Coprocultivo

¿Cuándo solicitar coprocultivo? Yersinia se mueren.

Diarrea con sangre
Fiebre alta persistente CRITERIOS DE RECHAZO
Diarrea persistente > 7 días
Uso reciente de ATB -Mal rotulados
Paciente inmunocomprometido -Tórula con ausencia de deposición macroscópica
Situación de brote - Deposición consistente esta demás un copro
-Más de 1 hr a t° ambiente sin medio de transporte
-Hospitalizados más de 3 días
MUESTRA -Muestra contaminada con orina u otros

Fecal, deposición
Conservación: MEDIOS DE CULTIVO
-Recién emitida ; hasta 1 hr sin medio de transporte.
- > 1 hora: requiere medio de transporte (Cary Blair ) T° Agar MacConkey
ambiente hasta por 1 a 2 semanas Medio de cultivo sólido que permite el aislamiento de bacilos
Obtención: gram negativos .Medio selectivo y además permite distinguir
Muestra espontanea, catéter rectal, torulado rectal. entre bacilos fermentadores y no fermentadores de lactosa,
lo que lo hace un medio diferencial.
Cary –Blair (Stuart modificado)
-Stuart tienen un tampón de Ph que es glicerofosfato. Las
bacterias que no son enteropatógenos , cuando se acaban los
nutrientes del medio cary-Blair pueden usar el glicerofosfato
como nutriente, por lo tanto , las que no son enteropatogenas
prevalecen sobre las patógenas , por esto fue sustituido por
tampón inorgánico fosfatado.
-Ph 8.4 (alcalino) para la conservación de microrganismos sin
alteración de recuento, ya que las bacterias en su metabolismo
producen ácidos , y cuando el medio lo acidifican demasiado ese
mismo ph comienza a destruir bacterias.
-Agar semisólido sin nutrientes extras.
-Óptimo para Shiguella , Salmonella , Yersinia ,Vibrio ,
Campylobacter y otros microorganismos lábiles incluidos
anaerobios.
-Permite almacenar muestras por 72 hrs (t° ambiente)
NUNCA REFRIGERAR , enteropatogenos como Shiguella y
Agar Samonella Shiguella
Medio de cultivo selectivo diferencial , selectividad dada por las
sales biliares y el verde brillante, que inhiben el desarrollo de
bacterias gram positivas y desarrollo invasor de proteus spp.
Diferencial debido a la fermentación de la lactosa, y a la
formación de ácido sulfhídrico a partir del tiosulfato de sodio.
Los m.o fermentadores de lac, acidifican el medio haciendo
virar al rojo indicador de ph, obteniéndose colonias rosadas o
rojas sobre un fondo rojizo.
Salmonella , Shiguella y otros m.o no fermentadores crecen
Incubación
bien en este medio con colonias transparentes.
Patogenos entéricos habituales en aerobiosis durante 18-24
horas a 35|C.
Yersinia exige 48 hrs , el 2do día a temperatura ambiente.
Yersinia es metabólicamente mas activa a temperatura
ambiente que a 37°C.
Campylobacter requiere microaerofilia a 42°C durante 48 hrs.

Siembra
Bateria se realiza desde el medio con menos inhibidor al mas.
El isopo encima de la placa se disemina, se gira , después se
Agar XLD(xilosa, lisina,desoxicolato) siembra por agotamiento.
Medio selectivo y de diferenciación. Utiliza desoxicolato de sodio
como agente selectivo, inhibe los microorganismos gram
positivos. La xilosa fermenta prácticamente todos los SHIGELLA SPP.
entéricos, excepto Shiguella , esto lo hace diferencial.
La lisina permite la diferenciación del grupo Samonella , ya que Colonias lactosa negativa
sin lisina Salmonella fermentaría rápidamente la xilosa y no se Se realiza batería bioquímica (TSI ,LIA ,MIO)
distinguiría de las especies no patógenas.Indica H2S.

