ANALISIS MICROBIOLOGICO DE SUELOS

Montes, Juan David1., Xiomara, Lugo2, Dayanna, Perez3

Unisangil, Facultad de Ciencias Naturales e Ingeniería
Ingeniería Ambiental
Yopal, Colombia

jmontes@unisangil.edu.co
xiomaralugo@unisangil.edu.co
dayanaperez@unisangil.edu.co

1
Ingeniería Ambiental; Juan David Montes
2
Ingeniería Ambiental; Xiomara Andrea Lugo
3
Ingeniería Ambiental; Dayanna Pérez
Resumen —El suelo tiene muchas
propiedades, las cuales benefician a la planta,
es por eso que se ha utilizado los
microorganismos ya que en el suelo suceden
diversas reacciones microbianas, encontramos
bacterias y hongos beneficos que mediante su
uso se obtiene incrementos significativos.
Palabras clave—analisis, microbiologico,
suelos, microscopio, solución.
Abstract - The soil has many properties, which
benefit the plant, that is why microorganisms
have been used since in the soil several
microbial reactions occur, we find beneficial
bacteria and fungi that through its use, significant
increases are obtained.
Keywords - analysis, microbiological, soils,
microscope, solution.
I. INTRODUCCIÓN
La utilization de los microorganismos es
considera de gran importantcia en la agricultura
ya que le genera propiedades al suelo del cual
depende mucho la planta, en el suelo suceden
diversas reaaciones por eso se utilizan estos
microorganismos los cuales propician la
busqueda de microorganismos con actividad
fisiologica especifica.
MICROBIOLOGIA DEL SUELO
La ecología microbiana trata sobre la relación de
los microorganismos con el ambiente donde
habitan. El suelo superficial (0-20cm) es el
ambiente donde ocurren la mayoría de los
procesos microbianos que influyen sobre la
nutrición de los cultivos, de los cuales se ocupa
la Microbiología Agrícola. Desde un punto de
vista ecológico, un ambiente esta constituido
por: 1) una fracción abiótica (el hábitat), y 2) una
fracción biótica (los componentes vivos). La
fracción abiótica del suelo incluye: a) partículas
minerales de diferente tamaño y composición
química, b) agua y solutos, c) gases y d)
compuestos orgánicos; mientras que la fracción
biótica incluye: a) raíces vivas de plantas, b)
fauna (detritívoros) y c) microorganismos
(descomponedores)
Los diferentes componentes del suelo no forman
una masa homogénea sino que están asociados
otorgando una estructura particular. La base de
la estructura del suelo la constituyen los
llamados agregados. Un agregado es un
conjunto de partículas minerales ligadas por
compuestos orgánicos y organismos vivos. El
tamaño de cada agregado es de
aproximadamente 2 mm. El espacio que queda
entre los agregados son los poros del suelo,
donde circulan el aire y la solución del suelo.
los microorganismos del suelo dependen de
factores ambientales tales como los nutrientes,
la humedad, el pH, aireación, temperatura y
prácticas agrícolas.
En desinfecciones severas, como las que se
realizan en cultivos bajo plástico, anulamos
muchos de estos microorganismos, que estaban
de forma natural en el suelo. Estos
microorganismos beneficiosos que se
encuentran en el suelo, son bacterias,
actinomycetes, hongos, algas y protozoarios. Un
suelo fértil es aquel que contiene una reserva
adecuada de elementos nutritivos disponibles
para la planta, o una población microbiana que
libere nutrientes que permitan un buen desarrollo
vegetal.
Cuando se quema un bosque, observamos la
importancia de todo lo que estamos diciendo, ya
que muere toda la plantación, pero muere
también el suelo de esta, por lo que tardará
mucho tiempo en recuperarse.
En la agricultura tradicional, se alternaban las
líneas de cultivo en el suelo, o bien se dejaba
descansar la tierra durante un tiempo.
Actualmente, en la agricultura intensiva, el suelo
apenas está sin cultivo, y se planta siempre en la
misma línea de terreno, por lo degradamos el
suelo rápidamente.
Por todas estas razones, se está empleado lo
que se denomina “Biofertilización”, que consiste
