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2015/16 28/2/2016
TOXICOLOGÍA
TEMA 1. Toxicología
Origen y evolución histórica. Tóxico. Concepto y división de la toxicología.
Aspectos clínicos, ambientales, alimentarios, económicos y forenses de la
Toxicología. Concepto toxicidad y tolerancia. Relación dosis-respuesta.
BIBLIOGRAFÍA
RECOMENDADA
• Repetto, M y Repetto, G. 2009. Toxicología
Fundamental. 4ª edición. Díaz de Santos, Madrid.
TOXICOLOGÍA
Ciencia que estudia los tóxicos o venenos
TÓXICO
Sustancia química, biológica o fenómeno físico que
puesta en contacto con un organismo es capaz de producir
algún efecto nocivo (orgánico, genético, molecular,
funcional, celular o bioquímico) sobre él o sobre los
equilibrios dinámicos que sustentan la vida de ese
organismo, como consecuencia de lo cual se menoscaba
su salud pudiendo provocar incluso la muerte.
TOXICOLOGÍA GENERAL
Sustancias Químicas. Panorama General
TOXICOLOGÍA GENERAL
Sustancias Químicas. Panorama General
CLASIFICACIÓN DE LA TOXICOLOGÍA
Toxicología General
Toxicología Sistemática
Toxicología Sistémica
] Toxicología del sistema nervioso. NEUROTOXICOLOGÍA
] Toxicología del hígado. HEPATOTOXICOLOGÍA
] Toxicología de los riñones. NEFROTOXICOLOGÍA
] Toxicología de la sangre. HEMATOTOXICOLOGÍA
] Toxicología de la piel. DERMOTOXICOLOGÍA
] Toxicología del sistema inmune. INMUNOTOXICOLOGÍA
] Toxicología del corazón. CARDIOTOXICOLOGÍA
] Toxicología del comportamiento.
] Toxicología del sistema reproductor (masculino y femenino)
] etc.
Dr. Antonio J. García Fernández 10
PATOLOGÍA ZOOLOGÍA
BOTÁNICA INMUNOLOGÍA FISIOLOGÍA FARMACOLOGÍA
QUÍMICA GENÉTICA
BIOLOGÍA MEDICINA LEGAL
TOXICOLOGÍA
ANALÍTICA EXPERIMENTAL GENERAL
CLÍNICA
TOXICOLOGÍA REGULADORA
ESTABLECIMIENTO DEL RIESGO
b. Orgánicas
Hidrocarburos Fenoles
Hidrocarburos halogenados Aminas y amidas
Alcoholes Compuestos azufrados
Alcoholes halogenados Alcaloides
Aldehidos y cetonas Compuestos nitro
Ácidos orgánicos Proteinas
Ésteres de ácidos orgánicos Glucósidos
Dr. Antonio J. García Fernández 13
◆ Tóxicos extractivos
➨ En medio ácido
➨ En medio alcalino
◆ Metales y metaloides
TOLERANCIA
Estado de disminución de la sensibilidad al efecto tóxico esperado de una
sustancia como resultado de una exposición previa a ella o a otra de estructura
química similar
Mecanismos:
Muchos
Individuos Individuos
individuos
Número de
pocos
Ligera Respuesta a la MISMA dosis Extrema
Dr. Antonio J. García Fernández 20
Población Típica
La “Toxicogenómica”
ofrece la posibilidad de
identificar y proteger
subpoblaciones
predispuestas a
padecer intoxicaciones
ind Iden
ivi tific
d ar
d uo Menos
se ifere s co sensible
ns n
Identifica población con respuesta “normal” ibi nte
qu l
ím idad
ica
Más
sensible
ACCIÓN TÓXICA
FASE DE
EXPOSICIÓN FASE
TOXICOCINÉTICA FASE
TOXICODINAMIA
Absorción
Dosis
Distribución Interacción
RIESGO desintegrada, Tóxico Efecto
Metabolismo Tóxico-
(Dosis) disuelta o libre nocivo
Acumulación -organismo
dispersa
Eliminación
EFECTOS TÓXICOS
LOCALES: Ej. quemadura por ácido clorhídrico
GLOSARIO DE TÉRMINOS
TOXICOLÓGICOS (Repetto*)
• Absorción • Efecto Crítico • Efecto subcrónico
• Activación metabólica • Desintoxicación • Epigenético
