MICROBIOLOGÍA DEL SUELO, AIRE Y TECNICAS DE

BIOREMEDIACION

CU SOIL, AIR MICROBIOLOGY AND BIOREMEDIATION

TECHNIQUES

Leonela Elena Cogollo Gutiérrez 2019117028

Resumen
Se determinó la diversidad micróbiologica presente en una muestra de suelo, se evaluó la
capacidad de degradación de contaminantes xenobioticos de algunas bacterias presentes en una
muestra de suelo y se identificó la diversidad micróbiologica del aire de un restaurante de
Aracataca, Magdalena. Se realizaron tres procesos diferentes, el primero se inició con la toma y
preparación de muestras, posteriormente la identificación de comunidades heterótrofas
presentes y finalmente la identificación de grupos microbianos presentes en el suelo. El segundo
proceso consistió en la aplicación de técnicas de biorremediación de un suelo previamente
contaminado son baygon en diferentes concentraciones (1%, 5%, 10%). El último proceso inicio
con el establecimiento de puntos de muestreo, posteriormente la ubicación de placas Petri con
medios de cultivo adecuados y finalmente el conteo de UFC/área/tiempo. Se determinó la
presencia de hongos y bacterias en la muestra de suelo, se estableció que las Pseudomonas
aeruginosa tienen la capacidad de degradar el entre el 60% y 90% de baygon presente en la muestra de suelo. Se
identificó la presencia de bacterias como: y hongos en el ambiente del restaurante evaluado.
Palabras claves: compuestos xenobioticos, Biorremediación,

