UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER

LICENCIATURA EN CIENCIAS NATURALES Y DEL MEDIO

AMBIENTE

ASIGNATURA: PROCESOS MICROBIOLÓGICOS INDUSTRIALES Y LABORATORIO. CÓDIGO: 1950605

DOCENTE: ELKIN FERNANDO RODAS MENDOZA

RECOMENDACIONES ANTES Y DURANTE LA PRACTICA

1. Al iniciar y finalizar la practica o lectura siempre deberá limpiar y desinfectar el área de trabajo como se le indicará en
la primera práctica.
2. Lleve siempre su uniforme completo (bata blanca, gorro, tapabocas y guantes) y limpio, lonchera de trabajo – equipo
de trabajo, libreta de apuntes (cuaderno cosido) – guía de laboratorio.
3. Llegue a la práctica con un conocimiento previo sobre lo que se realizará, para ello deberá contar con su cuaderno
informe listo para la elaboración de su trabajo, es decir lleve realizado un PRE – INFORME que contendrá: Análisis
teórico, Metodología en diagrama de flujo y cuestionario resuelto si las preguntas son teóricas, de lo contrario espere a
desarrollar la práctica para resolver preguntas relacionadas con resultados de la práctica, los esquemas
correspondientes a los resultados.
4. Luego del preinforme, va el título: TRABAJO EN PRACTICA, donde se incluirá las explicaciones del docente, (si
tiene dudas pida la explicación correspondiente) y actividades durante la práctica.
5. Marque sus cultivos (material de trabajo) de la siguiente forma
 Grupo de trabajo (N° / A o B)
 Fecha de la práctica (día/mes/año)
 Nombre de cultivo (nombre del microorganismo a la técnica)
 Nombre del medio de cultivo
 Otras especificaciones si se requieren
6. Tenga en cuenta que algunas prácticas finalizan en el horario estipulado, pero otras se deberá acudir al laboratorio
nuevamente para su respectiva lectura u observación de resultados, esto luego de 2 a 5 días en promedio. Al momento
de leer los resultado coloque el título: LECTURA DE RESULTADOS y realice las anotaciones respectivas. (el horario
de lectura será definido en clase).
7. Luego de ello, realice el resto del informe: resultados, discusiones de los resultados, conclusiones, cuestionario y
actividad asignada a cada grupo de trabajo de laboratorio y por último la bibliografía.
8. Cada etapa de su trabajo será revisada en los tiempos indicados para ello.
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LABORATORIO N° 1: INTRODUCCIÓN AL TRABAJO DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

PARTE I: NORMAS DE BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO

OBJETIVOS

 Conocer las normas básicas de trabajo en el laboratorio de microbiología.

 Definir la importancia de aplicar las normas de bioseguridad durante el trabajo de laboratorio.
 Conocer las diferentes áreas de trabajo que hacen parte del laboratorio y las normas a seguir en cada de ellas.

