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BIOFILM CARIOGÉNICO
CARIOLOGIA Y PERIODONTOLOGIA
BUCAL- FOUBA
2019
FACTORES NUTRICIONALES
Como toda forma de vida, los microorganismos requieren un aporte de nutrientes para su
mantenimiento y crecimiento. Éstos nutrientes proporcionan a los organismos la energía necesaria
para sus reacciones biosintéticas, así como la materia prima para la síntesis de los componentes
celulares. La microflora oral puede alimentarse de un conjunto de nutrientes que a veces es
superabundante, pero en otras ocasiones es intermitente y limitado en los sustratos requeridos. Las
fuentes pueden ser los tejidos y secreciones del huésped, su dieta y también productos
metabólicos de los microorganismos que habitan en estrecha proximidad.
Los microorganismos orales presentan gran diversidad de requerimientos nutricionales.
Como fuente de energía algunos de ellos utilizan carbohidratos mientras que otros pueden preferir
aminoácidos o ácidos orgánicos. Para el crecimiento todos necesitan componentes nitrogenados.
Las necesidades de nitrógeno son satisfechas por péptidos, aminoácidos o, en algunos casos,
amoníaco. Todos necesitan vitaminas, minerales, purinas, pirimidinas, ácidos grasos y otros
factores de crecimiento. Debido a la gran diversidad nutricional de los microorganismos, es lógico
esperar que la localización de cada uno de ellos se vea grandemente influida por la disponibilidad
de los nutrientes requeridos.
Por lo tanto, el metabolismo y la actividad nutricional de las bacterias del biofilm dependen
de la disponibilidad de nutrientes. En ocasiones, el metabolismo bacteriano se ha de efectuar con
deficiencia de azúcares, fosfatos o compuestos nitrogenados, según la localización del biofilm.
La formación del biofilm tiene lugar aún en períodos de ayuno. Por tal motivo, la matriz del
biofilm dental en la que están inmersas las bacterias, presentará diferentes texturas, grosor y
composición según se forme en ausencia o en presencia de alimentos.
RESUMIENDO:
Es decir que:
Figura 1: Estructura de un glucano ramificado donde se ven los enlaces - 1, 6 de las cadenas lineales y las
ramificaciones - 1, 4 y - 1,3.
Formación de polisacáridos
La sacarosa tiene importancia especial en el metabolismo del biofilm debido a que los
estreptococos tienen enzimas extracelulares sintetizadoras de homopolisacáridos: las
glucosiltransferasas. Estas enzimas aprovechan específicamente la sacarosa como sustrato para
GLUCOSA FRUCTOSA
grupos reactivos de ambas hexosas y que tiene una energía libre de hidrólisis equivalente a la del
ATP. Tal energía es utilizada para la reacción de polimerización. La energía libre de hidrólisis de
maltosa y lactosa es mucho más baja, por lo tanto estos disacáridos no resultan efectivos para la
síntesis de polisacáridos extracelulares. Esto explica porqué, si bien otros azúcares pueden ser
metabolizados por las bacterias, la sacarosa es el único hidrato de carbono eficiente para la
síntesis de polímeros extracelulares.
Según hemos explicado, la matriz del biofilm recién formado, en presencia de sacarosa se
convierte con el tiempo en una malla gruesa y gelatinosa de proteínas y polisacáridos, a la que
llamaremos biopelícula madura.
Bacteria Sacarosa
Polisacáridos extracelulares
Matriz proteica
Glucosa
Fructosa
Figura 4: Formación de polisacáridos extracelulares por bacterias del biofilm a partir de sacarosa dietaria.
El efecto de esta biopelícula gruesa consiste en una limitación del libre movimiento de las
moléculas entre la saliva y el biofilm, por ejemplo el oxígeno. Se crea así un ambiente anaeróbico
que favorece la fermentación de los azúcares con producción de distintos ácidos orgánicos tales
como: láctico, fórmico, acético, propiónico, butírico, que se acumulan al difundir con mayor
dificultad y no ser neutralizados por los buffers salivales.
Una vez formado el biofilm en la superficie del diente, las bacterias continúan metabolizando
los sustratos disponibles para satisfacer sus necesidades energéticas y producir componentes
estructurales destinados al mantenimiento y la reproducción.
Los carbohidratos son la fuente principal de energía y pueden provenir de la dieta o de los
polisacáridos intracelulares.
Desde el punto de vista metabólico las biopelículas bacterianas pueden dividirse en dos
grandes grupos según su principal fuente energética:
a) las que utilizan preferentemente carbohidratos que convierten en ácidos orgánicos y tienden a
disminuir el pH.
b) las que utilizan preferentemente material nitrogenado y producen sustancias básicas que tienden
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a incrementar el pH;
Es importante destacar que las bacterias usan ambos tipos de sustratos aunque cada
bacteria en particular metaboliza preferencialmente uno de ellos. Las bacterias del biofilm
supragingival utilizan como principal fuente de energía los hidratos de carbono.