• Acumulación • Destoxicación • Exposición
• Agudo • Diana biológica • Hormesis
• Agente alquilante • Dosis • Intoxicación
• Antídoto • Dosis efectiva • In vitro e in vivo
• Antimetabolito • Dosis Letal Media • Margen de exposición
• Apoptosis • Dosis Letal Mínima • Máxima concentración
• Biodisponibilidad • Dosis Máxima Tolerable admisible
• Carcinógeno • Dosis Tóxica • Muestra
• Cocarcinógeno • Efecto latente • Mutagénesis
• Concentración • Efecto poblacional • NOEL
• Concentración Efectiva • Efecto retardado • Peligro
• Concentración Letal • Efecto sistémico • Población en riesgo
• Concentración Letal Mínima • Efecto subagudo
• Concentración Media • Efecto subclínico
Ponderada en el Tiempo
Dr. Antonio J. García Fernández 25
*Toxicología Fundamental
GLOSARIO DE TÉRMINOS
TOXICOLÓGICOS (Repetto*)
• Polimorfismo (genético) • Toxicometría
• Población • Toxicovigilancia
• Receptor Riesgo • Toxificación
• Riesgo adicional • Toxina
• Riesgo admisible • Tumor
• Seguridad • Valores guía
• Seguridad química • Veneno
• Síndrome • Vida media
• Sistémico • Xenobiótico
• Techo, valor límite umbral • Índices biológicos de
• Toxicidad exposición (IBE)
• Toxicidad aguda • Ingesta Diaria Admisible
• Toxicidad crónica • Índice de Calidad
• Toxicidad subcrónica Ambiental
TOXICOLOGÍA
TEMA 2. Toxicocinética I
Exposición a tóxicos: Cronología de la exposición: aguda, subcrónica y crónica. Vías
de entrada. Absorción de sustancias tóxicas. Distribución orgánica de tóxicos.
Exposición
❚ Puesta en contacto del tóxico con el organismo.
Clasificación de las
intoxicaciones
Según el tipo del exposición
❚ Aguda: aparición de un cuadro clínico patológico
dentro de las primeras 24 hrs. después del
contacto con un agente.
Vías de entrada
Intravascular
Inhalatoria: Alvéolos Tracto superior
Mucosa: Sublingual Vaginal Nasal Ocular
Intraperitoneal
Rectal
Intramuscular
Subcutánea
Oral
Dérmica Dr. Antonio J. García Fernández 32
FORMAS DE EXPOSICIÓN
Ambientales
Profesionales
Producto, frasco
Por error en Fórmula o componente
Dosis (de adulto a niño)
Ambientales
Profesionales
Profesionales
FORMAS DE EXPOSICIÓN
Alimento tóxico Pescado, vegetales.
FORMAS DE EXPOSICIÓN
Homicidios
Suicidios – abortos Alcohol,
Toxicofilias, dependencia Cannabis, opio,
anfetaminas,
LSD, solventes.
VOLUNTARIAS
Doping
Envenenamientos de animales
EXPOSICIÓN
E = C x CR x EFD x 1
PC AT
Premisas:
- CR x EFD= 2 L/d de agua
- C = 1 ug/L Tricloroetano
-Absorción completa
-PC= peso corporal medio de un adulto (♂) 70 kg
-AT = 1 día
E = C x CR x EFD x 1
PC AT
Exposición
1 ug/L x 2 L/día/adulto (♂)
= 2 ug/día/70 kg
= 0.0286 ug/kg de peso/día
Dr. Antonio J. García Fernández 41
Exterior
Membrana: PIEL Respiratoria
MUCOSA Digestiva
Fluido intersticial Ocular
Membrana CAPILAR
PLASMA
Membrana CAPILAR
Fluido intersticial
Membrana CELULAR
Fluido intracelular
Procesos de tránsito
Dr. Antonio J. García Fernández 42
NO Ionizada
Sustancia Sustancia
Ionizada LIPOSOLUBLE HIDROSOLUBLE
Dr. Antonio J. García Fernández 44
Inhalación de partículas
• Tamaño partículas
laringe
• Nasofaríngea ⇒ > 5 µm Ø
traquea
Bronquio
primario
Bronquiolo
Absorción digestiva
Absorción gastrointestinal
pH .. pH
Píloro .
bajo .. alto
.. ÁCIDOS
Estómago .