1. NORMAS DE BIOSEGURIDAD BÁSICAS

- Lávese las manos con agua y jabón al iniciar la práctica y al terminar esta antes de salir del laboratorio
- Use siempre bata de laboratorio, gorro y tapabocas. La bata se debe llevar abotonada y limpia.
- No ingiera bebidas ni alimentos dentro del laboratorio. No ingiera las muestras que lleva para análisis.
- Flamee el asa antes y después de usarla
- Cuando tenga el asa bacteriológica cargada con algún cultivo de microorganismos no se desplace de un lado a otro, ni
la acerque a sus compañeros de trabajo.
- Trabaje solo en su puesto no se desplace por el laboratorio sin autorización.
- Marque cuidadosamente todos los cultivos (microorganismo, fecha, # de grupo, nombre de la prueba si es el caso) y
las preparaciones que ellos se hacen. Incube en el sitio indicado dependiendo si la siembra es para bacterias o para
hongos.
- Si cae material contaminado sobre la mesa, el suelo, ropa o manos, informe inmediatamente al docente o al asistente
de laboratorio para tomar las medidas que sean necesarias
- Al iniciar la práctica de trabajo, limpia y desinfecta el área que le corresponda. Al terminar su práctica limpia y
desinfecta nuevamente, descarte cultivos y material que no necesite.
- Fíjese dónde está el recipiente de descarte, teniendo en cuenta si es material contaminado biológicamente (Recipiente
rojo), hojas de cuaderno, punta de lápiz, entre otros en el recipiente para tal fin que sería (el recipiente gris), el material
contaminado con material orgánico ( de alimentos que se procesaron o analizaron, entre otros, van al recipiente verde.
- El material de desecho, como los medios de cultivo, deben ser esterilizados para su descarte final, por tal razón debe
colocarlo en bolsa plástica de alta densidad, marcarlo y entregarlo al asistente; después de esterilizado debe reclamarlo
y llevarlo a tiempo para su entrega final, de tal modo que hará a paz y salvo con el laboratorio.
- Nunca retire los cultivos de microorganismos del lugar de trabajo, el manejo de cepas es en específico para el asistente
a cargo, o el docente.
- No se toque la cara con las manos, ya que dedos y uñas se contaminan fácilmente, (al igual que los guantes) llevándose
gérmenes que puede ser patógenos, o causarle alguna reacción anormal.
- Los cultivos empleados para las prácticas sólo se deben abrir en el momento de la siembra observación, no se ven
llevar en los bolsillos, ni oler, ni tocar y deberán estar marcados previamente para poder ser utilizados.
PARTE II: CONOCIMIENTO DE LAS AREAS QUE CONFORMAN UN LABORATORIO DE
MICROBIOLOGIA
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Objetivo:

 Identificar las diferentes áreas de trabajo en microbiología, conociendo la función de cada una; básicamente hay 5
áreas de trabajo:
1. Área de preparación de material de vidrio y medios de cultivo - esterilización calor húmedo (autoclave) y calor seco
(horno) almacén de reactivos - descarte material.
2. Área de siembra - cuarto de siembra - recomendaciones de trabajo.
3. Área de incubación - equipos - T/t
4. Banco de cepas (conservación) / material no biológico.
5. Manejo de residuos.

PARTE III: ESTERILIZACIÓN Y PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIO Y MATERIAL DE VIDRIO.

OBJETIVOS

 Conocer las diferentes técnicas de esterilización usadas en el laboratorio de microbiología.

 Preparar material de vidrio y medios de cultivo para su esterilización.
FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA
3. 1 ESTERILIZACION: la determinación precisa de una especie microorganismos se fundamenta en el estudio del
germen en cultivo puro. El material de trabajo debe esterilizarse previamente para liberarlo de los microorganismos de la
flora ambiental. El agente esterilizante más empleado es el calor, ya sea seco o húmedo, en ocasiones es necesario utilizar
la filtración de líquidos con dispositivos que retienen los microorganismos. La preparación y esterilización del material de
vidrio (la cristalería) puede haberse contaminado con el medio ambiente (con células o esporas) y debe lavarse con
detergente, enjuagar con abundante agua corriente, luego dejarse de 10 – 15 minutos en una solución con desinfectante y
enjuagar, secar al aire o en horno, envolverse y llevar al horno para esterilizarlo. La cristalería ya usada debe descartarse en
solución de cresol al 3% o desinfectantes similares (hipoclorito) así se destruyen lentamente los microorganismos y se
evitan que pasen a la atmósfera, los pisos, superficies, manipuladores, entre otros, debido a que se encuentran en una
superficie líquida, protegiéndose el personal encargado de la limpieza. Después de lavar con detergente, enjuagar y secar
al aire libre o en horno de aire caliente; cultivos de microorganismos deben esterilizarse únicamente en autoclave.
3. 2 METODOS DE ESTERILIZACION: existen varios métodos de esterilización, los cuales se emplean de acuerdo al
material y sustancias esterilizarse.

1. Esterilización por calor (calor seco y calor húmedo)

Calor seco:

Llama directa. Se usan para esterilizar asas y agujas de disección.

Horno de aire caliente. Se utiliza para esterilizar la cristalería y equipo sólido. Durante 2 horas A 160 - 180 °C se
destruyen las bacterias incluyendo las esporas, es importante envolver la cristalería en papel Kraft, antes de llevarla al
horno y así fácilmente se almacena sin contaminarse. Después de enfriarse en horno gradualmente; abrir la puerta
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inmediatamente puede ocasionar la rotura de la cristalería y las corrientes de aire pueden llevar al horno microorganismos
contaminantes.