Todos estos sustratos pueden provenir de la dieta, del fluido de la biopelícula, de la saliva o
del fluido gingival.
El desarrollo de caries depende inversamente de la exposición a la saliva; así, los dientes
anteriores inferiores que están continuamente bañados por ella son en general más resistentes a
las caries mientras que los superiores, en dónde su acceso es más limitado, son más proclives a
desarrollarlas. Por otra parte, aquellas regiones muy expuestas a la saliva, especialmente en el
lado lingual de los incisivos inferiores y en el lado bucal de los molares superiores, tienden a
desarrollarse con el tiempo cálculos supragingivales. Esto es debido principalmente a que en esos
puntos se localiza la salida del conducto excretor de glándulas salivales cuyo fluido presenta una
alta concentración de calcio y fosfatos que mineralizan a la biopelícula allí formada.
Figura 6: Takahashi N (2015). Oral microbiome metabolism: from “Who are they?” to “What are
they doing?”Journal of Dental Research; 94(12): 1628-1637.
Los azúcares captados serán fermentados generando distintos tipos de ácidos orgánicos:
láctico principalmente, acético, butírico, fórmico y propiónico. Estos ácidos serán responsables del
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descenso del pH y la consecuente desmineralización del esmalte.
GS
PK
PFL
LDH
Figura 7: Takahashi N (2015). Oral microbiome metabolism: from “Who are they?” to “What are
they doing?”Journal of Dental Research; 94(12): 1628-1637.
Los ácidos propiónico y acético son más débiles que el láctico y actúan como bufferes
elevando el pH del medio.
Estos microorganismos pueden captar azúcares del medio por dos mecanismos:
1) de alta afinidad
2) de baja afinidad
Estos mecanismos operan en situaciones diferentes pero son ambos imprescindibles para el
metabolismo bacteriano.
1) De alta afinidad
En condiciones de ausencia de alimento o muy baja concentración de azúcares en la
biopelícula y por lo tanto a pH neutro, opera el sistema de la fosfotransferasa.
Este es un sistema de transporte activo de azúcares presente en muchas membranas
bacterianas. Constituye el paso limitante en la producción de energía cuando el estreptococo se
desarrolla a bajas concentraciones extracelulares de azúcares. Es un sistema altamente específico,
presenta alta afinidad para azúcares y cataliza la transferencia de un grupo fosfato desde el
fosfoenolpiruvato al azúcar que es entonces transportado al interior de la célula.
El azúcar fosforilado será utilizado como sustrato para la glucólisis generando dos moles de
fosfoenolpiruvato, uno de los cuales será usado para fosforilar la próxima molécula de azúcar que
ingrese y el otro se usará para la producción de ATP.
Este sistema de alta afinidad se satura a concentraciones relativamente bajas de azúcares
pero existe un mecanismo alternativo para la captación de los mismos que le permite al
microorganismo sobrevivir en estas condiciones.
2) De baja afinidad
A medida que aumenta la concentración extracelular de azúcares el sistema de la
fosfotransferasa se va inhibiendo gradualmente, al mismo tiempo se va activando el sistema de
baja afinidad. Los azúcares serán metabolizados generando ácido láctico principalmente, que al pH
intracelular se encuentra ionizado en forma de lactato que difunde al líquido extracelular. Para
evitar el descenso del pH intracelular que inhibiría a la vía glucolítica los protones son expulsados
en intercambio con iones K+ por la actividad de una ATPasa ligada a la membrana bacteriana. Se
genera un gradiente de protones y por consiguiente una fuerza protomotriz a través de la
membrana celular. Esto favorece el transporte del azúcar hacia el interior en simporte con H+.
Este sistema resulta muy activo en el Streptococcus mutans, aún a pH 5,5, el cual es
desfavorable para otras bacterias de modo que le permite ser dominante en el biofilm.
Sistema dependiente
de la fuerza protomotriz
Sistema del
fosfoenolpiruvato
Los estreptococos no contienen las enzimas del ciclo de Krebs ni las de la cadena
respiratoria, requieren entonces de la glucólisis para la obtención de energía.
El destino final del piruvato depende de que la disponibilidad de azúcares sea alta o baja:
RESUMIENDO:
CURVA DE STEPHAN
Es sabido que no todos los hidratos de carbono de la dieta serán utilizados de igual forma
por las bacterias de la biopelícula.
Los carbohidratos poliméricos, como el almidón, son menos accesibles como sustratos para
las bacterias de la biopelícula que aquellos de bajo peso molecular. Ello se debe a que los
polisacáridos, dado su alto peso molecular difunden con menor facilidad que los mono o
disacáridos. Además los polisacáridos deben ser hidrolizados antes de ser metabolizados.