..
..
.
pH 1-3.5 ..
..
.
Duodeno BASES ..
pH 5-6 ..
.
..
Yeyuno ..
.
Intestino ..
..
.
LUZ
Grueso
pH 7-8 GASTROINTESTINAL
Ileon
NO Ionizada
pH 8
Ionizada
Dr. Antonio J. García Fernández 49
Absorción cutánea
Absorción Distribución
Distribución
Formas de distribución
Acumulación selectiva de
los tóxicos
Organoclorados y Tejido
solventes polares nervioso y adiposo
Mercurio Riñón
Dr. Antonio J. García Fernández 57
Barrera hematoencefálica
Organofosforados y Cloroformo
organoclorados
Mercurio
Monoxido de carbono
Arsénico
Tetraetilo de plomo
Tetracloruro
Organomercuriales de carbono
Dr. Antonio J. García Fernández 59
Placenta Grasas
DDT Insecticidas
Tricloroetileno organoclorados
(Lic. Veterinaria)
TOXICOLOGÍA
Metabolismo o
biotransformación de
sustancias tóxicas
BIOACTIVACIÓN
DESTOXICACIÓN BIOTOXICACIÓN
SÍNTESIS LETAL
Ejemplos de biotoxicación
Sust. original Metabolito Lugar Efecto
Aflatoxina B1 Aflatox. 23-óxido Hígado Cáncer
hepático
Amigdalina Mandelonitrilo Flora intest. Hipoxia
celular
Tetracl. de C. Triclorometano Hígado Necrosis
hepática
Cicasina Metilazoximetanol Flora intest. Tumor hepático
CH3-CH2- S CH3-CH2- O
O O
P P
CH3-CH2- O NO CH3-CH2- O NO
O 2 O 2
PARATIÓN PARAOXÓN
REACCIONES DE
HIDRÓLISIS
H2 O
R – C – C – O – R’ R – C – C – OH + HO – R’
O Esterasa O
❁ Hidrólisis de ésteres
❁ Hidrólisis de amidas
H2 O
R – C – C – N – R’ R – C – C – OH + H2N – R’
O Amidasa O
OXIDACIÓN
Hepatocito (R.E.)
SUSTRATOS:
Alcoholes
Aldehídos
Ácidos orgánicos
Comp. Cadenas hidrocarbonadas ramificadas
Aminas orgánicas
OXIDACIONES MICROSOMALES
Oxidación alifática de cadenas laterales
Hidroxilación aromática
Epoxidación
Desaminación oxidativa
N, O, S - dealquilación
Dealquilación de metaloalcanos
N - oxidación
N - hidroxilación
Sulfoxidación
Desulfuración
Deshalogenación oxidativa
OXIDACIONES NO MICROSOMALES
REDUCCIONES MICROSOMALES
✿ Nitrorreducción
✿ Azorreducción
✿ Deshalogenación reductora
REDUCCIONES NO MICROSOMALES
➲ Reducción de aldehidos
REACCIONES DE CONJUGACIÓN
REACCIONES DE CONJUGACIÓN
Eliminación pulmonar
Eliminación renal
ALTO
Para compuestos ácidos
BAJO
ALTO
Para compuestos básicos
BAJO
Eliminación pulmonar
MODELOS TOXICOCINÉTICOS
Modelo monocompartimental:
Un solo compartimiento
No afinidad por tejido
Distribución instantánea por todo
Modelo multicompartimentales:
Distribución no homogénea y lenta
Concentración en tejidos
Un compartimiento central y uno o más
compartimentos periféricos.
MODELOS TOXICOCINÉTICOS
Compartimentos (criterios):
- El riego sanguíneo
MODELOS TOXICOCINÉTICOS
En la práctica:
Sangre
Vísceras muy irrigados
Tejido adiposo
Hueso, pelos y uñas
MODELOS TOXICOCINÉTICOS
BICOMPARTIMENTAL
CENTRAL PERIFÉRICO
Digestivo Adiposo
Pulmonar Muscular
Renal Cutáneo
Encéfalo
Corazón
Glándulas secreción interna
TOXICOLOGÍA (Veterinaria)
TEMA 4. Toxicodinamia.
Definición. Interacción tóxico-biomolécula. Mecanismos de
acción tóxica.
