Cuarta Unidad Metabolismo de Proteínas y Ácidos Nucleicos

- DIGESTION DE LAS PROTEINAS --

ACCION DE ENZIMAS DIGESTIVAS PANCRETICAS SOBRE LA CASEINA.
INTRODUCCION:
La digestión de las proteínas, o degradación hasta aminoácidos se inicia en la boca, en mínima cantidad, se continua en el
estómago con la pepsina; pero es el páncreas que produce enzimas que cumplen un rol principal en este proceso conociéndose
como enzimas proteolíticas. Entre estas se tiene a: tripsina, quimotripsina, elastasa y carboxipeptidasa; y las de origen intestinal:
aminopeptidasas, dipeptidasas. Estas mismas enzimas se pueden clasificar a su vez como endopeptidasas: pepsina, tripsina,
quimotripsina, elastasas y exopeptidasas: carboxipeptidasa y aminopeptidasa.

La tripsina, es activada por la enterocinasa en el intestino, y es específica de los enlaces peptídicos sobre el lado carboxílico de
residuos de aminoácidos básicos: lisina y arginina solamente. La quimotripsina es específica para los enlaces peptídicos de los
aminoácidos sin carga como los aromáticos: tirosina, triptofano y fenilalanina. La elastasa tiene una especificidad amplia, ataca a
los residuos de aminoácidos alifáticos neutros pequeños, como la glicina, alanina y serina. Las exopeptidasas catalizan la hidrólisis
de enlaces peptídicos, uno a la vez, desde los extremos de péptidos. Las carboxipeptidasas, secretadas en el jugo pancreático,
hidroliza el enlace peptídico carboxiterminal en las cadenas polipeptídicas. Todas ellas son sintetizadas como zimógenos y son
activadas al ser liberadas a la luz del intestino para que actúen sobre las proteínas

La falta de enzimas proteolíticas produce creatorrea (presencia de fibras musculares identificables en las heces, que provienen
de la carne de los alimentos), y azorrea (gran cantidad de productos nitrogenados en las heces). En el lactante con ausencia
congénita de tripsinogeno y por consiguiente por falta de activación de quimotripsinógeno y procarboxipeptidasa, existe
hipoproteinemia, con retardo marcado del crecimiento.

FUNDAMENTACIÓN DE LA TECNICA:
La reacción con la ninhidrina produce colores que sirven como base para la cuantificación de todos los aminoácidos. A simple
vista podemos distinguir una coloración que va de azul a violeta intenso. Ya con la ayuda de equipos podemos evaluar la
intensidad de la luz midiendo la absorción con longitud de onda de 540 nm. Aminoácidos secundarios como la prolina forman
productos ligeramente distintos, estos son amarillos y su máxima absorción es a 440 nm.

FINALIDAD:
▪ Demostrar la acción hidrolítica de las enzimas digestivas contenidas en el páncreas sobre la caseína o proteína de la leche,
determinado los productos (aminoácidos) con ninhidrina.

MATERIAL Y EQUIPOS
▪ Material: de vidrio: tubos de ensayo, pipetas milimetradas.
▪ Equipos: baño maría, olla para baño de agua hirviendo.
▪ Reactivos:
• Caseina al 1% en buffer fosfato 0,1 M pH 8.
• Buffer fosfato 0,1 M pH 8.
• Solución de extracto pancreático.
• Solución acuosa de ninhidrina al 0,25% saturada con butanol.
• Acido tricloroacético al 10%.

PROCEDIMIENTO
▪ Armar el siguiente Incubado:
TUBOS DE ENSAYO
COMPONENTES (ml)
I II III
Caseina al 1% 1.0 1.0 --
Buffer fosfato 0.1M pH 8.0 1.0 1.0 1.0
Solución de extracto pancreático 1.0 -- 1.0
Agua Destilada -- 1.0 1.0
Mezclar y colocar en baño maría a 37 ºC por 30 minutos.
Transcurrido el tiempo, armar un nuevo sistema y colocar:

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TUBOS DE ENSAYO
COMPONENTES (ml)
I II III
Incubado anterior 0.5 0.5 0.5
Ninhidrina 1.0 1.0 1.0
Mezclar y llevar a un baño de agua hirviendo (franca ebullición), durante 3 a 5
minutos.
Observa los cambios de color de cada tubo.

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▪ Trabajar con lo que resta del incubado:

TUBOS DE ENSAYO
COMPONENTES (ml)
I II III
Incubado anterior 0.5 0.5 0.5
Ácido tricloroacético al 10% (gota a gota) 1.0 1.0 1.0
Agitar continuamente.
Observa las variaciones que se produce en cada tubo.

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Actividades a desarrollar por el alumno:

- Explique bioquímicamente lo encontrado.

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PREGUNTAS DE APLICACIÓN.
1) ¿Cuál fueron los objetivos de la práctica?
2) Identifique las variables que intervinieron en el experimento realizado en la práctica.
3) Identifique los componentes del sistema empleado en la práctica y señale sus principales características.
4) Explique el sitio de producción y la acción de las hormonas que intervienen en el proceso de digestión y absorción de los
aminoácidos
5) Elabore un esquema con la digestión y absorción de proteínas y aminoácidos.
6) Elabore un esquema mostrando dos ejemplos de transamiación e identifique los componentes que interviene.
7) Elabore un esquema mostrando dos ejemplos de desaminación e identifique los componentes que interviene.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.
1) Murray R. Harper Bioquímica Ilustrada. 31° edición, México 2019.
2) Nelson D, Cox M. Lehninger. Principios de Bioquímica. 6ta Edición, Editorial Omega, España, 2011