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Gabinete de Servicios para la Calidad. C/Caridad, 32 - local. 28007 Madrid, España. E-mail: gscsal@gscsal.com
RESUMEN. La presente comunicación presenta una Limits of Detection in Chemical and Microbiological
comparativa entre cuatro planteamientos para la estimación Testing Laboratories”
de la precisión del los resultados de los ensayos -The American Association for Laboratory Accreditation.
cuantitativos en microbiología recogidos en la normativa G108 11/05/2007 “Guidelines for Estimating Uncertainty
existente, publicados por entidades de acreditación o en la for Microbiological Counting Methods”.
bibliografía. Los cuatro métodos valorados no presentan -IBEROLAB 2005: Situación de la validación de los
diferencias en cuanto a sus resultados aunque sí en su ensayos microbiológicos en los laboratorios (J. Laso
planteamiento inicial. Sánchez).
2,550
-ISO/TS 19036:2006 Microbiology of food and animal
2,500
feeding stuffs- Guidelines for the estimation of
measurement uncertainty for quantitative determinations. 2,450
-UNE-EN ISO 16140:2003 Microbiología de los 2,400 Log VR Log VL1 Log VL2
May 2004. “Uncertainty of Measurement, Precision and Fig. 1. Representación gráfica datos ejemplo Tabla 1
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-ISO/TS 19036:2006. Microbiology of food and animal laboratorio realiza un replicado de la muestra. Los cálculos
feeding stuffs- Guidelines for the estimation of son realizados mediante estimadores robustos basados en la
measurement uncertainty for quantitative determinations. mediana para no ser sensibles a los valores extremos.
Esta norma plantea una sistemática bastante sencilla de Aunque los cálculos planteados en esta norma son
realizar por los laboratorios en la que únicamente incluye realizados con los datos procedentes de diferentes
como componente de incertidumbre la debida a la precisión laboratorios, con el fin de poder comparar las distintas
no teniendo en cuenta el componente debido al sesgo del sistemáticas que se recogen en el presente artículo, se van a
método de ensayo (exactitud o recuperación). aplicar dichos cálculos a los mismos valores que se
En el cálculo de la precisión se emplean los resultados emplean en los otros planteamientos.
obtenidos por técnicos a partir de dos submuestras de una La repetibilidad es estimada a partir de la mediana de las
misma muestra. En estas condiciones no entran en juego desviaciones estándar de las replicas de cada laboratorio (3)
demasiadas variaciones en las condiciones de multiplicada por la constante k2=1,4826 (Tabla 3):
reproducibilidad salvo que se incluyan diferentes lotes de
medios de cultivo y condiciones de incubación que tienen Log10 (VL1i ) − Log10 (VL2i )
Si =
su influencia en el comportamiento del método de forma 2 (3)
general. El laboratorio por tanto, realiza duplicados de S r = k2 * MEDIANA{Si } = 1,4826 * 0,057 = 0,084 Log10 (ufc / g )
muestras naturales o contaminadas artificialmente,
variando entre las distintas matrices que tenga incluidas en De cada par de valores (en logaritmo) se obtiene el valor
el alcance del método de ensayo, y calcula para cada par de medio que será empleado en la estimación de la
valores su varianza (1) (tabla 2): reproducibilidad (4):
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Tabla 4. Cálculo estimador robusto de reproducibilidad Se calcula la precisión intermedia como desviación
VLi 2,573 2,511 2,540 2,579 2,591 2,628 2,599 2,503 2,438 2,579 estándar de las diferencias frente al valor medio (7):
2,573 0,062 0,033 0,006 0,018 0,055 0,026 0,070 0,136 0,006
∑ (d (VL) − d (VL))
2,511 0,062 0,029 0,069 0,080 0,117 0,088 0,007 0,073 0,069 2
S d (VL ) = =
2,540 0,033 0,029 0,040 0,051 0,088 0,059 0,036 0,102 0,040
n −1
2,579 0,006 0,069 0,040 0,012 0,048 0,019 0,076 0,142 0,000 (7)
2,591 0,018 0,080 0,051 0,012 0,037 0,008 0,088 0,153 0,012 =
∑ (d (VL) − 0) 2
∑ (Re c )
2,477 2,681 -0,077 0,127 2
VLi ) − Re c Log VL (9)
S Re c Log = = 3,13%
Log
Log (VL) = 2,554 n −1
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Para un valor de referencia de 2,591 log, la desviación Para emplear los mismos valores utilizados con los otros
estándar, se traduce en 0,081 (10): esquemas se ha calculado la diferencia con el valor de
referencia con ambos valores obtenidos por el laboratorio.