Agar TCBS(Tiosulfato citrato bilis sacarosa)

TSI K/A -,-
Medio de cultivo altamente selectivo y diferencial. Utilizado para
LIA K/A -,-
el aislamiento de Vibrio. Selectivo dado por el citrato de sodio y
MIO -,-,+
bilis de buey , agentes inhibidores proporcionan un ph alcalino al
CIT -
medio. Tiosulfato de sodio , favorece la formación de ácido
UREA -
sulfhídrico ( color negro). Sacarosa es hidrato de carbono
fermentable( formación de ácido) indicador de azul de timol y
azul de bromotimol.
Para confirmar Shiguella debemos hacer serología.
Salmonella serovar typhi

Transmisión: Fecal-oral , contacto directo de persona a

persona o a través de alimentos , agua o fómites
contaminados.
Vector mecánico: moscas domésticas
Shiguella spp se detecta en un 5% a 18% de los pacientes con
diarrea del viajero.
TSI K/A -.+
Tratamiento. LIA K/K -,+
Ciprofloxacino antimicrobiano de elección. MIO +,-,-
CIT -
UREA -

SALMONELLA SPP. Salmonella paratyphi

Salmonella puede o no puede producir H2S dependiendo del

serotipo de la especie.
Colonias lactosa negativa pero con producción de H2S

TSI K/A +,-

LIA K7A +. –
MIO + , - , +
CIT –
UREA –

Aglutinar para salmonella

ONPG –

Salmonella serovar newport

 YERSINIA SPP
¿Cómo en un agar SS me puede dar lactosa negativo y un TSI
A/A? Yersinia enterocolíca
No fermenta la lactosa , pero si la sacarosa
Movilidad a 37°C mas inactiva que a 25°C a temperatura
ambiente .Variable al igual que el indol y ornitina
Urea muy positivo

Agar TCBS colonias sacarosa negativa

Oxisada +
TSI K/A - , -
LIA K/K - , -
MIO +, +,+ O + , - ,+

Antibiograma en Vibrio parahemolyticus no esta indicado , no se

sugiere porque este cuadro es totalmente autolimitado de 7
días como max de suración.
Se envía al ISP y ellos confirman la cepa.
TSI A/A - , -
LIA K/A -, - A/A - , -
MIO variable
CIT + ESTUDIO DE SUSCEPTIBILIDAD
UREA +
Aglutinar para Yersinia enterocolitica. Aislados fecales de Salmonella tifoidal ( S.tuphi y S.paratyphi) y
Shiguella:

Ampicilina , fluoroquinolona(ciprofloxacino, levofloxacino )y STX

VIBRIO SPP
Aislados extraintestinales ( septicimia) de Salmonella ( S.typhi y
S.paratyphi):
Cefalosporina de tercera generación como ceftriaxona y
cloranfenicol.

Para Salmonella spp y Shiguella spp cefalosporinas

cefalosporinas de 1 , 2 , cefamicinas y aminoglucosidos pueden
parecer activos in vitro pero no son efectivos clínicamente por
tanto no deben ser reportados.

Uso de antibióticos no mejora el curso clínico de diarrea por

Salmonella.
 HEMOCULTIVO
Bacteriemia/Fungemia/Sepsis Infecciones sistémicas localizadas incluyendo sospecha de
La detección en el laboratorio de microbiología constituye a un meningitis , osteomielitis, artritis séptica, neumonía aguda
examen crítico. bacteriana.
¿En qué momento se toma el hemocultivo?
Diagnostico microbiológico de la bacteriemia/fungemia Muestra se debe tomar lo mas próximo al inicio de la fiebre y
Permite los escalofríos
Identificar el agente etiológico Intervalos de 30 a 60 minutos entre muestras
Conocer la susceptibilidad microbiana Antes de la administración de atb
Optimizar el tratamiento( desescalamiento antimicrobiano y
dosificación) ¿De qué lugar tomar el hemocultivo?
Disminuye la mortalidad entre 20-30% Puede ser sangre arterial o venosa
Acelera la recuperación Si el paciente tiene catéter no se recomienda tomar de esa
Disminuye la estadía hospitalaria vía, puede estar colonizada a los 30 min
Disminuye efectos adversos Se debe tomar de los 2 brazos ( 2 muestras distintas, una de
cada brazo)
-Bacteriemia pueden causar con bajos recuentos (<0,1 -10 Volumen es importante
elevado a 4 UFC/ml) tinción de gram directa no tiene utilidad Recipiente estéril
Diagnóstico rápido: Técnicas de biología molecular Asepsia

Muestras se contaminan generalmente:

