuentra presente en las semillas, con lo
que podemos confirmar que el resultado
negativo es verdadero al solo usar las hojas
para el anlisis. Vetter (2004) reporta que
cuando se hacen las pruebas en las races y
las puntas de los brotes de plantas jvenes
estas indican resultados positivos; en las
plantas ms maduras estas reacciones
positivas tienden a desaparecer, como en
nuestro caso. Las reacciones positivas se
muestran en las frutas slo por conductos
secretores. Corsi y Biasci (1998) sugieren
que la Conium Maculatum L. es similar a
otros miembros de la familia Apiaceae, que
tiene conductos secretores en rganos
vegetativos y frutas. Las concentraciones y
las proporciones relativas de los diferentes
alcaloides en la Conium Maculatum L
parecen depender de diferentes factores
(temperatura, humedad, tiempo y la edad de
los la planta) (Vetter, 2004). Las fases de
floracin,
polinizacin
y
fertilizacin
muestran
un
cambio
brusco
en
la
distribucin de alcaloides. La y-coniceina es
el componente alcaloide predominante
durante la poca de lluvias y la coniina
predomina durante el perodo seco. El
contenido de y-coniceina disminuye y el
contenido de coniina aumenta notablemente
durante la fase de maduracin de la fruta
(Fairbairn y Challen, 1959). En el caso de las
hojas se dice que en las plantas jvenes (es
decir, en la fase del crecimiento activo) la yconiceina es el componente principal

alcaloide, con pequeas cantidades de


conhidrina. Vetter (2004) nos dice que la
mayora de las plantas de la familia Apiaceae
producen diferentes aceites voltiles en los
tejidos claramente delimitados de los frutos.
Se sabe que la especie Conium Maculatum L.
produce y contiene alcaloides de piperidina
pero la sntesis y los sitios de acumulacin
an no se han identificado de manera
inequvoca. Por tanto, no se puede
establecer la verdadera presencia de estos
en las hojas de la planta. Cabe resaltar que
se dice que estos compuestos se encuentran
mayoritariamente en los aceites esenciales.
Lpez et al (1999) reporta que el contenido
promedio de alcaloides en las hojas va de un
0,5% a un 1,5%. Al igual se puede resaltar
malos procedimientos al efectuar las pruebas
de identificacin, o sobrecalentamiento del
extracto, lo cual daa los metabolitos
secundarios termolbiles.
Tcnicas cromatograficas de separacin
Solvente
apolar (A)
ter de petrleo
Cloroformo
Tolueno

Solvente polar
(P)
Etanol
Acetato de
Isopropilo
Etanol

Proporcin
(A:P)
7:3
1:1
3:7

Tabla 4. Mezcla de solventes (apolares y


polares) y proporciones utilizadas en la prctica.

La seleccin de cloroformo (apolar/polar) y


acetato de isopropilo (polar) en una
proporcin 1:1, como fase mvil, permiti
una mejor separacin de cada uno de los
compuestos presentes en el extracto
etanlico de la Conium Maculatum (Figura
13), hecho que al ser comparado con la fase
mvil sugerida por Rodrguez (1997) es
aproximado, ya que en la literatura sugiere
como fase mvil cloroformo y etanol o
hexanocloroformo y Dietilamina al 0.05% en
una proporcin 3:7 cuando la fase
estacionaria es una placa de almina, con el
objetivo de separar alcaloides que es el
blanco de la investigacin de la planta. Al
observar las proporciones que se sugieren, la
fraccin polar es mayor que la apolar, siendo
en este punto donde se clarifica la razn por
la cual la separacin no fue optima; ya que la
proporcin escogida en la prctica fue de
1:1.
De
otro
lado,
Baerheim-Svendsen
recomienda que para separar los alcaloides
de la cicuta por cromatografa se debe

emplear como solvente Cloroformo-etanol


absoluto y amonio 25% (18:2:2) con platos
de silica gel activa. Stahl (2007) recomienda
el uso de acetona, dietil ter y amonio
concentrado (50:50:3) y silica gel para la
separacin de los alcaloides de la cicuta y la
identificacin de la arecolina.
Ahora bien, la mayora de metabolitos
encontrados en la cicuta son alcaloides
piperidinicos,
los
cuales
pueden
ser
identificados con la mezcla de solventes
descrita anteriormente. (Hui, 1997). Los
alcaloides piperidinicos pueden ser resueltos
en TLC de silica gel eluido con cloroformo y
etanol (7:3) y visualizados con el reactivo de
Dragendorf. La Gamma Coniceina (Figura 2)
puede ser determinada en presencia de otras
piperidinas por reaccin con nitroprusiato de
sodio. (Hui, 1997).
Al no ser ptimamente separados los
compuestos presentes en el extracto
etanlico, se cre un conflicto entre cada uno
de los compuestos, puesto que estn
superpuestos creando impedimentos que
dificultan la reaccin, por lo cual al momento
de ser revelados con vainillina-cido
fosfrico, revelador indicado para cetonas,
no mostro la coloracin que cita el autor
como positiva, que es rosa, las cuales si se
encuentran en los esteroides, compuestos
presentes en la especie Conium Maculatum
L. (estigmasterol (stigmasta-5,22-dien-3-ol)
y el -sitosterol (estigmast-5-en-3-ol)).
Los
reveladores
adecuados
para
la
identificacin de alcaloides son: Disolucin
de yodoplatinico en yoduro de potasio, o
reactivo de Dragendorf o permanganato de
potasio-bicarbonato de sodio, para tal
objetivo. Por lo cual no fue posible identificar
los alcaloides, metabolitos que ms se
encuentran en la planta.

