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1.1. En el Anexo II del Reglamento (CE) Nº 1907/2006 (REACH) (L396/267) corresponde a la “Guía
para la elaboración de fichas de datos de seguridad”. Utilizando esta guía, conteste a las
siguientes cuestiones.
1. b), 2. c), 3. a), 4. d), 5. d), 6. b), 7. c), 8. b), 9. d), 10. d).
1. d, 2. a), 3. c).
4. Se plantean criterios diferentes porque en combinación, la reacción puede llegar a ser muy
diferente. Pueden darse distintas interacciones que incrementen o disminuyan la toxicidad
(interacción aditiva, sinergística, de potenciación, antagonista, …).
1.3. La lista de indicaciones de peligro, información suplementaria sobre los peligros y elementos
suplementarios que deben figurar en las etiquetas y la lista de consejos de prudencia aparecen
en los anexos III y IV (página 198 del 1272/2008). En la tabla se muestran las indicaciones de
peligros y los consejos de prudencia referentes a un producto, complétela explicando lo que
significa cada número.
Hazard statements
H202 Explosivo; grave peligro de proyección.
H226 Líquidos y vapores inflamables.
H260 En contacto con el agua desprende gases inflamables que pueden inflamarse
espontáneamente.
H312 Nocivo en contacto con la piel.
H317 Puede provocar una reacción alérgica en la piel.
H332 Nocivo en caso de inhalación.
H340 Puede provoca defectos genéticos.
H412 Nocivo para los organismos acuáticos, con efectos nocivos duraderos.
EUH 019 Puede formar peróxidos explosivos.
EUH 204 Contiene isocianatos. Puede provocar una reacción alérgica.
Precautionary statements
P251 Recipiente a presión; no perforar ni quemar, incluso después del uso.
P270 No comer, beber ni fumar durante su utilización.
P231+P232 Manipular en gas inerte. Proteger de la humedad.
P235+P410 Conservar en un lugar fresco. Proteger de la luz del sol.
P314 Consultar a un médico en caso de malestar.
P331 NO provocar el vómito.
P336 Descongelar las partes heladas con agua tibia. No frotar la zona afectada.
P350 Lavar suavemente con agua y jabón abundantes.
P374 Luchar contra el incendio desde una distancia razonable, tomando las
precauciones habituales.
1.4. A la hora de avisar de los peligros de un compuesto químico existen una serie de
pictogramas que se emplean para que el usuario conozca el tipo de peligro. Utilizando el
documento “Globally harmonized system of classification and labelling of chemicals (GHS)” de
las Naciones Unidas y el anexo V del Reglamento CLP (página 415 del 1272/2008) indique el
significado de cada uno de los pictogramas que se indican a continuación (nota: los de color
naranja son los usados antes y han sido sustituidos por los que tienen el recuadro rojo):
A1 Peligros físicos: Gases a presión, gases comprimidos, gases licuados, gases licuados
refrigerados, gases disueltos.
A2 Peligros físicos: Corrosivos para los metales.
Peligros para la salud humana: Corrosión cutánea, Lesión ocular grave.
A3 Peligros físicos: Gases aerosoles, líquidos y sólidos inflamables; Substancias y mezclas
que reaccionan espontáneamente; líquidos y sólidos pirofóricos; sustancias y mezclas
que experimentan calentamiento espontáneo; y sustancias y mezclas que, en contacto
con el agua, desprenden gases inflamables.
B1 Nocivo (o irritante, si apareciera la letra “i” en la imagen).
B2 Tóxico (o muy tóxico, si apareciera “T+” en la imagen).
B3 Peligroso para el medio ambiente.
PRACTICA 2. MÉTODOS DE ENSAYO
2.1. En la Parte C de este Reglamento (página 787) se explican distintos métodos de evaluación
de la toxicidad. Respecto al ensayo de toxicidad para quironómidos en sistemas sedimento-agua
con sedimento enriquecido, señale la opción correcta:
1. c), 2. a), 3. a), 4. c), 5. c), 6. c), 7. b), 8. c), 9. d), 10. a).