ABSTRACT
The microbiological diversity present in a soil sample was determined, the degradation
capacity of xenobiotic contaminants of some bacteria present in a soil sample was
evaluated, and the microbiological diversity of the air from a restaurant in Aracataca,
Magdalena was identified. Three different processes were carried out, the first one began
with the taking and preparation of samples, then the identification of present heterotrophic
communities and finally the identification of microbial groups present in the soil. The
second process consisted in the application of bioremediation techniques to previously
contaminated soil with baygon in different concentrations (1%, 5%, 10%). The last process
began with the establishment of sampling points, then the location of Petri dishes with
adequate culture media and finally the counting of CFU / area / time. The presence of fungi
and bacteria in the soil sample was determined, it was established that Pseudomonas
aeruginos have the ability to degrade between 60% and 90% of baygon present in the soil
sample. The presence of bacteria such as: and fungi was identified in the environment of
the restaurant evaluated.
Keywords: xenobiotic compounds, Bioremedia
 INTRODUCCIÓN
El suelo y el aire hacen parte de los principales
medios de desarrollo de los microorganismos, en el
suelo, por ejemplo, existe una alta actividad
microbiana sobre todo en las capas de la superficie
ricas en materia orgánica (el suelo superficial 0-20
cm); esto ocurre debido a que entre las principales
funciones de estos microorganismos se encuentran la
de descomposición y mineralización de materia
orgánica ya sea de origen vegetal o animal, el
incremento en la actividad de raíces de las plantas, la
protección al ataque de fitopatógenos y a producción
del suelo[1]..
La presencia de microorganismos en el suelo puede
considerarse un indicador de calidad, lo que hace sea
necesario la estimación de UFC/g, siendo la técnica
más utilizada la de recuento directo en placa, esta
puede ser superficial o profunda.
Además, la presencia de algunos microorganismos
específicos en el suelo hace posible la existencia y el
funcionamiento de los ciclos biogeoquímicos,
especialmente del ciclo del nitrógeno y del carbono
que se encuentran orientados sobre todo a los
procesos de fijación, mineralización y degradación de
suelo. Los grupos funcionales de microorganismos
presentes en estos dos ciclos biogeoquímicos son:
Microorganismos amilolítico, Microorganismos
celulíticos, fijadores de nitrógeno, proteolíticos,
amonizantes y desnitrificantes.
Una de las aplicaciones de la microbiología del suelo
en la ingeniería ambiental está relacionada con las
problemáticas de contaminación dada por la
presencia de compuestos xenobicos (compuestos
químicos sintéticos altamente tóxicos) en el suelo que
alteran los procesos y ciclos naturales, este trae
consigo una alta degradación ambiental y a su vez un
impacto económico y social. Este gran conflicto hace
necesario buscar soluciones sostenibles. Basados en
el conocimiento de microbiología del suelo, es posible
usar técnicas de biorremediación estas consisten en
estimular las capacidades degradativas de los
microorganismos nativos con el fin de mineralizar los
contaminantes o convertirlos en compuestos menos
tóxicos.
Las principales técnicas de biorremediación son: La
atenuación natural: consiste en la degradación de
compuestos con microorganismos autóctonos sin
variar los parámetros ambientales; bioestimulación:
consiste en incorporación de nutrientes para acelerar
los procesos y modificación de parámetros y
bioaumentacion: consiste en la introducción de
organismos externos y adecuación de parámetros
ambientales.
Por otro lado, el aire también es un medio que cuenta
con una alta presencia de microorganismos, al igual
que en el suelo los microorganismos presentes, son
indicadores de la calidad de este, sin embargo, a
diferencia de lo que ocurre con el suelo la presencia
de microorganismos no beneficia de ningún modo, de
tal manera que entre más limpio es un área menor es
el número de microorganismos presentes en dicha
área.
Estos microorganismos se encuentran en la
atmosfera en forma de bioaerosoles, es decir, las
partículas biológicas (bacterias, micotoxinas,
esporas, virus) están inmersas en pequeñas
partículas de gas, la existencia y supervivencia de
los bioaerosoles depende de algunos factores como el
tamaño y la forma de estos, además algunas
condiciones físico-químicos como la humedad, la
temperatura, la radiación o el oxígeno. La presencia
de bioaresoles en los ambientes se ha convertido en
una problemática sobre todo para la salud pública,
debido a que estas partículas biológicas generan
muchas enfermedades e infecciones para los seres
humanos, además de ser causante del deterioro de
edificios y viviendas, el análisis microbiológico del
aire se puede hacer a través de diferentes técnicas,
entre ellas están: Método de sedimentación sobre
placas y filtración de membrana.
En cuanto a la regulación ambiental de la calidad del
aire, actualmente en Colombia no existe ninguna
normatividad legal que establezca los límites
permisibles de microorganismos en el ambientes
interiores; estos deben regirse por la Resolución 2183
de 2004 del Ministerio de la Protección Social (MPS),
en la cual se adopta el Manual de Buenas Prácticas
de Esterilización para los Prestadores de Servicios de
Salud (MPS, 2004).
En este informe se evidencia los procesos y
resultados relacionados con los laboratorios
de microbiología del suelo, biorremediacion y
microbiología del aire, cabe resaltar que los
resultados obtenidos son estimaciones
aproximadas realizadas por los estudiantes.
 MATERIALES Y MÉTODOS
Se registró la metodología utilizada a través
de 3 capítulos:
CAPITULO I. Microbiología del suelo.
1. Toma de muestras: tomar una muestra
representativa del suelo (determinar el tamaño y
puntos de muestreo a través de métodos
estadísticos) Extraer con una pala o barreno
bloque de suelo entre 0-40cm (5 réplicas por
cada punto) Llevar el suelo a laboratorio, analizar
la estructura del suelo, en caso que el suelo sea
compacto debe ser triturado y tamizado
2. Realizar 5 diluciones seriadas
1 2 3 4 5
10 ,10 , 10 ,10 ,10 (Agregar 10 gr de la
muestra de suelo a 90 ml de agua destilada y
disminuir la concentración
3. Realizar el recuento directo en placa para
determinar las comunidades heterótrofas: esto se
hace depositando 1ml de cada dilución en 5
placas previamente rotuladas, agregar 20 mm de
medio de cultivo fundido a (45°-50°), girar en
sentido de las manecillas del reloj y en sentido
contrario para disolver la muestra en el medio de
cultivo (realizar este procedimiento para hongos y
bacterias)
4. Llevar las placas a la incubadora y dejar las de
bacterias a 35° por 24 horas, y las placas de
hongos 25° durante 72 horas.
5. Hacer el recuento de placas y dejar las que
contengan entre 30-300 colonias, promediar el
número de colonias y multiplicar por la dilución
mayor
6. Aislamiento de grupos funcionales microbianos
presentes en el suelo. aislamiento de bacterias
fijadoras de nitrógeno: a partir de las diluciones
realizadas a la muestra de suelo, tome 0,1 mL de
cada una y llévelos a las placas de Petri que
contienen agar Ashby manitol o Agar sal manitol
rojo común de fenol
7. Con ayuda de asas de Digralsky, realice la
siembra en superficie. incubar a 28°C durante 7
días, determinar las relaciones de los grupos
funcionales por el método número más probable
(Realizar el proceso con cada muestra). (Usar la
tabla Índice de McGrady para calcular el NMP
para distintas combinaciones de resultados
positivos)
CAPITULO II. Biorremediación de compuestos
xenobioticos.
1. Tomar tres muestras de suelo y contaminarlo
con baygon (al 1%, 5%, 10%) a temperatura
ambiente, con un periodo de incubación de 10
días.
2. Realizar diluciones seriadas (10−1 , 10−2 ,10−3 ¿
con 90ml de agua destilada y 10 g de suelo,
tome 0,1 mL de cada una y llévelos a las placas
de Petri que contienen MMS extender con el
asa, incubar a 38°C durante 8 días (realizar
este proceso con cada muestra de suelo)
3. Identificar qué tipo de bacterias crecieron
(bacterias, hongos filamentosos), aislar las
colonias en agar nutritivo, purificar las sepas,
someter las sepas tolerantes a medio liquido
con una concentración de contaminante.
4. Hacer análisis químico para comprobar la
efectividad degradaría del contaminante
CAPITULO III. Microbiología del aire
El análisis microbiológico del aire puede ser realizado
a través de dos técnicas:
1. Sedimentación de placas estáticas: se
fundamenta en que por acción de la gravedad los
microorganismos están siendo arrastrados
constantemente y caen en diversas plataformas
estables (piso, mesas)
1.1 Se establecen puntos de muestreos de acuerdo
al área, tamaño y la forma del lugar donde se
realiza el análisis.
1.2 En cada punto de muestreo se ubican placas
Petri con diferentes medios de cultivo selectivos,
de acuerdo al tipo de microorganismos
necesarios.
1.3 Contar las UFC de cada microorganismo en un
periodo de tiempo determinado.
(UFC/Área/tiempo)
1.4 Incubar durante 24 horas a 25° (hongos) 35°
(bacterias)
 Desnitrificantes (3,3,3)
2. Filtración por membrana: Grafica 2: Distribución de grupos funcionales
2.1 Filtrar un volumen de aire determinado, el presentes en la muestra de suelo.
equipo de filtración requerido es el impactador
de cascada , este retiene las partículas 14000
superiores a (0,45 μm. 12000
2.2 Colocar los filtros en placas Petri con medios de 10000

