PROBLEMAS RESUELTOS

PROCESOS INDUSTRIALLES DE SEPARACIÓN

Profesor: Sergio Huerta Ochoa

 1. INTRODUCCIÓN

1.1. Estimación de la pureza y el rendimiento de una enzima en un proceso de

purificación.

En el desarrollo de un proceso para la obtención de una enzima a partir de E. coli, se sabe

que ésta tiene un 80% de humedad y que el 60% de su peso seco es proteína. El proceso de
purificación de la enzima consta de 4 pasos. En la Tabla siguiente se presenta la cantidad de
enzima y de proteína total al final de cada paso.

Paso Proteína Total (g) Enzima total (g) Fracción enzima

x 10-3
Rompimiento 12.000 0.080 6.667
celular
Precipitación 1.800 0.060 33.333
Intercambio iónico 0.240 0.048 200.000
Cromatografía Gel 0.036 0.036 1000.000
Se desea obtener el factor de purificación de la enzima en cada paso, el rendimiento por
paso y el rendimiento global.

Solución:

El factor de purificación, el rendimiento por paso y el rendimiento global del proceso se

presentan junto con los datos del problema en la Tabla siguiente:

Paso Prot. Tot. Enzima Fracción Factor de % Recuperación

(g) tot. (g) enz. x10-3 purific.
Por etapa Global

Rompimiento 12.000 0.080 6.667 1 100 100

celular
Precipitación 1.800 0.060 33.333 5 75 75

Intercambio 0.240 0.048 200.000 30 80 60

iónico
Cromatografía 0.036 0.036 1000.000 150 75 45
Gel
a). El factor de purificación se obtiene mediante el cociente de la fracción de enzima en
cada paso, entre la fracción de enzima inicial.

b). El rendimiento en cada paso está dado por el cociente de la cantidad de enzima total
obtenida en cada paso, entre la cantidad total de enzima al inicio del paso.

c). El rendimiento global al final de cada paso está dado por el cociente de la cantidad de
enzima total obtenida en ese paso entre la cantidad total de enzima inicial.
1.2. El proceso de obtención de una enzima consta de 3 etapas de separación. La primera
etapa tiene una eficiencia de 85%, las etapas subsecuentes presentan una eficiencia del 95%
y 80%, respectivamente. ¿Cuántos kilogramos de enzima se obtendrán al final si se inicia
con 3500 L de una solución con una concentración de enzima de 15 g/L?

               
Rendimiento
Etapa (%)
Producto
  Datos:      
Conc. Inicial
15 1 85.00 44.63
  (kg m-3)    
Vol. Inicial
3.5 2 80.75 42.39
  (m3)    
Cantidad
52.5 3 64.60 33.92
inicial (kg)
     
               

1.3. Un proceso para la recuparación de hidroxibutirato deshidrogenasa consta de tres

pasos: Un rompimiemto de las células para liberar enzima intracelular, seguido de dos
pasos de adsorción/desorción por afinidad.

En la Tabla siguiente se presentan los datos obtenidos de actividad de enzima y proteína

total al final de cada paso.

Actividad Total Proteína Total

Paso
(Unidades) (mg)
Rompimiento 6,860 76,200
Ads/Des (1) 6,800 2,200
Ads/Des (2) 5,380 267

Calcular la actividad específica, el índice de purificación y el % de recuperación.

Actividad Total Proteína Actividad Índice de

Paso % Recuperción
(Unidades) Total (mg) Específica (U/mg) purificación
Rompimiento 6,860 76,200 0.090 1.00 100.0
Ads/Des (1) 6,800 2,200 3.091 34.33 99.1
Ads/Des (2) 5,380 267 20.150 223.82 78.4
 2. Ruptura Celular
2.1. Estima la eficiencia de rompimiento de un molino de perlas de 4 etapas con un
volumen libre de 40 L donde se procesan 10 L min -1 de una suspensión celular. De datos de
laboratorios se obtuvo que la constante específica de rompimiento es de 7 x 10-3 s-1.
Solución:
Fórmula
N N
Rm  kV  R  kV 
 1  m  ; Eficiencia:  1  1  m 
Rm  R  NF  Rm  NF 
Datos:
N=4
Vm = 40 L
k = 7 x 10-3 s-1 = 0.42 min-1
F = 10 L min-1
 0.42 40 
4
R 
 1  1   0.754 ; Eficiencia = 75.4%
Rm   410 

2.2. En la operación de un molino de perlas se decide disminuir la cantidad de perlas que

debe ser cargada al molino para reducir el consumo de potencia y la liberación de calor. Las
constantes cinéticas obtenidas con las diferentes cargas de perlas de un proceso que dura 60
segundos se muestran en la tabla siguiente.