2.2. Realice un esquema de la información que debe incluirse en el informe del ensayo de
inmovilización aguda de Daphnia sp.
1. Sustancia problema
2. Especie de ensayo
3. Condiciones de ensayo
4. Resultados
Límite de determinación
3.2. Utilizando la base de datos HSDB responda a las siguientes preguntas sobre el
benzophenone-2 (CAS 131-55-5) en el espacio asignado.
Según la GHS causa irritación en la piel, ocular grave y puede irritar las vías respiratorias
(H315, H319, H335).
Si, ya que actúa como agonista del alfa receptor del estrógeno. (El estradiol es el
estrógeno predominante durante los celos).
1’9
198,8 ºC
Iniciando la búsqueda por sustancias activas (“Search active substances”), conteste a las
preguntas siguientes relativas al Oryzalin (CAS 19044-88-3).
3.4. Existen otras bases de datos que se pueden emplear. Una de ellas es la PPDB: Pesticide
Properties DataBase, de la Universidad de Hertfordshire. Empleando esta base de datos
responda a las siguientes preguntas relativas al compuesto Oryzalin.
1. ¿Para qué tipo de plagas se utiliza?
Para el control de gramíneas anuales y de hoja ancha en árboles frutales y alrededor de
ornamentales.
Brigitte Landesmann
5. ¿Cuál es el AOP cuyo punto de contacto es Kristin Lichti-Kaiser?, ¿en qué situación se
encuentra?, ¿está en algún proyecto de la OECD?
- Constitutive androstane receptor activation leading to hepatocellular adenomas
and carcinomas in the mouse and the rat
- Situación del autor: “Open for citation & comment”; Situación OECD: EAGMST
Under Review”
- Sí, “Included in OECD Work Plan”
PRÁCTICA 5. ENSAYO TOXICOLÓGICO
ENSAYO TOXICOLÓGICO
Al valorar la ecotoxicidad de un compuesto el primer paso es realizar un ensayo de supervivencia
exponiendo grupos de animales prueba o de referencia a concentraciones crecientes del
compuesto potencialmente tóxico durante un tiempo definido. El análisis de la curva dosis-
respuesta, con relación a la mortalidad o la supervivencia del organismo estudiado, permite
cuantificar y expresar de forma precisa la toxicidad. En este tipo de estudios se pueden obtener
distintos parámetros de interés como la LC10 o la LC50. Con los datos que se indican:
Condiciones experimentales:
ORGANISMO: Chironomus tentans Fabricius, 1805, larvas acuáticas de cuarto estadio.
TIEMPO DE EXPOSICIÓN: 48 horas.
MUESTRA: 3 réplicas experimentales de 30 individuos/concentración cada una.
5.1. Obtenga la LC50 para cada uno de los compuestos mostrados por medio de interpolación
gráfica.
y=50; x=1.2469
LC50=101.2469= 17.6563 µg /L
y=50; x= -1.0015
LC50=101.0015= 0.0997 µg /L
y=50; x=0.1364
LC50=100.1364= 1.3689 µg /L
5.2. Calcule la LC50 para cada uno de los productos mostrados utilizando el análisis Probit.
a.- Manual
y=5; x=1.1213
LC50=101.1213
LC50 = 13.2223 µg /L
y=5; x= -1.0236
LC50=10-1.0236
LC50 = 0.0947 µg /L
y=5; x=0.2051
LC50=100.2051
LC50 = 1.6036 µg /L
Compuesto LC50
A 0.0132 mg/L
B 0.0947x10-3 mg/L
C 1.6036x10-3 mg/L
b.- Informático
¿Qué puede decir de la toxicidad relativa de cada compuesto respecto a los otros dos si los
pesos moleculares de estos compuestos son 350?2 g/mol (A), 211.3 g/mol (B) y 127.8 g/mol
(C)?
