INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

ESCUELA SUPERIOR DE INGENIERIA QUIMICA E INDUSTRIAS

EXTRACTIVAS
ACADEMIA DE QUIMICA ANALITICA
LABORATORIO DE TECNICAS DE SEPARACION

PRACTICA NO. 8
Optimización de un método de análisis de una muestra problema.

OBJETIVOS.
• Descargar el simulador "Practical HPLC simulator V1.0".
• Utilizar el simulador de análisis HPLC para optimizar la separación más
adecuada para una mezcla multicomponente.

INTRODUCCION.
Información necesita para crear un simulador HPLC.
• Sistema de bombeo.
Se debe de indicar la composición de la fase móvil
(naturaleza del modificador orgánico y condiciones de
pH), además de esto se deben de seleccionar
condiciones isocráticas o de gradiente, así como el
caudal de la fase móvil.

• Inyector.
Se debe tener conocimiento del diluyente
de la muestra, se debe conocer el volumen
de inyección y la concentración de la
muestra expresada en mg/mL
Se deben de conocer las dimensiones del
tubo para el tubo ubicado entre la válvula
de inyección y la entrada a la columna, así
mismo se debe considerar las dimensiones
de la tubería para el tubo que esta ubicado
entre la salida de la columna y la detección
de UV.

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• Horno.
Se debe de indicar las dimensiones de la
columna (longitud, diámetro, tamaño de
partícula y porosidad) en caso de
desconocer la porosidad se establece el
valor de 0.7. También se debe de indicar la
química de la fase estacionaria, así como
indicarse la temperatura correspondiente
tanto a la temperatura de la columna como
a la temperatura de la fase móvil.

• Detector de rayos UV.

Considerar el volumen de la celda UV ya
que tiene un impacto potencial en el ancho
de pico, indicar la longitud de onda a la que
se simulara el cromatograma. Se debe
proporcionar la constante de tiempo UV y
finalmente se proporciona la tasa de
adquisición de datos.

DESARROLLO EXPERIMENTAL.

1. Abrir el simulador.

2. Seleccionar el tipo de compuestos que se van a analizar.

3. Seleccionar el tipo de solvente a utilizar.

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4. Establecer los valores de longitud de onda dependiendo de la mezcla a analizar.

5. Modificar las condiciones de la columna.

6. Modificar las condiciones de la bomba

5.

7. Analizar el cromatograma obtenido y determinar si el tiempo de análisis es largo o

corto.

8. En caso de que el análisis no sea el adecuado se procede a modificar las

condiciones anteriores para obtener un mejor rendimiento.

RESULTADOS EXPERIMENTALES

Compuesto tR (min) W50% Asimetria Rs Altura Área de

(min) (mAU) pico
Uracil 2.20 0.091 1.38 - 54.9 1048.6
Metilparabeno 2.81 0.1 1.07 2.71 77.0 1508.7
Etilparabeno 3.25 0.095 1.08 1.88 79.3 1470.0
Propilparabeno 4.24 0.094 1.05 4.47 72.9 1339.1
Butilparabeno 5.20 0.091 1.03 4.44 58.3 1030.3

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CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
Como material didáctico el simulador funciona bastante bien, sin embargo, tiene una
base de datos algo pobre en cuanto los compuestos que maneja. Pese a esto el
simulador funciona bastante bien.
De igual manera el programa debería de contar con un apartado donde se especifique
el funcionamiento de cada componente del programa, ya que en el caso del apartado
de “outlet tubing” no se conocía el funcionamiento de este apartado, y no se sabia si
modificar este valor seria positivo o negativo para el cromatograma.

BIBLIOGRAFIA.

• luis camacho. (2021, junio 7). Practica 8 3IM78 Parte 1: HPLC:

Optimización de un método de análisis de una muestra problema.
https://www.youtube.com/watch?v=4b4QkDks0Z4

• luis camacho. (2021, junio 7). Practica 8 3IM78 Parte 2: HPLC:

Optimización de un método de análisis de una muestra problema.
https://www.youtube.com/watch?v=ekKZvMdE9io

• Ciencias analíticas: Simulador práctico de HPLC. (s. f.). Recuperado 8 de

junio de 2021, de
https://ispso.unige.ch/labs/fanal/practical_hplc_simulator:en

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