El impacto de los diferentes hidratos de carbono sobre el pH de la biopelícula bacteriana fue
estudiado por Stephan en 1940, quien realizó una medición directa de los cambios de pH en la
biopelícula dental utilizando un electrodo de antimonio. Así comprobó que luego de realizar
enjuagues con soluciones diluídas de glucosa, fructosa o sacarosa se producía una caída del pH
en minutos, originando condiciones de descalcificación en la superficie dental. Este descenso del
pH se debió a un incremento de la actividad glucolítica bacteriana. Sobre un biofilm bucal el pH
mínimo (aproximadamente 5.5) se alcanzó entre los 15 y 20 minutos después del enjuague con el
carbohidrato fermentable, correspondiendo ese valor a la máxima producción de ácido láctico.
Después de esto, hubo una recuperación lenta hasta alcanzar los valores de pH iniciales,
aproximadamente a los 60 minutos, a medida que el ácido láctico fue reemplazado por otros ácidos
más débiles y se produjo la difusión y neutralización por bufferes salivales.
pH
en salud
cariogénico
Tiempo (min)
Debemos tener en cuenta además que los valores de pH varían de un sitio a otro
dependiendo del espesor de la biopelícula y el acceso de saliva. De tal forma que en el gráfico
pH de la placa
Oclusal
Interproximal
Tiempo (min)
3
2
1
Figura 12: Zonas de la mancha blanca. 1) Zona translúcida. 2) Zona oscura. 3) Cuerpo de la
lesión. 4) Zona superficial. Dental Caries. Aetiology, Pathology and Prevention. L. M. Silverstone, N.
W. Johnson, J. M. Hardie, R. A. D. Williams (1981).
Zona superficial:
El contenido mineral de la zona superficial es similar al del esmalte sano, implicando que el
mismo se encuentra protegido contra la disolución, o que sufre un proceso de remineralización.
Actualmente existe consenso que esto se debe en mayor medida a la remineralización a partir de
iones provenientes de capas más profundas, con una cierta contribución de fluido del biofilm.
Componentes como el fluoruro, pueden ser absorbidos en la superficie o difundir desde la interfase
saliva-biofilm, facilitando la estabilización de la zona superficial.
El fluoruro no solo es importante por formar una apatita menos soluble al ácido, sino para promover
la hidrólisis de fosfato dicálcico dihidratado y fosfato octocálcico hacia apatitas más estables. El
fluoruro tiende a precipitar rápidamente, principalmente en la superficie, obstruyendo los poros de
la misma. Esto es un proceso reparativo.
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En condiciones de salud, el biofilm produce continuamente ácidos que están en equilibrio con la
superficie del esmalte.
La composición de estos compartimentos (biofilm y esmalte) puede cambiar con la entrada o salida
de iones. El mecanismo de difusión de iones se debe a la alta movilidad de los protones a través de
un “túnel” (vaina de los prismas). Por un rápido movimiento dentro del esmalte, los protones
pueden crear un campo eléctrico (potencial de difusión) a través de la superficie hacia las capas
subyacentes. A medida que los ácidos orgánicos provenientes del biofilm ingresan por la sustancia
interprismática, estos son eventualmente neutralizados.
Entonces, el movimiento de los iones disueltos desde el esmalte va a depender de este potencial,
así como también de su propio gradiente de concentración.
Zona traslúcida:
Se considera que es el primer cambio visible en la formación de caries, con pérdida de un
1% aproximadamente de mineral. La pérdida se da a expensas, fundamentalmente de carbonato y
magnesio, lo que resulta en una apatita depletada en ellos y rica en fluoruros. Estos iones están
asociados a una matriz mineral más soluble.
Zona oscura:
Así como la zona traslúcida precede tanto a la zona superficial como a la oscura, es muy
probable que los cambios químicos vistos anteriormente, expliquen la formación de una zona y la
siguiente. La pérdida inicial de mineral se da a partir de componentes ricos en carbonato y
magnesio, que hace a la matriz mineral remanente menos soluble en ácidos.
Desde que el fluoruro es continuamente acumulado en esta región, se espera que esta superficie
se vuelva mas resistente al ataque ácido, sin embargo, en la capa más profunda continúa la
pérdida mineral y los iones disueltos, podrían reprecipitar.
No debemos olvidarnos de la presencia de sustancia orgánica, que puede ayudar en la oclusión de
los poros.
Cuerpo de la lesión:
Esta zona presenta menor cantidad de carbonatos y magnesio, y mayor contenido de
fluoruros y sustancia orgánica.
Es considerado el estadío final de la destrucción del esmalte, ya que el agrandamiento de los poros
conduce a la cavitación.
El proceso carioso se caracteriza por su dinamismo. El ataque ácido se produce por pulsos
y el avance de la lesión no es lineal. La desmineralización y remineralización puede ocurrir
simultáneamente en la misma lesión.