Staphylococcus coagulasa negativo
HEMOCULTIVO Bacillus spp
Cutibacterium acnés
Gold estándar en diagnóstico de bacteriemia/fungemia
Corynebacterium spp
Se solicita ante sospecha de paciente aséptico, si el paciente
Microbiota en general
esta febril o tiene leucocitosis no se pide hemocultivo, pero
muchas veces se hace igual.
Preparación de los frascos
Rendimiento disminuye cuando hay:
Tapa verde  aerobio
Tratamiento antibiótico
1 set: 2 aerobio y 2 anaerobios es lo ideal , sensibilidad mayor.
Infecciones por hongos ( levaduras, ya que son de lento
10 ml es lo óptimo
crecimiento)
Entre más sangre se colecte del paciente, mayor rendimiento
Infecciones por bacterias de lente crecimiento
tendrá la muestra.
Infecciones por bacterias fastidiosas
Adultos :20- 30 ml
Vial aerobio 10 ml y Vial anaerobio 10 ml
Indicaciones
Se debe revisar la superficie de los frascos, el medio y el
Paciente con características clínicas de sepsis: Taquicardia },
sensor. Comprobar que el medio esta transparente y el sensor
taquipnea , incremento de la temperatura , hipotensión,
intacto y es de color azul-verdoso. NO UTILIZAR FRASCO SI EL
postración.
SENSOR ESTA AMARILLO.
Sospecha de endocarditis infecciosa
Pirexia( fiebre) de origen desconocido
Transporte a temperatura ambiente , antes de 2 hrs al
Leucocitosis o leucopenia de origen desconocido
laboratorio.
Subcultivo ciego después de la llegada sobre 2 hrs
NUNCA DEBEN SER REFRIGERADOS
El frasco debe contener
Información demográfica del paciente
Hora, fecha , lugar de punción
Nombre , apellido , rut

Criterios de rechazo
Viales no integros (rotos)
Problemas de identificación
Volumen de sangre inadecuado
No se respetan las condiciones de transporte

1 vial de hemo

 Primero se le realiza un gram (valor critico) se hace un

pre informe (Morfología , afinidad tintorial ,
agrupación)
 Transpaso : Agar Sangre
Agar chocolate
Agar Macconkey
Siembra
Tapa se limpia con alcohol y se deja secar por un minuto cerca
del mechero
Puncionar con jeringa , 1 Ml , mover embolo
1 gota de sangre en el borde de A.S , A..chocolate ,
portaobjeto.
24 hrs incubar
Incubación
5 días a 37°C con agitación (Bacterias)
7 días a 37°C con agitación (Levaduras)
42-45 días a 37°C sin agitación (Micobacterias)
Para descartar una sepsis, un periodo de incubación de
hemocultivos de 48 hrs es suficiente.
La positividad de un hemocultivo esta en los primeros dos días
BACTERIEMIA ASOCIADA A
CATETER (BCR)
Test de Maki
Rotular datos del paciente , tipo de catéter y ubicación
anatómica.
Retiro del catéter en condiciones aséticas, corte de punta
distal (3-5 cm).Para retiro del catéter debe estar todo estéril,
incluso el frasco. No se deben colocar catéter en medios de
cultivo.
Envío inmediato al lab+ frascos de hemocultivo.
Incubación a 37°C durante 24 , 48 , 72 y 96 hrs.
Baja especificidad y no detecta contaminación en el lumen del
catéter.
ANTIBIOGRAMA
Resistencia en gram positivos: a quinolonas ( ciprofloxacino ,
levofloxacino) , penicilina , ampicilina y eritromicina.
Gran sensibilidad a vancomicina, linezolid y tetraciclina.

Resistencia en gran negativos: alta resistencia a quinolonas

(ciprofloxacino , levofloxacino) . Tripetoprim/ sulfametoxazol ,
ceftriaxona , ampicilina y clindamicina.
Buena sensibilidad a los carbapenemicos ,
piperacilina/tazobactam y a amikacina.
 LCR
Diagnóstico de laboratorio
Confirmar el diagnóstico clínico de la enfermedad
El estudio microbiológico; pilar fundamental de la vigilancia Muestra de LCR para estudio
epidemiológica
Muestra: líquido cefalorraquídeo (punción lumbar) más microbiologico
hemocultivos periféricos
1. Volumen aceptado: cualquiera
2. Volumen recomendado:
Bacterias y virus:1 ml
Hongos: 2 ml
Micobacterias:2ml
La punción lumbar se realiza con una aguja a la altura de L3 y 3. Conservación o transporte:
L4 , en pacientes con hernia en L4 y L5 Temperatura ambiente o a 37°C por un max de 24 hr.
En estudio e biología molecular refrigeradas 2-8°C
4.Recepción de laboratorio: Corroborar identificación,
volumen y condiciones de transporte y conservación.