NMP/ GR DE SUELO
8000
cultivo selectivo, incubar por 48 horas a 25°
6000
(hongos), 35° durante 24 horas (bacterias). 4000
Calcular las UFC/área/tiempo. 2000
2.3 Para determinar la calidad del aire, es posible 0
usar los valores permisibles de microorganismos s s s s s
co co co te te
il ti il ti liti za
n an
que pueden estar presentes en un área o elu ilo ni
c
o te c am o itrifi
determinada de acuerdo al manual de buenas pr am sn
prácticas de manufactura OMS 823 (OMS, 1992) de
GRUPOS FUNCIONALES

RESULTADOS

CAPITULO I. Microbiología del suelo

Grafica 1: Comunidades heterótrofas presentes en

la muestra de suelo.

2
1.8
UFC/ GR DE SUELO

1.6 CAPITULO II. Biorremediación de

1.4
compuestos xenobioticos.
1.2
1 (Sedimentación de placas estáticas) Luego de los 8
0.8
0.6 días de incubación se logró aislar unas cepas
0.4 bacterianas del suelo contaminado con baygon, se
0.2 pudo determinar que las bacterias cultivadas
0 pertenecen al grupo Enterobacteriaceae especie
proteoliticos celuliticos
Pseudomonas aeruginosa. Luego de realizar el
proceso de bioestimulacion con agar . se obtuvo los
siguientes porcentajes de remoción

Tabla 2: tabla de % de concentración de

Tabla 1: contaminante luego del proceso de
biorremediación.
Microorganismos series