La toxicidad no se debe a la unidad de masa por el producto sino por la acción de la molécula y
para valorarla es preciso expresar las concentraciones en términos de molaridad.
Compuesto A
Compuesto B
Compuesto C
5.3. Obtenga la representación normal para cada producto. Esta representación se realiza
calculando la mortalidad relativa específica para cada concentración. Para ello basta con restar
a cada valor de la mortalidad la inmediatamente anterior y representar el diagrama
correspondiente.
5.4. A la hora de evaluar la toxicidad se emplean parámetros muy variados, entre los cuales se
encuentran los de tipo molecular como pueden ser la expresión de un gen o la cantidad de una
proteína. A continuación, se proporcionan los datos obtenidos en un estudio de expresión génica
con los productos A, B y C. Haga la representación gráfica de los datos y comente los resultados
obtenidos razonando sus respuestas. En esta práctica el estudiante debe emplear los
conocimientos adquiridos a lo largo del grado, especialmente lo aprendido en materias como
Biología, Matemáticas, Estadística o Técnicas Instrumentales. Datos obtenidos (“Rep.” Indica
réplica):
1ª Parte.
2ª Parte
Se ha estudiado también el efecto que tiene la mezcla de los productos D y E. La gráfica de los
resultados obtenidos se muestra a continuación. Comente los resultados de las gráficas con
relación a la interacción que puede darse y el efecto que tiene la mezcla en la expresión del gen.
Observamos que tanto el Producto D como el E inhiben al gen, empiezan a partir de los 0’1mg/L
hasta lograr resultados similares a los de control en los 10 mg/L. En el compuesto E vemos que
las cajas son más pequeñas, cosa que indica que la incerteza o variabilidad es menor.
Se observa que la interacción entre D y E es de tipo antagonista, ya que por separado inhiben el
gen y en conjunto lo activan.
Representa un análisis de una actividad (en K/gr de proteína) de cuatro enzimas diferentes,
respecto el tiempo de exposición de un producto X.
CAT: La Catalasa es una enzima que cataliza la descomposición del peróxido de hidrógeno y
agua. En la gráfica se observa que la actividad de la catalasa aumenta tras pasar 48h de
exposición al producto.
GPx: El Glutatión peroxidasa, cataliza la oxidación del glutatión, y este a su vez protege al
organismo de los hiperóxidos formados por vía endógena. En las primeras 6h vemos disminuir
su actividad, aumentándola considerablemente en las siguientes. A las 48h casi duplica su
actividad de a las 12h.
TXN: La Tiorredoxina es un antioxidante que protege al organismo de los potenciales daños que
puedan tener los radicales libres. En la gráfica observamos que en las primeras 12h disminuye
su actividad ligeramente, aumentándola rápidamente las últimas 24h.
2. Se quiere utilizar este producto en un ensayo de toxicidad acuática pero no existe
posibilidad de realizar un ensayo de flujo. Un estudio previo proporcionó los datos que se
muestran en la gráfica 2 con relación a la degradación del producto. Indique cómo realizaría
un ensayo de toxicidad de una semana de duración para evaluar el daño sobre el desarrollo
en una especie con larvas acuáticas. Razone su respuesta.
La gráfica muestra una degradación total del producto tras el transcurso de 96h (4 días).
Con más días de ensayo, utilizaría un “Ensayo de Renovación Estática”, donde la solución tóxica
se sustituye cada cierto tiempo y permitir ir renovando el oxígeno, la concentración del
compuesto y eliminar los desechos metabólicos. De esta manera se general pocos residuos. Se
ha de ir con cuidado en la manipulación de las muestras para no provocar posibles accidentes o
estrés en los organismos utilizados.