etnolico y la tinta china en las diferentes


mezclad de solventes. 1. ter de petrleo:Etanol
(7:3); 2. Cloroformo:Acetato de Isopropilo (1:1) y
3. Tolueno:Etanol (3:7).

Al observar la fase mvil utilizada (Almina)


se puede decir que no es la adecuada para la
separacin de compuestos que contienen un
grupo Amina (alcaloides) ya que debido a
que segn UAM esta es til para la
separacin de compuestos apolares tales
como hidrocarburos, haluros de alquilo,
teres, aldehdos y cetonas. De esta manera
la literatura recomienda que para la
separacin de compuestos aminados se debe
usar la Silice-gel como fase estacionaria ya
que retiene con ms fuerza sustancias ms
polares. Este proceso se da debido a las
interacciones
intermoleculares
de
tipo
dipolo-dipolo o enlaces de hidrogeno entre el
soluto y el adsorbente, de este modo a
medida que corre la fase mvil va
arrastrando al compuesto y este va siendo
retenido por dichas interacciones con la fase
estacionaria, en este caso la almina, cada
metabolito o sustancia tiene un tiempo de
retencin especifico.
Cabe resaltar que nuestro extracto etanlico
no estaba bien concentrado, es decir, no
tena una cantidad suficiente de metabolitos
secundarios como para hacer una corrida
eficaz. Esta variable pudo ser la que ms
infiri en los resultados poco concluyentes de
la prctica. No obstante, se pudo evidenciar
que si hubo una corrida en las placas, pero
que estas no estaban resultas de forma tal
que pudieran dar una correcta separacin e
identificacin del compuesto en particular.
Conclusiones
Se realiz una marcha fitoquimica preliminar
que comprendi tres etapas: extraccin,
identificacin y separacin cromatografa de
los metabolitos secundarios de las partes
areas de la especie Conium Maculatum L.,
ante esto se concluy lo siguiente:
-

Fig
ura 13. Recorrido de la muestra del extracto

Se pudo determinar que el mejor


mtodo para la obtencin de extracto
etanlico es el mtodo de soxhlet, ya
que es una tcnica exhaustiva que
requiere poca cantidad de reactivo,
menos tiempo para la extraccin y
genera un rendimiento notable.

La extraccin de aceites esenciales


por arrastre con vapor de agua
demostr ser una tcnica que se ve
afectada por dos factores en general:
la cantidad de muestra vegetal y la
trituracin de la misma.

Se determin mediante pruebas


positivas
y
especificas
que
la
composicin
de
metabolitos
secundarios en las hojas de la especie
Conium Maculatum L. es la siguiente:
Carotenoides
(en
las
flores),
cardiotnicos, quinonas y esteroides.
Aunque la literatura no justifica la
presencia
de
estos
metabolitos
(excepto los esteroides).

Se determin que la presencia de los


diferentes metabolitos secundarios (en
especial alcaloides) reportados por la
literatura no se encuentran en su
totalidad en las hojas, si no que esto
depende de los sitios de biosntesis y
acumulacin. Al igual tambin son
factores importantes el clima, la
temperatura, la humedad y en
particular el tiempo de crecimiento.
Aunque se reporta que la cicuta tiene
gran cantidad de alcaloides en su
composicin, cabe aclarar que las
reacciones positivas de identificacin
tienden a desaparecer al madurar la
planta.
Se logr determinar a partir de las
pruebas especficas de identificacin y
la
literatura
la
quimiotaxonoma
general de la especie
Conium
Maculatum L., en la que se encuentra:
Presencia de alcaloides en las races,
hojas, semillas y frutos; presencia de
Flavonoides en la corteza y Cumarinas
en
los
frutos,
presencia
de
Carotenoides en las flores, presencia
de compuestos parecidos a los
cardiotnicos (tremetona) en las hojas
y
presencia
de
esteroides
(estigmasterol y -citosterol) en las
hojas. Las quinonas no son justificadas
debido a que no hay una fuente
confiable que confirme su presencia
en este tipo de plantas.
Se determin que los compuestos que
pudieron posiblemente correr sobre la

fase estacionaria son el estigmasterol


(stigmasta-5,22-dien-3-ol) y el sitosterol
(estigmast-5-en-3-ol)),
debido en parte al grupo cetona
presente en su estructura, que segn
la literatura corre con el tipo de
solventes
y
fase
estacionaria
utilizados.
-

Al no tener una separacin adecuada


de los metabolitos en la placa
cromatografica no se puede establecer
una identificacin clara de los
compuestos hallados en la cicuta.

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-

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