en aumentar el número de microorganismos de
un suelo, para de esta forma, acelerar todos los
procesos microbianos, aumentar la cantidad de
nutrientes asimilables por la planta, etc.
Una biofertilización correcta, ayuda a una
fertilización tradicional, reduciendo el uso de
energía de la planta a la hora de absorber los
distintos nutrientes, disminuye la degradación
del agroecosistema y reduce la pérdida de
nutrientes del suelo por lixividados, sobre todo
de nitrógeno.
Pero estos microorganismos actúan a la vez
como agentes de control biológico, con lo que
reducimos aquellos microorganismos
indeseables en el suelo y favorecemos los
organismos útiles para los cultivos, con lo que
aumentamos la producción de la planta.
I. OBJETIVOS
1. Realizar la cuantificación de microorgnaimos
del suelo (hongos y bacterias) mediante la
técnica de diluciones y siembra en placa.
II. PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS.
1. Por que se debe hacer diluciones seriadas a
partir de la solución de sue- lo? (ver paso 2 del
procedimiento)
RTA: Se deben hacer diluciones seriadas porque
se
necesita reducir la concentración de
microorganismos presentes en la muestra para
lograr cuantificar el número de colonias de
bacterias y hongos.
2. Explique cual es el propósito de cultivar
muestra de diluciones de suelo próximas en
los medios de cultivo? (ver paso 3 del
procedimiento)
RTA: El propósito es determinar indirectamente
el potencial de biodegradación de un suelo
contaminado y que cualquier célula viable
inoculada en un medio de cultivo bajo
condiciones ambientales apropiadas se
multiplica y produce datos de fácil identificación,
que permita generar colonias separadas, cada
colonia puede proceder de una sola célula o de
una agrupación, la cual se contara como una
bacteria. Estas placas pueden ser usadas no
solo para el conteo de poblaciones microbianas,
sino también para el aislamiento de organismos.
3. Explique las razones por las cuales los
hongos y no las bacterias del suelo son
cultivados mediante la técnica de placa
profunda.
RTA: Cuando se compara los hongos con las
bacterias las razones por las cuales los hongos
son cultivados mediante la técnica de placa
profunda es porque en general estos tienen
requerimientos nutricionales muy simples, pero
su desarrollo es más lento por lo que requieren
mayor tiempo de incubación para su cultivo, la
diversidad más notable la presentan en sus
propiedades morfológicas y en sus ciclos
sexuales siendo estas características los
criterios que se emplean en la identificación y
clasificación de este grupo Las
características, estructurales incluyen :
tipo de talo , morfología microscópica del
micelio tanto aéreo como profundo . tipo
de hifas diferenciación y disposición o
agrupación de las mismas tipo de hifas
reproductivas asexuales, estructura y modo de
formación del cuerpo fructífero sexual, tipo de
espora (forma, tamaño, aspecto externo,
agrupación, fabricación, color, movilidad, tipo
y numero de flagelos).
4. En qué consiste la técnica del Número Mas
Probable para la cuantifica- ción de
microorganismos del suelo?
RTA: El método del número más probable
(NMP) es una estrategia eficiente de estimación
de densidades poblacionales especialmente
cuando una evaluación cuantitativa de células
individuales no es factible. La técnica se basa en
la determinación de presencia o ausencia o en
réplicas de diluciones consecutivas de atributos
particulares de microorganismos presentes en
muestras de suelo u otros ambientes. Por lo
tanto, un requisito importante de este método es
la necesidad de poder reconocer un atributo
particular de las poblaciones en el medio de Dispersar el suelo y homogeneizar con
crecimiento a utilizarse. El estimado de densidad agitación vigorosa
poblacional se obtiene del patrón de ocurrencia
de ese atributo en diluciones seriadas y el uso
de una tabla probabilística.