También podría usarse un “ensayo Recirculante”, pero no sería la mejor opción debido a su alta
complejidad de diseño y al riesgo de modificar la concentración del tóxico por el tratamiento de
agua usado.
3. Al analizar los niveles de tres proteínas en adultos de una especie de molusco de agua dulce
se obtuvieron los datos de la gráfica 3. Los niveles del producto estudiado en el ambiente de
este organismo oscilan entre 1 nM y 1 μM (MW = 228.29). ¿Cuál de las tres proteínas
seleccionaría como biomarcador para valorar los efectos? Razone su respuesta.
Para que una proteína sea seleccionada como biomarcador, es necesario que ésta sufra una gran
variación de concentración, dejando entrever que es muy reactiva y se activará aunque la
concentración a indicar sea baja.
Vemos, cómo en la proteína I, el rango estudiado dobla su actividad. Por lo que a simple vista
parece la mejor opción para utilizar de bioindicador.
Vemos una anomalía de 0 a 0’001 nM ya que no observamos ninguna reducción, de manera que
deducimos que el insecto debe de poseer algún mecanismo para eliminar el compuesto X a bajas
concentraciones. Cuando dicho sistema se satura al aumentar la concentración es cuando
empieza a ser tóxico el compuesto y afecta entonces al ciclo larvario.
Para decidir si una especie es una buena bioindicadora o no ha de cumplir ciertos requisitos; ser
abundante, sensible al medio de vida, fácil y rápida de identificar, poca movilidad y que su
ecología y ciclo biológico estén bien estudiados. Como esta especie de insecto cumple con los
requisitos, podría llegar a ser un buen bioindicador.
5.6. Ensayo de Toxicidad del Fenamisntrobin en Artemia franciscana
El fenaminstrobin se obtiene por condensación formal del grupo carboxil de (2E) – [({(E) - [(3E) -
4- (2,6- diclorofenil) but-3-en-2 -ilideno] amino} oxi) metil] fenil} (metoxiimino) acético con el
grupo amino de la metilamina. El un nuevo fungicida sintético de amplio espectro con la
estrobilurina como principio activo que es capaz de inhibir la respiración mitocondrial uniéndose
a un sitio específico en el dicromo b. Se utiliza para todo tipo de cultivos y plantas ornamentales.
2. Especie de ensayo
Tiene una tasa de crecimiento mayor a otras especies de Artemia y es de fácil manipulación. Se
usaron huevos comerciales puestos en un crisol de porcelana grande con agua mineral mezclada
con agua de mar filtrada, incubar a 25ºC durante 48h. Se utilizan durante sus primeras 24h de
vida.
Se mezclan a partes iguales agua mineral y agua de mar filtrada para reproducir su hábitat, con
un pH entre 8’2 y 8’5 y a una temperatura de entre 25 y 27ºC. Verter la mezcla en 4 crisoles de
cristal de 50 ml cada uno con ventilación periódica. Se preparan 3 disoluciones con
concentraciones distintas de Fenaminstrobin en 0.01, 0.0 y 1 μg/L, dejando un crisol como
control. 30 organismos con crisol. El ensayo durará 4 días y se contabilizarán los organismos
supervivientes cada 24h con el microscopio (si el organismo no se mueve durante más de 15
segundos se considera muerto). Realizaremos 3 réplicas.
4. Resultados
Calculamos la LC50 con una curva de dosis-respuesta; para ello hacemos la media de los
resultados y representamos el % de la Mortalidad respecto del logaritmo de la concentración
del compuesto.
LC50=104.2553=18001.1396 μg/L
PRÁCTICA 6. (Texto 2)
Se trata de un diagrama que parte de “todos los químicos” y los va desglosando según el
concepto de TTC. Se compara la exposición estimada (EE) con el primer nivel del umbral de
preocupación toxicológica (TTC).
Test
1 b
2 a
3 b
4 a
5 a
6 c
7 a
8 b
9 d
10 b