Rechazo
Consideraciones en la toma de 1.Deben reducirse al máximo.
2.Rechazar muestras recepcionadas en recipientes no
muestra estériles.
1.Realizar punción lumbar con técnica aséptica ojalá 3. Cualquier rechazo de la muestra, se debe informar
previamente a la administración del antibiótico inmediatamente al médico responsable del paciente.
2.Profesional debe estar altamente capacitado (evitar punción 4. Si la muestra viene con la orden pero no rotulado,
traumática) no se debe rechazar. Se llama y se consulta por el
3.Recolectar idealmente 2 a 3 ml (mínimo 1 ml) de LCR al paciente, ya que no es común una muestra de LCR.
menos tres tubos o frascos estériles. 3 tubos para examinar
en el área bioquímica, hematología y microbiología.
4.Se recomienda tomar la muestra en tubos estériles cónicos
Estudio mb de LCR
Con tapa rosca para evitar trasvasije - Tinción gram
5.Utilizar en 2do tubo para el estudio microbiológico (o el más -Cultivo
turbio), el primero tiene posibilidades de estar contaminado con -Látex
microbiota. -PCR en tiempo real
6.Guardar el 3er tubo como estudios (PCR) o se guarda en caso
de algún accidente con uno de los tubos anteriores.
 Listeria monocytogenes

Haemophilus influenzae

Informar Morfología , afinidad tintorial y localización intra y

extracelular (Intra: Neisseria)

S.agalactiae
Neisseria meningitidis

Streptococcus pneumoniae
 Vigilancia de lab por enfermedad invasora de
CULTIVO DE LCR S.pneumoniae
Penicilina , se testea si o si una cefolosporina de 3° como
Cefotaxima.
Eritromicina no sirve para enfermedades meníngeas.
Vancomicina
Levofloxacino es una fluoroquinolona, que no es recomendada,
pero tiene un 100 % de susceptibilidad
Optoquina no se informa
Pruebas:
Debe realizarse siempre , “gold estándar” Catalasa –
Optoquina susceptible
1. Centrifugación de la muestra a 3000 g x 5 min Solubilidad en bilis
Eliminar sobrenadante y resuspender el sedimento.
2. Se siembra el sedimento, se coloca una gota de
Vigilancia de lab por enfermedad invasora de
LCR con una pipeta esteril ( pipeta pasteur de Listeria monocytogenes
vidrio)
3. Se siembra por agotamiento
4. Agar sangre , Agar chocolate , Agar macconkey En recién nacidos y mayores de 65 años
5. Incubar en atmosfera con CO2 al 5-10 % a 35 – Se debe notificar como ETA y remitir a la seremi
37°C. Susceptibles a penicilina , ampicilina , trimetoprim
Interpretación sulfametoxazol , meropenem , rifampicina, tetraciclina ,
El LCR es un liquido estéril , por lo tanto cualquier desarrollo vancomicina e imipenem.
bacteriano debe ser considerado como significatico.En el caso Pruebas
de desarrollo de bacterias que habitualmente son Movilidad 25°C
contaminantes, se debe discutir con el médico solicitante estos Hidrolisis de esculina +
hallazgo en el contecto clínico y epidemiologico del paciente Prueba de camp +
antes de informar como negativo. Catalasa +
Oxidasa –
Sobrenadante usar para técnica de latex ( No se recomienda ,
muy poca especificidad) Vigilancia de lab por enfermedad invasora de
H.influenzae.
Vigilancia de lab por enfermedad invasora de Principal causante de meningitis en el mundo.
N.meningitidis (ISP) Sensible a Ceftriaxona /Cefotaxima , meropenem y
ciprofloxacino.
1.Confirmación de cepas. Batería de carbohidratos Cefalosporina 3era generación
2.Identificación de grupo serologico. Pruebas:
3.Vigilancia de susceptibilidad por e-Test: Penicilina, Ceftraxona, De los factores X y V
rifampicina , cloranfenicol,ciprofloxacino.Azitromicina Satelitismo
No se hace antibiograma,solo E-test o determinación de CMI.
 UROCULTIVO
ITU cuadro infeccioso más prevalente después de las
infecciones respiratorias.
Agar sangre:
Medio altamente nutritivo, permite el crecimiento de bacterias
gram + , gram - , hongos. El agregado de 5 a 10% de sangre
promueve el desarrollo de bacterias exigentes y la adecuada
observación de las reacciones de hemolisis.
Agar cromogenico (UTIC): Base nutritiva rica combina
diferentes peptonas y 3 sustratos cromogenicos favoreciendo
la detección de las funciones de enzimas especificas, los
sustratos modificados y los cromógenos colorean las colonias.
E.coli
Enterococcus
Complejo Klebsiella, enterobacter , serratia y citrobacter.
Género Proteae.
MacConkey , Levine y CLED
Muestra: Orina de 2da micción
Instrucciones:
1 Lávese bien las manos
2 Realizar lavado de genitales con agua y jabón
3 Seque los genitales con papel absorbente
4 Eliminar el primer chorro de orina en el W.C, y sin cortar la
micción reciba el segundo chorro de orina en un frasco estéril
de boca ancha.
5 Llenar hasta la mitad, tape el frasco con precaución,
evitando contaminar la muestra y/o derramarla.
6 Informe si está tomando algún medicamento (ATB o
analgésico)
Hoy se utilizan preservantes como el ácido bórico. Los tubos
deben ir al menos 3 ml de orina para evitar un efecto inhibidor
en los m.o.
-Orina de 2da micción
-Orina por recolector
Orina por catéter/ sonda vesical
Orina por punción supra púbica
Conservación y transporte de la muestra
Procesar de forma inmediata
>. 2 hrs , refrigerar a 4 °C (hasta 24 hrs)
Criterios de rechazo
No controlado: Muestra obtenida posterior a ingesta exagerada
de líquidos
Muestra > 2 hrs de emisión transportados y/ o conservada a
t° ambiente
Muestra sin etiquetar o mal etiquetada
Muestra con datos demográficos incompletos
Muestra visiblemente contaminada
Muestra con contaminación fecal
Muestra obtenidas en frascos inadecuados , sucios , rotos.
Medios de cultivo
Agar sangre, agar cromogenico , Macconckey ,Levine , CLED
Incubación:
16-24 hrs a 35°-37°C en aerobiosis o 48 hrs en aquellos
cultivos que tengan el sedimento urinario alterado.
Por bacterias de lento crecimiento como S.saprophyticus.
Siembra convencional
1. Homogeneizar la muestra.
2. Esterilizar el asa, se sumerge en orina ( asa calibra 1
ul)
3. Se siembra una estría en el centro de la placa un
estría , se da vuelta el agar y por la otra parte del
asa, se estría hasta el final.
4. Se disemina realizando estrías perpendiculares.
Interpretación
 Orina 2da micción
Asa 1 ul -> 100 UFC/ml
Asa 100 ul -> 10 UFC/ml -Ácido nalixidico es una quinolona, se incluye porque la
Se siembra con pipeta pasteur de vidrio. resistencia a quinolonas esta mediada a mutaciones del ADN, en
proteínas que son girasas , helicasas , las que son acumulativas
, entra más mutaciones tenga la bacteria más resistente se
hace a quinolonas. Con una mutación, puede presentar
resistencia ácido nalidixico pero no a ciprofloxacino.