TOXICODINAMIA
Estudia la interacción entre las moléculas del tóxico
y las moléculas efectoras (receptores) del organismo
gracias a la cual se produce la acción tóxica
Mecanismos de acción
Inespecíficos Específicos
Mecanismos de acción
Reacciones de hipersensibilización
Toxicidad tisular
Dr. Antonio J. García Fernández 95
Mecanismos de acción I
Interferencia con sistemas enzimáticos
• Carboxihemoglobina CO-Hb
INTERFERENCIAS EN FUNCIONES
GENERALES DE LA CÉLULA
Aspectos importantes:
REACCIONES DE
HIPERSENSIBILIZACIÓN
TOXICIDAD TISULAR
Reacción al tóxico que se manifiesta en el tejido con
formación de grandes vacuolas, acumulación de grasa y
necrosis. En hígado y riñón.
Ej: Cloroformo, tetracloruro deFernández
Dr. Antonio J. García carbono, etc 102
- Estereoisómeros
- Elementos tiolprivos
- Compuestos metalprivos
B. Aumento de actividad
1. Actividad de protoenzimas.
- Hidrólisis (proteasas, fosfatasas, fosfolipasas)
- Fosforilación (fosforilasas, quinasas)
2. Activación alostérica.
- Cambio conformacional por:
Iones metálicos
Grupos tioles
Radiaciones
- De proteínas reguladoras.
(Ca-calmodulina)
- Por mediadores.
Ca++, AMP-c, GMP-c, Prot-G sobre:
quinasas, fosfolipasas, etc.
3. Inducción enzimática
Para el diagnóstico:
Para el tratamiento:
Cuando la inhibición enzimática es
altamente específica y gran parte de
los efectos tóxicos se derivan de ese
tipo de lesión molecular, es posible
tratar y revertir esas alteraciones,
desapareciendo los efectos clínicos.
TEMA 5
Mutagénesis
Carcinogénesis
Teratogénesis
CARCINÓGENO
1902- Radiación X
CARCINOGÉNESIS EN 2 PASOS
CARCINÓGENO
1.- CONVERSIÓN TUMORAL activación metabólica
Intermediarios
electrofílicos
INICIACIÓN
reparación ADN
Célula normal
Unión al ADN
formación aductos
apoptosis
2.- DESARROLLO Célula transformada
NEOPLÁSICO
Proliferación celular
PROMOCIÓN
CLON PRENEOPLÁSICO
PROGRESIÓN
NEOPLASMA MALIGNO
AGENTES CARCINOGÉNICOS
• Agentes biológicos
Genotóxicos Epigenéticos
♠ Son químicamente reactivos ♠ No precisan transformación
o requieren de activación metabólica
metabólica para producir ♠ Requieren exposición prolon-
intermediarios reactivos. gada y dosis repetidas.
♠ Reaccionan covalentemente ♠ Los daños producidos son re-
con macromoléculas de la versibles.
célula como el ADN, ARN
y proteínas. ♠ Tienen umbral tóxico
♠ Producen daños irreversi- ♠ La respuesta está ligada a su
bles tras una exposición interacción con receptores ce-
única. lulares que activan mecanismos
♠ Son agentes mutagénicos de división del ADN
tanto en tests bacterianos
como de células de mamífero.
Dr. Antonio J. García Fernández 119
Agentes Genotóxicos
Carcinógenos Genotóxicos –
mutágenos
Pro-carcinógenos
carcinógenos directos tienen que ser modificados
(no precisan modificación) por enzimas celulares
Pro-carcinógenos
Epoxidación en dos pasos
12 1
11 2
10 Epóxido
9 3
P450 1A1 hidrolasa
8 4
HO
7 6 5 O
OH
Benzo[a]pireno (±) B[a]P-trans-7,8-diol
(B[a]P)
P450 1A1
O
FORMACIÓN ADUCTOS
CON ADN HO
OH
B[a]P-trans-7,8-diol-
9,10-epoxido
Dr. Antonio J. García Fernández 121
Pro-carcinógenos
Aflatoxina B1
O O O O
O CYP450
O
O
O O OCH3 O O OCH3
Aflatoxin B 1 Aflatoxin B1-2,3-epoxido
Aminas aromáticas
O H O
NAT
H2N NH 2 C N C N
CH3
H3 C OH
Benzidina N-hidroxi diacetilbenzidina
O H
C N N+
H3 C H
Dr. Antonio J. García Fernández 122
N-Acetil benzidina ion nitrenio
Carcinógenos Epigenéticos
Son aquellas moléculas que aun causando efectos carcinogénicos no han
demostrado ninguna evidencia de ser reactivos de DNA.
