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Preparacion Medios de Cultivo
Preparacion Medios de Cultivo
ZAMORANO
Carrera de Ciencia y Producción Agropecuaria
IV. PREPARACION
DE MEDIOS DE CULTIVO
Esta parte del laboratorio permitirá al estudiante llevar a cabo todos los pasos correspondientes
en la preparación de un medio de cultivo usando como base las sales minerales del medio de
Murashige y Skoog (MS). Este medio fue originalmente desarrollado para cultivo de tejidos de
tabaco pero ha sido utilizado en muchas otras especies con muy buenos resultados.
La característica distintiva del medio MS es su alto contenido de sales, especialmente las sales de
K y de N. También utiliza B, Mn y Zn en cantidades altas. La manipulación de los niveles de
auxina y citocinina va a influenciar la respuesta en cuanto a morfología de los tejidos; esta
respuesta puede variar desde la formación de tejido calloso no diferenciado, hasta la formación
de raíces, yemas, o embrioides.
Microelementos mg/L
H3BO3 6.2 AIA (u otra auxina) 2.0 (1-30)
CoCl26H2O 0.025 Kinetina (u otra citocinina) 0.2 (0.04-10)
CuSO45H2O 0.025 (Se pueden usar otros reguladores
KI 0.83 del crecimiento en lugar de,
MnSO44H2O 22.3 o en adición a las auxinas y
Na2MoO42H2O 0.25 citocininas)
ZnSO47H2O 8.6
pH 5.7 - 5.8
Hierro mg/L
FeSO47H2O 27.8
Na2EDTA 37.3
Las cantidades recomendadas para los compuestos orgánicos del medio de Murashige y Skoog
(MS) (1962) fueron desarrolladas como producto de una investigación extensiva. Una
modificación en las cantidades de orgánicos dio origen al medio Linsmaier-Skoog (1965). Este
medio contiene los mismos compuestos inorgánicos que el medio MS, y los orgánicos que
incluye son el myo-inositol con la misma dosis y la tiamina en una dosis de 0.4 mg/L; el resto de
compuestos orgánicos (piridoxina y ácido nicotínico) se omiten.
1. En un beaker agregar la mitad (500 ml) de agua bidestilada del volúmen total de medio a
preparar. Colocar una barra agitadora magnética en el fondo del beaker y mantener en
agitación constante con la ayuda de un agitador automático;
2. Si el medio utiliza el 100% de las sales minerales MS entonces agregar las siguientes
soluciones:
a) 100 ml de la solución madre de macroelementos que ha sido previamente preparada a
una concentración de 10x;
b) 1 ml de la solución madre de microelementos que ha sido previamente preparada a
una concentración de 1000x;
c) 5 ml de la solución madre de hierro que ha sido previamente preparada a una
concentración de 200x;
5. Aforar al volúmen deseado (en este caso es de 1L) con un frasco volumétrico de 1000 ml;
8. Si se agregó agar, éste necesita ser disuelto en un horno microondas. Se coloca el beaker con
el medio en el horno microondas y se calienta suficiente tiempo hasta que el agar este
disuelto. Durante el tiempo que esta calentándose es conveniente estar agitando el medio
en el agitador automático cada dos minutos aproximadamente. El tiempo que va a
permanecer el medio en el microondas calentándose va a depender del volúmen de
medio que se esté preparando;
Una vez que los contenedores con el medio salen del autoclave hay que dejarlos enfriar y luego
refrigerarlos hasta que se vayan a utilizar. Es recomendable utilizar el medio dentro de una
semana después de haber sido preparado.
Siempre antes de preparar una solución madre hay que estar seguro cuánto del químico se debe
agregar a la cantidad de medio nutritivo que estamos preparando.
Por ejemplo:
Si la cantidad requerida de BA en un medio de cultivo es de 1 mg/L, esto equivale a decir que:
0.1 mg de BA se requieren para preparar 100 ml de medio, y
0.25 mg se requieren si es que la cantidad a preparar es de 250 ml de medio.
Entonces, si vamos a preparar solamente 250 ml de medio de cultivo, vamos a necesitar agregar
0.25 mg de BA. Esta cantidad de BA se puede agregar utilizando una solución madre de 1:1
(1mg = 1ml). Así que con una pipeta de 1 ml, se agregan 0.25 ml de esta solución madre de 1:1
al medio de cultivo para llenar el requisito correspondiente a 0.25 mg de BA en el medio
nutritivo.