S = 2,591 * 3,13 = 0,081 Log 10 (ufc / g ) (10) En la práctica no sería necesaria la realización de un
100 duplicado pudiendo realizarse en días diferentes.
A partir de las diferencias frente al valor de referencia se
Esta estimación de la precisión, como ya señala la guía, calcula su desviación estándar que constituye la
permite su cálculo a lo largo del tiempo, sin necesidad de reproducibilidad del método (11):
realizar el ensayo por duplicado de forma simultánea, y
∑ (d − d )
permitiendo tener en cuenta muchas más fuentes de 2
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Si calculamos la diferencia de cada valor obtenido frente 3,143 3,029 3,233 96,4% 102,9%
al valor de referencia d = Log (VR) − Log (VL) o lo que es lo Log (VR) = 3,171 S Re c Log = 2,52%
mismo si gráficamente trasladamos dichos valores a un
mismo eje en base a sus diferencias frente al valor de Tomando el valor medio de los valores de referencia en
referencia (tabla 9 y figura 3): logaritmos para poderlo comparar con la sistemática
anterior (12) comprobándose que se obtiene un resultado
Tabla 9. Diferencias logarítmicas frente al valor de referencia
similar:
Log (VR) Log (VL1) Log (VL2) d i = Log (VRi ) − Log (VLi )
2,949 2,902 2,960 0,047 -0,011 S = 3,171 * 2,52 = 0,080 Log 10 (ufc / g ) (12)
100
3,143 3,096 0,047
2,531 2,418 2,542 0,114 -0,011
3,806 3,896 3,692 -0,090 0,114 3.- Conclusiones
2,949 2,960 2,938 -0,011 0,011
3,924 3,986 -0,062 1. Las diferentes alternativas que se han descrito en el
3,201 3,264 -0,062
presente artículo no presentan diferencias en sus resultados
incluso teniendo planteamientos diferentes (tabla 11):
3,111 2,982 0,129
2,949 2,835 0,114 Tabla 11. Resumen datos diferentes planteamientos
3,143 3,029 3,233 0,114 -0,090 S R = 0 ,082
∑ (d − d ) S R = 0,076
2
Sd = =
n −1 S d (VL ) = 0,081
= 0,080 Log10 (ufc / g ) S = 0,081
0,150 S d = 0,081
0,100 Resultados expresados en Log 10 (ufc / g )
0,050
-ISO/TS 19036:2006 Microbiology of food and animal
L o g (u fc/g)
0,000
feeding stuffs- Guidelines for the estimation of
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 measurement uncertainty for quantitative determinations..
-0,050 -UNE-EN ISO 16140:2003 Microbiología de los
-0,100
alimentos para consumo humano y animal – Protocolo para
d VL1 d VL2 la validación de métodos alternativos.
-0,150 -International Accreditation New Zeland (ANZ) AS TG 5,
Nº de muestra
May 2004. “Uncertainty of Measurement, Precision and
Fig. 3. Representación gráfica de los valores de la tabla 9 Limits of Detection in Chemical and Microbiological
Testing Laboratories”
Esta transformación es equivalente a haber realizado -The American Association for Laboratory Accreditation.
todos los ensayos con un mismo material de referencia con G108: “Guidelines for Estimating Uncertainty for
la ventaja de permitir su realización en distintos días y en Microbiological Counting Methods”.
distintos niveles de adición y no necesariamente por
duplicado cada día.
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Bibliografía