1.- Son activadores de la replicación celular, facilitando la síntesis de DNA y
la mitosis.
2.- Su capacidad carcinogénica se desarrolla por administración o exposición
continuada de los mismos y a dosis elevadas.
3.- No producen carcinogénesis transplacentaria
CARCINÓGENOS EPIGENÉTICOS
Hormonas estrogénicas
CH3 OH
C CH CH3 OH
H2C
CH2
HO HO H3C
etinil-estradiol dietilestilbestrol (DES)
OMe H3C CH OH
Cl
C CH
MeO HO H 3
OMe
clorotrianiseno dienestrol
CARCINÓGENOS EPIGENÉTICOS
Dioxinas y PCBs
Cl O Cl Cl Cl
Cl O Cl Cl O Cl
2,3,7,8 tetraclorodibenzodioxina 2,3,7,8 tetraclorodibenzofurano
(TCDD) (TCDF)
Miscelánea
OCO(CH2)12CH3
H 3C
OCOCH3
CH3
HO etanol
CH3
H 3C
=
O CH2OH
– A) puede ser reparada por los mecanismos de reparación celular o por los
mecanismos de recambio intracelular.
Clasificación de los
carcinógenos químicos
3ª.- Para los cancerígenos tipo A1 con TLV y para los de tipo A2 la
exposición de los trabajadores por cualquier vía de penetración
debe ser cuidadosamente controlada a niveles por debajo del valor
del TLV.
TERATOLOGÍA
Ciencia que estudia las causas que originan alteraciones
estructurales y/o funcionales durante el desarrollo
prenatal, así como del estudio de dichas alteraciones.
CONCEPTOS
Malformación congénita: Alteraciones morfológicas en el neonato
CONCEPTOS
Principios generales de la
Teratología
Preimplantación
Organogénesis
Factores genéticos
Período fetal
Periodos críticos
Mecanismos de iniciación
Consecuencias del desarrollo anormal
Acceso al embrión y al feto Muerte
Relación dosis-respuesta Malformación
Retraso en crecimiento
Desorden funcional
Riesgo
Dr. Antonio J. García Fernández teratogénico
138
Relación Dosis-Respuesta
MODELOS
A.
% daños camada
C.
% daños camada
Dosis
B.
% daños camada
Dosis
Malformaciones
Retraso crecimiento
Dr. Antonio J. García Fernández Embrioletalidad
139
Dosis
TEMA 6
TOXICOLOGÍA
EXPERIMENTAL
Principios generales para los estudios de
toxicidad. Ensayos de toxicidad: aguda, crónica y remota.
Toxicidad "in vitro". Transformación "probit" en toxicometría
y cálculo de la DL y DL50.
Objeto
conclusiones.
ENSAYOS TOXICOLÓGICOS
Especiales: Reproducción
Fertilidad
Inducción de mutaciones
Efectos cancerígenos
Teratogenicidad
Sensibilidad cutánea, ocular, etc.
Hemólisis
Comportamiento
ENSAYOS TOXICOLÓGICOS
Protocolo de ensayo
¿Consanguíneos?
¿Estériles?
ENSAYOS DE MUTAGÉNESIS
ENSAYOS DE MUTAGÉNESIS
ENSAYO DE TERATOGÉNESIS
ENSAYO DE REPRODUCCIÓN
FERTILIDAD
GESTACIÓN
DESCENDENCIA
FERTILIDAD
• Alteración en el funcionamiento de las gónadas.
• Alteración en el ciclo del estro.
• Alteración del comportamiento en el
apareamiento.
• Alteración en el índice de concepción.
• Alteración en los primeros estadios de la
gestación: implantación del óvulo fecundado
GESTACIÓN
• Desarrollo del feto.
• Mayor o menor grado de normalidad,
incluyendo efectos teratógenos y
mutágenos.
• Mortalidad intrauterina.
DESCENDENCIA
Efectos sobre la madre:
– Lactación.
– Aceptación de la progenie.
ENSAYO DE REPRODUCCIÓN
• Alternativas:
– TG-420. No requiere la muerte de los animales.