Criterios clásicos de Kass ¿Qué me indica en el antibiograma?

Recuento mayor de 100.000 UFC/ml indicativo de ITU
Recuento menores de 10.000 UFC/ml es indicativo de
contaminación uretral ( se duda de ITU, pero igual se da ATB)
Recuento entre 10.000 y 100.000 UFC/ml deben ser
evaluados basados en la información clínica, el tipo de muestra
enviada , tiempo de obtención de la muestra, etc.
Tratamiento en ITU
Que si uso una quinolona en esa bacteria que tiene resistencia
al ácido nalidixico voy a generar presión selectiva para que la
bacteria para que la bacteria bacteria acumule más
mutaciones, lo que va a provocar con el tiempo que la bacteria
se vuelva totalmente resistente a quinolonas.
Ahora no se ocupan cefalosporinas de 3era generación ,
cefotaxima si o si , se debe elegir entre ceftazidima o
ceftriaxona, ya que esta comprobado que la resistencia
cruzada son idénticas para cefotaxima y ceftriaxona.

Discos ITU enterococcus

Nitrofurantoina , Trimetoprim /sulfametoxazol , cefalosporina , 1.Ampicilina
linezolid , Amoxicilina/ Ac. Clavulanico, carbapenemicos , 2.Gentamicina 120
quinolonas , aztreonam , aminoglucosidos , glicopeptidicos , 3.Ciprofloxacino
fosfomicina , polimixinas , rifampicina. 4.Vancomicina
5.Teicoplanina
6.Nitrofurantoina
Antibiograma

Disco ITU enterobacterales

1.Ampicilina Discos ITU Pseudomona

2.Nitrofurantoina 1.Ceftazidima
3.Cefazolina 2.Ciprofloxacino
4.Cefuroxima 3.Gentamicina
5.Acido nalidixico 4.Amikacina
6.Ciprofloxacino o levofloxacino 5.Cefepime
7.Amikacina 6.Piperacilina/Tazobactam
8.Gentamicina 7.Meropenem
8.Imepenem
Placa 2

1.Amoxicilina /Ac.clavulanico
2.Ceftazidima
3.Cefotaxima
4.Imipenem
5.Meropenem
6.Ertapenem
7.Piperacilina/Tazobactam