Volumen del lecho de perlas Constante de velocidad específica de

Carga  x100
Volumen va cío del molino liberación de proteína, k (s-1)

80 % 5 x 10-2

60 % 1 x 10-2

a) Calcula las eficiencias de rompimiento para ambos casos.

Fórmulas:

Rm R
ln  kt Eficiencia 
Rm  R Rm

Donde: Rm = Concentración máxima de proteína obtenible

R = Concentración de proteína liberada en el tiempo t
t = Tiempo de operación
R
 1  exp  k * t 
Rm

Para una carga de 80%:

R
Rm
 
 1  exp  5 x10  2 * 60  0.95

 1  exp  1x10  2 * 60   0.45

R
Para una carga de 60%:
Rm
 b) Si el volumen vacío del molino es de 4 L y la suspensión celular tiene 20 % de
proteína. Calcula la cantidad de proteína recuperada para el 80 y 60% de carga bajo
las condiciones de operación indicadas.

Para una carga de 80% hay un 20% para la suspensión, esto es: 4 L * 0.2 = 0.8 L. Por lo
tanto se podrían recuperar 0.8 L * 200 g/L = 160 g de proteína máxima. Si la eficiencia es
del 95% se recuperan 0.95 * 160 g = 152 g de proteína
Para una carga de 60% hay un 40% para la suspensión, esto es: 4 L * 0.4 = 1.6 L. Por lo
tanto se se podrían recuperar 1.6 L * 200 g/L = 320 g de proteína máxima. Si la eficiencia
es del 45% se recuperan 0.45 * 320 g = 144 g de proteína

2.3. Rompimiento celular en un molino de perlas. En estudios de liberación de proteína

intracelular en función de la velocidad del agitador empleando un molino de perlas tipo
Netzsch LME 4, con perlas de diámetro entre 0.55 y 0.85 mm, se utilizó una suspensión
celular de concentración de 50% (peso/volumen), un flujo de alimentación de 50 L/h y una
carga de perlas del 85%. Bajo estas condiciones se obtuvieron los siguientes datos:

rpm Proteína liberada

(mg/mL
1200 15.88
1500 22.35
1750 22.90
2000 22.94
2250 23.00
Se pide:
a) Estimar la velocidad óptima para el agitador.
25
Proteína liberada (mg/mL)

20

15

10

0
1000 1200 1400 1600 1800 2000 2200 2400
Tasa de agitación (rpm)

Respuesta: 1500 rpm

b) Discutir sobre el consumo de potencia del agitador para velocidades superiores a la

óptima.
Respuesta: El aumentar la velocidad de agitación a más de 1500 rpm no trae un beneficio
importante en la liberación de proteína.

2.4. Comparación de agitadores. La desintegración celular por lotes con dos tipos de
agitadores utilizados en un molino de perlas producen los siguientes datos:

Agitador 1 Agitador 2
Tiempo de  Rm  Tiempo de  Rm 
residencia ln  residencia ln 
(min)  Rm  R  (min)  Rm  R 
3 0.037 3 0.060
5 0.090 5 0.150
10 0.160 10 0.225
15 0.225 15 0.325
20 0.300 20 0.425
25 0.365 25 0.525
30 0.437 30 0.650

Se pide:
a) Estimar la constante cinética k para cada tipo de agitador.
Agitador 1: k = 0.0144 min-1
Agitador 2: k = 0.0207 min-1

b) Calcular el tiempo para el cual se obtiene el 80% de rompimiento con cada tipo de
agitador.
 R 
R ln 1  
 1  exp  k * t  ; Rm
Rm  
t
k

Para el Agitador 1 se tiene una eficiencia del 80% a

 R 
ln1  
 Rm  ln 1  0.8
t   111 .76 min
k  0.0144

Para el Agitador 2 se tiene una eficiencia del 80% a

 R 
ln1  
 Rm  ln 1  0.8
t   77.75 min
k  0.0207

3. Centrifugación

1. Problema 4.2. (Tejeda y col., 1995)

 Una centrífuga tubular de diámetro 12.4 cm y altura 72.5 cm gira a una velocidad
tal que genera un campo de 15,600 G. La película que forma el líquido al girar tiene
un espesor de 5 cm.

