SOUTHEM BLOT:

Someter a los fragmentos de ADN obtenidos por una enzima de restricción, a una
electroforesis en gel de agarosa. El ADN que está en el gel de agarosa debe transferirse a un
filtro o membrana de nitocelulosa (blotting) porque estas son mas manejables y estables
que el gel.P osteriormente se hibrida con secuencias complementarias de ADN, marcadas
con sustancias radioactivas, enzimas o fluorocromos.

 Electroforesis
 Separa por tamaño
 Desnaturalizar ADN (calor o químicos) romper doble cadena
 Transferir ADN del gel a nitrocelulosa
 Hibrida con sonda marcada

Permite identificar fragmentos de ADN separados por electroforesis en gel y transferidos a

una membrana de nitrocelulosa o nailon.A diferencia del dot blot, permite la detección
simultánea de varias secuencias diana de distintos tamaños con una única hibridación.

NORTHEM BLOT:

Detectar ARN (no necesita desnaturalización = ARN 1 cadena) utilizando una sonda de ADN
marcada con fluorocromos, radiactividad, enzimas o iones metálicos.

DIFERENCIAS CON EL SOUTHER BLOT: No digestión enzimática. Electroforesis en

condiciones desnaturalizantes. Geles de agarosa con formaldehído. Muestra de ARN se
diluye en un tampón con formamida y formaldehído y se calienta a 65ºCNo es necesario el
paso de desnaturalización antes de la transferencia del gel a la membrana. La transferencia
del ARN del gel a la membrana, la hibridación y el revelado se realizan de forma similar a
como se ha descrito en la técnica anterior.

APLICACIONES: Análisis de expresión génica. La detección de mutaciones. Estudios de corte y

empalme o splicing alternativos.