– TG-423. El nº de muertes no es mayor de 3.
– TG-425. El nº de muertes no es mayor de 3.
Efectos sobre
sistemas bióticos
Efectos sobre la
salud
• 6. Métodos in vitro
Órganos, explantes, cultivos primarios, líneas celulares, sistemas
libres de células, etc
• 7. Otros
Estudios en humanos (voluntarios, epidemiológicos, etc). Nuevos
modelos enseñanza Dr. Antonio J. García Fernández 184
Ø Conservación de recursos
l Farmacológicos:
¡ Screening funcional y toxicológico
¡ Transporte celular
NUEVAS MOLÉCULAS:
¡ Toxicidad etapa preclínica
¡ Mecanismos de acción
¡ Muerte celular
Vacunas, antineoplásicos, antibióticos, drogas, …
l Inmunológicos
¡ Caracterización de antígenos bacterianos y virales
¡ Evaluación de la idoneidad antígenos para preparar
vacunas
TEMA 7
BASES PARA LA EVALUACIÓN DEL RIESGO
TOXICOLÓGICO Y ECOTOXICOLÓGICO:
REACH. DIANAS TOXICOLÓGICAS.
ADMINISTRACIÓN DEL RIESGO. ENSAYOS
TOXICOLÓGICOS. MÉTODOS OFICIALES
PROTECCIÓN
RIESGOS PRESENCIA
CONTACTO
INTERACCIÓN
¿CUÁNTO? EFECTO
EXPOSICIÓN
TOXICOCINÉTICA
EVALUAR TOXICODINAMIA
EVALUACIÓN DEL
RIESGO
Trabajadores
Consumidores
Población en general
IDENTIFICACIÓN
DEL PELIGRO
EVALUACIÓN DE EVALUACIÓN DE
LA EXPOSICIÓN EFECTOS
CARACTERIZACIÓN Estimación
DEL RIESGO de la Dosis-
Respuesta
NO SÍ 1. Compuestos
PEC/PNEC > 1
químicos
nuevos
No necesidad de
intervención NO
¿más información?
SÍ
4- Propiedades físicas
5- Propiedades químicas
6- Propiedades toxicológicas
7- Propiedades ecotoxicológicas
6- Propiedades toxicológicas
c. Ensayo de sensibilización
7- Propiedades ecotoxicológicas
d. Ensayo de hidrólisis
LC50 en peces 68
EC50 en Daphnia 55
EC50 en algas 46
EC50 en microorganismos 57
NOEC en peces 14
NOEC en Daphnia 18
LC50 en plantas 32
Toxicidad reproductiva 26
Dr. Antonio J. García Fernández 205
Incrementar la transparencia
Integración internacional
EVALUACIÓN DE LA EVALUACIÓN DE
EXPOSICIÓN EFECTOS
CARACTERIZACIÓN DEL
RIESGO
CLASIFICACIÓN DEL
RIESGO
ANÁLISIS BENEFICIO/
RIESGO
REDUCCIÓN DEL
RIESGO
MONITORIZACIÓN
Dr. Antonio
QUÍMICAJ. García Fernández
Y BIOLÓGICA 208
Los microorganismos
volatilización
Suelos agrícolas
pastos
aplicación lixiviación
aplicación
Planta de
tratamiento de
dilución aguas
residuales Aguas
Aguas subterráneas
superficiales
Dr. Antonio J. García Fernández 210
Estudios de campo:
Evaluación de la
- Exposiciones
exposición
- Efectos tóxicos Evaluación de las
opciones reguladoras
Metodología de
extrapolación: Evaluación dosis-
- De alta a baja dosis respuesta Decisiones
- Interespecies
Acciones
Caracterización del
riesgo
Dr. Antonio J. García Fernández 211
PELIGRO
RIESGO
1. Identificación de peligros
ALARP
“as low as reasonably practicable”
“tan bajo como razonablemente factible”
Riesgo intolerable
Riesgo aceptable
EXPOSICIÓN
ENSAYOS ECOTOXICOLÓGICOS EN
EVALUACIÓN DEL RIESGO EN ECOSISTEMAS
TERRESTRES
Para abejas
- Ensayo de toxicidad aguda para abejas
- Ensayo de alimentación de la progenie de abejas
- Ensayos de nivel superior. Ensayos más refinados