Proteolíticos (0,0,0) Bacteria: Pseudomonas aeruginosa

(Bioestimulación)
Celulíticos (3,1,1) Tipo de suelo % de remoción
Amilolíticos (0,0,0) Contaminada al 1% 98%
Contaminada al 5% 80%
Amonizantes (3,2,1)
Contaminada al 10% 62%
CAPITULO III. Microbiología del aire Grafica 4: Grupos fúngicos hallados en el restaurante
Se buscaba determinar la calidad
microbiológica del aire dentro de un 2000
restaurante, en el municipio de Aracataca. 1800

UFC/ GR DE SUELO
Luego de llevar a cabo la metodología 1600
1400
planteada y realizar el recuento de bacterias,
1200
se hallaron los siguientes grupos 1000
bacterianos: Streptococcus Staphylococcus, 800
Pseudomonas, y coliformes totales Y los 600
siguientes grupos fúngicos: Aspergillus y 400
200
Aeurubasidium Las concentraciones de las
0
especies es el ambiente se encuentran Aspergillus Aeurubasidium
registradas en las siguientes gráficas:

Grafica 3: Grupos Bacterianos hallados en el

restaurante.

3000
2500
UFC/m2/40min

2000
1500
DISCUSIÓN
1000
Tanto en las bacterias, como en los hongos
500 se encontró que el crecimiento ideal se dio en
0 las diluciones: -2, -3, -4, de bacterias.
Coliformes totales
GRUPOS BACTERIANOS En el suelo no se encontraron
microorganismos proteolíticos (0 0 0); La
proteólisis es un proceso importante que
produce aminoácidos utilizables como fuente
de energía [2]. A diferencia de los proteolíticos
si se pudo determinar la presencia de
microorganismos celulíticos (3 1 1); los
microorganismo degradadores de celulosa
incluyen hongos y bacterias, aerobios y
anaerobios, mesofílicos y termofílicos que
ocupan una gran variedad de hábitats.