Estimar el gasto volumétrico que puede manejar este equipo en la separación de

restos celulares de E. coli que presentan un diámetro promedio de 0.25 μm y se
encuentran en una solución con 4 cp de viscosidad. La diferencia de densidad entre
las partículas y la solución es de 0.03 g cm-3.

Respuesta:

  
  
  2 L  R02  R12  d p2 g
Fórmulas: Q   vg  
  vg 
;
 g   R0   18
  
 ln R  
   1  

2 1x106 cm3 1kg 

 0.25x10 6

m  0.03g/cm3 *
1m 3 3

 9.81m/s 2
1x10 g 

vg    2.5547 x1010 m/s
18 0.004kg /(m * s) 

15600
N  14988.47rpm
 
5.6 x107 124mm 

2
w 14988.47rpm  1569.59rad/s
60

  
  1569.59rad/s  2  0.725m    0.062m  2   0.012m  2 
       1315.584m 2
 9.81m/s 2   0.062m  
 ln   
  0.012m 
  


Q  v g   3.3609x10-7 m 3 /s  
 3600s  1000L 
 3 
 1.21L/h
 1h  1m 

2. Problema 4.3. (Tejeda y col., 1995)

Estimar el área característica de centrifugación para procesar 3.34x10-3 m3 s-1 de un

caldo de cultivo bacteriano. Las células del caldo presentan un diámetro promedio
 de 1 μm  y una densidad de 1096.7 kg m-3. La viscosidad del caldo es 2.682x10-3 N-
s  m-2 y su densidad de 997 kg m-3.

Respuesta:
Fórmula: Q  v g 

vg 
d p2   s    g

1x10 6

2

m 1096kg/m 3  997kg/m 3 9.81m/s 2 
 2.0117 x 10 8 m/s
18  
18 2.682x10-3 kg /  m * s 
3 3
Q 3.34 x10 m /s
   166025m 2
vg 2.0117x10 -8 m/s

3. Problema 4.4 (Tejeda y col., 1995)

Una centrífuga tubular que gira a 4,000 rpm cuando se alimenta con un caldo de
levaduras a razón de 12 L min-1, logra recuperar el 60% de sólidos. Sabiendo que la
recuperación es inversamente proporcional al flujo, estimar:

a) La velocidad a que debe girar la centrífuga para obtener un 95% de

recuperación.
b) El flujo que puede ser alimentado a la centrífuga cuando gira a 4,000 rpm y se
desea una recuperación del 95%.

Respuesta:
La fórmula para del gasto (Q1) para la centrífuga tubular operando al 60% es:
1
Q1  v g 1
0. 6
Para la centrífuga operando a al 95% sería:
1
Q2  vg  2
0.95
Por lo tanto la relación quedaría
1
Q1 
 0. 6 1
Q2 1 2
0.95
Para el inciso a) los gastos son iguales Q1 = Q2 = 12 L min-1, y Σ varía sólo en las
rpm, por lo que la expresión queda:
0.95  N1  0.95  4000
2 2
1 
0.6  N 2  2
0.6  N 2  2
Por lo tanto:
N2 = 5,033 rpm
Para el inciso b) las Σ’s son iguales y los gastos diferentes, esto es:
1
12L/min
 0 .6
Q2 1
0.95
 Q2 = 7.58 L/min

4. Una centrífuga de discos recupera el 50% de células a un gasto de 10 L min-1. ¿Qué

gasto se puede manejar para lograr 80% de recuperación en la misma centrífuga
operada a la misma velocidad de centrifugación?

Respuesta:
1
10L/min 0.5

Q2 1
0.8

Q2 = 6.25 L/min