Calor húmedo:

Ebullición. Usualmente en microbiología no es adecuado, ya que permite la supervivencia de organismos esporulados. Se

usa para hervir agujas y otros materiales, después de lavadas y antes de llevarlos al horno. Se fundamenta en el empleo del
calor húmedo proporcionando vapor de agua.

Autoclave. Es el método más adecuado para esterilizar elementos que fácilmente se deterioran por calor seco tales como
hule o plástico y medios de cultivo. A excepción de los medios que contienen azúcares y antibióticos, la esterilización debe
hacerse a 15 libras de presión por 15 minutos a 121 °C, este método es superior a cualquier otro, porque permite en corto
tiempo la destrucción de formas vegetativas como esporulados; fundamentándose en la producción de vapor a presión por
aumento de la temperatura en una cámara de paredes sólidas herméticamente cerradas.

MATERIALES DE TRABAJO
Erlenmeyer de 250 Ml, Cajas de Petri y Tubos de Ensayo, Pipetas, Medios de Cultivo, Espátula, Balanza Analítica, Estufa,
Autoclave, Incubadora, Horno, Microscopio, Estereoscopio, Mechero, Papel Kraft, Lonchera de Trabajo, Libreta de
apuntes.

2. PROCEDIMIENTO PARA LA PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

- Lea la etiqueta del medio de cultivo y siga al pie de la letra las instrucciones que en ella se indican.
- Haga las cuentas correspondientes, para preparar los medios que se le indican.
- Pese el medio y agregue la cantidad de agua indicada (agua destilada).
- Lleve a hervir el medio, para que el polvo se solubilice por completo (algunas excepciones, ej. caldos)
- El procedimiento se realizará con agitación constante del recipiente que contiene el medio de cultivo.
- Lleve a esterilizar el medio en el autoclave 121 °C, 15 lb/15 minutos (lea las indicaciones de la etiqueta, algunos medios
no se esterilizan en autoclave).
- Los medios que contiene sustancias alterables por las altas temperaturas deben esterilizarse por el método fraccionado,
los que contienen azúcar y antibiótico se esterilizan a 12 lbs.

3. 4 PROCEDIMIENTO PARA LA PREPARACIÓN DE MATERIAL DE VIDRIO (detergente, desinfectante, papel

kraft, algodón) el papel kraft se utiliza para envolver el material de vidrio, las pipetas llevan algodón en la boquilla
superior antes de envolverse, todo el material debe estar lavado y desinfectado previamente antes de ser envuelto para
esterilizarlo el procedimiento se dará en forma completa durante la práctica.

ACTIVIDAD EN PRÁCTICA

PARTE I: Discuta por escrito los tres tipos de riesgos que se presentan en el laboratorio de microbiología acorde a la
clasificación vista en práctica y la importancia que tiene el cumplimiento de las normas de bioseguridad.
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PARTE II: realice un esquema de laboratorio de microbiología donde señale las áreas que lo conforman.

PARTE III:
1. De los siguientes equipos de laboratorio realice un dibujo, indique, funciones y modo de uso de cada uno además
de las especificaciones.
a) Autoclave (indique temperatura, tiempo, presión a la cual se esteriliza)
b) Horno (indique temperatura y tiempo de esterilización del material de vidrio)
c) pHmetro (indique el procedimiento a seguir para su calibración, preparación de los buffer)
d) Incubadora (temperatura de trabajo)
e) Microscopio y sus partes
f) Estereoscopio y sus partes
g) Destilador
h) Balanza eléctrica (mantenimiento, cuidado, calibración)
CUESTIONARIO
1. Realice una revisión bibliográfica sobre el tema de bioseguridad: concepto, importancia, ejemplos importantes
relacionados con la microbiología.
2. ¿Qué es el agua destilada? ¿Por qué se utiliza este tipo de agua en el laboratorio de microbiología?
3. Realice una búsqueda en internet sobre:

a) ¿Qué es un pictograma?

b) Los pictogramas (actualizados) de bioseguridad que pueden y / o deben usarse en un laboratorio de

microbiología.