1.

Crea unha táboa para expoñer as observacións dos resultados da práctica de

transformación bacteriana de E.coli.

Placa Resultados
Plásmido (+) LB/amp Colonias de cor blanco.
LB/amp/ara Colonias con fluorescencia de cor verde.
Plásmido (-) LB Crecemento sen fluorescencia
LB/amp Sen crecemento.

2. Interpreta os resultados en cada placa. ¿Por qué se produce ou non crecemento

en cada caso?

LB/ amp: A ampicilina non evita o crecemento do plásmido.

LB/amp/ara: A arabinosa activa o xen GPF, aparecendo a fluorescencia.
LB/amp: Non hai crecemento, posto que o antibiótico impide o crecemento da
bacteria porque non posúe o plásmido.
LB: Crece normal, xa que non hai nada que o impida, pero non aparece a
fluorescencia por falta da ampicilina

 Fai referencia ós seguintes aspectos.

o Papel do plásmido pGLO:
Introduciráse o pGLO na bacteria E. coli para proporcionar que teña lugar
unha transformación bacteriana.
o Interés da incorporación de ampicilina no medio de cultivo:
O plásmido engádelle á bacteria unha resistencia ao antibiótico, e polo tanto
só crece esa bacteria no medio, e non outras.
o Función da arabinosa incorporada na placa LB/amp/ara. Activa ó
xen GPF das células transformadas.

Si no hay arabinosa, no hay transcripción, su función es de efector o

inductor.

El gen araC codifica para la proteína reguladora C. C es un activador, solo si

está unido a la arabinosa. El operón también es sensible a la glucosa, ya que
si la concentración de glucosa es baja, habrá más CAP – cAMP, con lo que
se activará la transcripción. Si la concentración de glucosa es alta, pasará lo
contrario. El CAP – cAMP es tambien activador. La proteína C es capaz de
autorregularse, inhibiendo su propia síntesis. Existen tres lugares de unión de
la proteína C, marcados en el esquema superior. AraO1 es donde se une
proteína C para autorregularse, ya que impide la transcripción del gen araC.
AraI y araO2 actúan de manera conjunta en la regulación del promotor BAD.
En presencia de arabinosa, la proteína C estimulará la síntesis de los
productos codificados por los genes BAD. Si no hay proteína C, se
estimulará la sítntesis de ésta. Si no hay arabinosa, se formará un bucle que
impedirá que haya transcripción de los genes BAD.
En resumen, para que haya transcripción ha de haber arabinosa, proteína C y
Cap – cAMP. Si no hay arabinosa, la proteína C se unirá a araI y a araO2,
con lo que se formará el bucle represor, por lo que no habrá síntesis. La
formación del bucle depende de la presencia de arabinosa.