IV. PROCEDIMIENTO
Imagen 1. Muestra de suelo
 EEn condiciones esteriles se adiciono 11
G del suelo a una botella de disolución
con tapa de rosca con 99 ml de solución
salina isotónica esteril
 SSe agito y se tomó 1 Ml de la solución
preparada anteriormente, se transfirió a
un tubo de 9 Ml de solución salina
esteril, se agito y se tomó 1 ml de la
solución y se transfirió a un tubo de 9 ml
de solución de salina esteril, realizar
diluciones sucesivas utilizando el mismo
procedimiento hasta obtener la dilución
1.100.
 SSe selecciono tres disoluciones
próximas, se agito y se tomó 0,1 de
cada disolución
 Se Extendido homogéneamente la
alícuota en la superficie del medio con
una varilla de vidrio previamente
esterilizada (inmersa en alcohol y
pasándola por la flama del mechero
permitiendo su enfriamiento).
 Se Incubo las placas de forma invertida
a 30 ˚C en ausencia de luz.

 dDespués de un periodo de
incubación de 24 a 48 horas, se
contó el número de colonias y se
reportó como unidades formadoras
de colonias (UFC)/ g de suelo seco

V. DESARROLLO DEL
PROCEDIMIENTO

1) En condiciones estériles, adicionar 11 g

del suelo a una botella de dilución o
matraz con tapa de rosca con 99 ml de
solución salina isotónica estéril.
 2.) Agitar y tomar 1 ml de la solución del suelo
preparada anteriormente y transferido a un tubo
de 9ml de solución salina estéril o medio líquido
(dilucion1:10). Agitar y tomar 1 ml de la solución
salina estéril o medio liquido (Dilución 1:100)
Realizar diluciones Sucesivas utilizando el
Imagen 4.
mismo procedí-

5) Incubar las placas de forma

invertida
a 30 ˚C en ausencia de luz.

Imagen 2. pesaje de la muestra 11gr

3) Seleccionar tres diluciones próximas, Agitar y

tomar 0.1 ml de cada dilución seleccionada y
Imagen5.transfiriendo solución salina colocarla en el centro de la superficie del medio
Estéril. de cultivo

6.) Después de un periodo de incubación de

24 a 48 horas, contar el número de
colonias y reportar como unidades
formadoras de colonias (UFC)/ g de suelo
seco.

Imagen3. Agitación de la solución del suelo.

4) Extender homogéneamente la alícuota en la

superficie del medio con una varilla de vidrio
previamente esterilizada (inmersa en alcohol y
pasándola por la flama del mechero permitiendo
su enfriamiento).

II. RESULTADOS
 Figura 5. Coloración de Gram. Dilución 1:100
A. CUANTIFICACION DE BACTERIAS Y de la solucioón de suelo.
COLORACION DE GRAM. Observado en microscopio óptico objetivo 100 x.
Fuente: Autores.

Figura 1. Registro macroscopico. Dilucion 1:100

de la solucion de suelo despues de 24 horas. B. CUANTIFICACIÓN DE HONGOS

Figura 6. Registro macroscopico. Dilución 1:10

000 de la solución de suelo, después de 3 días.
Figura 2. Coloración de Gram. Dilución 1:100
de la solución de suelo.
Observado en microscopio optico objetivo 4x.

Figura 3. Coloración de Gram. Dilución 1:100

de la solución de suelo.
Observado en microscopio óptico objetivo 10x.

Figura 4. Coloración de Gram. Dilución 1:100

de la solución de suelo.
Observado en microscopio óptico objetivo 40x. VI REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
Fuente: Autores.
[1] POCHON J. 1962. Microbiología del suelo.
IDIA 173: 1 – 72.

[2] Órgano MINISTERIO DE LA PRESIDENCIA.

Publicado en BOE núm. 45 de 21 de febrero de
2003 [web]:
http://noticias.juridicas.com/base_datos/Admin/rd
140-2003.html. Consultado 11/09/2016

[3]Técnica de placa profunda. (En línea) (Citado

el 15 de mayo de 2015) Disponible en:
<http://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/q
uimica/5_anio/biotecnologia/practicoIII.pdf>

[4]Fumigación del sustrato (En línea) (Citado el

15 de mayo de 2015) Disponible en:
<http://www.etsmre.upv.es/pcult/desinfsuelo.htm
>
[5] Velez, D. (1 de 02 de 2008). Slideshare.
Obtenido de Estructura y morfologia bacteriana .
https://pt.slideshare.net/divelezo/diapositivas-
tema-02-estructura-y-morfologa-bacterianas-
presentation

VII. CONCLUSIONES

1). Se realizó la cuantificación de

microorganismos del suelo (hongos y
bacterias) utilizando la técnica de dilución y
siembra en la placa pero en esta experiencia
no hubo un crecimiento amplio de
microorganismos por lo cual no se pudo
realizar el conteo y los cálculos
correspondientes, en cada caja de Petri se
podrían haber formado de 30 a 300 colonias
pero en este caso no se obtuvieron los
resultados deseados, tal vez porque la
muestra del suelo tomada no pudo ser el
medio apropiado para que todas crecieran al
mismo tiempo y estas bacterias crecen en el
suelo como colonias o si no se desintegran
antes del recuento, esta toma de muestra es
complicada y llena de errores se deben
tomar muchas y en este caso no se pudieron
haber tomado las suficientes para realizar
dicho conteo, los pocos que formaron no se
pudieron diferenciar en algunas cajas no se
formó nada y en otras se formaron manchas
blancas o gris como se observa en la
muestra.