En cuanto a la determinación de
microorganismos amilolíticos, amonizantes y
desnitrificantes. Las amilasas son enzimas
que hidrolizan moléculas de almidón dando
diversos productos incluyendo dextrinas y
progresivamente pequeños polímeros
compuestos por unidades de glucosa [5]. En el
suelo no se encontraron microorganismos
} amilolíticos (0 0 0); lo que indica que no hay
microorganismos que degraden el almidón [6].
Por otro lado, se observó que la muestra si
contiene microorganismos amonizantes (3 2
1) así como también microorganismos
desnitrificantes (3 3 3); los microorganismos
que intervienen en la desnitrificación son
todos aquellos que con su actividad
producen perdidas de nitrógeno,
Prácticamente todos
Los desnitrificantes y nitrato amonizantes
tienen la capacidad de reducir el NO3- a
NO2- y a su vez continuar metabolizando el
NO2-.
II. se obtuvo que la bacteria fue capaz de degradar el
98% del material contamínate del suelo
contaminaminado al 1%, el 80% del material
contaminante del suelo contaminado al 5% y el 62%
del suelo contaminado al 10%, estos resultados
evidencian que la bacteria Pseudomonas aeruginosa
Tiene una alta capacidad para degradar compuestos
tóxicos, en este caso Baygon. De acuerdo con
estudios realizados por María Kopytko, Sandra
Correa & Martha Jhoana Estévez (2016) Quienes
evaluaron la capacidad degradativa de la bacteria
Pseudomonas aeruginosa en suelos contaminados
con pesticidas organoclorados se obtuvo que bajo
bioestimulacion esta bacteria pudo degradar cerca
del 50% del material contaminante del suelo. De
acuerdo también con Beatriz E. Jaramillo Colorado y
Adriana Bermúdez Tobón (Universidad de Cartagena
2016) Quienes evaluaron la capacidad degradativa de
esta misma bacteria pero esta vez en pesticidas
organofosforados y en sus resultados establecieron
que: “El poder degradativo de las cepas aisladas del
suelo, fue comprobado a través de la degradación de
monocrotofos. Al parecer este proceso produce
metabolitos secundarios que, aunque también son
considerados contaminantes, probablemente estos
sean degradados por la misma vía metabólica, hasta
lograr inocuidad” Esto indica que la bacteria
convierte los compuestos xenobicos en compuestos
menos tóxicos, hasta que a través del mismo proceso
pueda eliminarlo. Lo mismo ocurre con el baygon, va
disminuyendo gradualmente la presencia de este en
el suelo.
III. En el ambiente estudiado se encontraron 4
especies de bacterias, en mayor proporción esta la
bacteria Staphylococcus, en una proporción casi
equivalente se encontró Coliformes totales y
Streptococcus y en menor proporción fue hallado
Pseudonomas y dos especies de hongos
Aspergillus en mayor proporción y Aeurubasidium
en menor.
La alta presencia de Staphylococcus según ELIKA
(fundación para la seguridad agroalimentaria) es una
bacteria muy resistente en el medio ambiente y
ampliamente distribuida en la naturaleza que puede
encontrarse en el aire, agua, residuos, maquinaria y
superficies de la industria alimentaria, pero su
principal reservorio son los animales y humanos,
encontrándose en la piel, cabello, fosas nasales y
garganta.
Mientras Las especies del género Aspergillus spp. Se
aislaron con mayor frecuencia, de acuerdo con Carlos
A. Méndez Puentes, Juan G. Camacho Suárez y
Sonia Echeverry-Hernández en su informe de
Identificación de bacterias y hongos en el aire de
Neiva, Colombia, esto ocurre debido a que las
esporas de estos microorganismos son livianas y esto
permite que sean fácilmente transportadas por el
aire. En estudios de la aeromicota en ambientes
exteriores hongos del género Aspergillus spp.
Por último, microorganismos hallados en este estudio
como Aureobasidium sp. Según este mismo informe
se les relaciona con producción de toxinas
perjudiciales para el hombre y los alimentos e incluso
se encuentran asociadas a infecciones invasoras en
pacientes inmunocomprometidos.
CONCLUSIONES
Las poblaciones microbianas presente en el suelo son
muy diversas fisiológica y morfológicamente, estas se
pueden cuantificar mediante la técnica de recuento
general de bacterias y hongos, los cuales son viables
si presentan de 30 a 300 colonias, además es posible
determinar e identificar los microorganismos
amilolíticos, celulolíticos, proteolíticos, amonizantes y
desnitrificantes, con lo cual se puede estudiar más a
fondo la microflora presente en el suelo, la función
que cumplen y su relación con las plantas y otros
organismos del suelo.
El estudio microbiológico realizado en el
ambiente de
Un restaurante de Aracataca, Magdalena
determino la presencia de Staphylococcus,
Pseudomonas, Streptococcus y el grupo
coliformes totales. Los géneros fúngicos Lamenca, M. 1970. Curso de Microbiología
identificados fueron Aspergillus y de suelos. Instituto interamericano de
Aureobasidium sp. Ciencias Agrícolas de la OEA. Turrialba,
Costa Rica.
La presencia de estos microorganismos
puede estar relacionada con la alta presencia Socorro, G. Avalos,HSoto M. Microbiología
humana en el lugar, servicios de aire general de Staphylococcus aureus
acondicionado deficiente y el mal manejo de Universidad de la Ciénega del Estado de
alimentos, basados en los valores permisibles Michoacán de Ocampo, México.
es posible afirmar que la calidad del aire de
este lugar no es completamente apta y deben Kopytko, M. Correa, S. Estévez, M.
Biodegradación estimulada de los suelos
buscarse soluciones para la presencia de
contaminados con pesticidas organoclorados.
estos microorganismos.
Universidad Pontificia Bolivariana.
Piedecuesta, Km 7.0. Off. K-107.
REFERENCIAS Bucaramanga,
Colombia.
MacCance, M. & Harrigan, W. 1968. Métodos
de laboratorio en Microbiologia. Editorial Beatriz E. Jaramillo, C. Bermúdez, A. (2016)
Academia. León, España. 426 pp. Bacterias degradadoras de pesticidas
organofosforados presentes en suelos contaminado.
Luna, J. 2020. Manual de prácticas de (Universidad de Cartagena. Colombia.
laboratorio: Microbiologia general y aplicada.
1ª edición. Editorial Unimagdalena. Santa
Marta D.T.C.H., Colombia.