UNIVESIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

Facultad ciencias agropecuarias

Escuela Académica Profesional de Ingeniería Agroindustrial
ESPECTROFOTOMETRÍA

Castillo Méndez Lucero Nicol; Castillo Sánchez Fiorella Alexandra; Chávez García
Jazmín; De la Cruz Cerquin Ronald

Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad Nacional de Trujillo, Av. Juan

Pablo II s/n – Ciudad Universitaria, Trujillo Perú.

I. RESUMEN

El presente informe tuvo como objetivo elaborar la curva espectral de

pigmentos naturales como lo son la betarraga y la zanahoria. La práctica fue
asequible ya que dependió de la extracción de pigmentos liposolubles y de
medir la absorbancia de la solución de pigmentos a diferentes longitudes de
onda, entre 320 a 780 nm (barrido espectral), para posteriormente realizar dos
gráficas, las cuales indicaron la absorbancia y longitud de onda (curva
espectral) de los pigmentos de zanahoria y betarraga.

Palabras clave: Absorbancia, longitud, curva, espectral.

II. INTRODUCCIÓN

La Espectrofotometría es una de las técnicas experimentales más utilizadas

para la detección específica de moléculas. Se caracteriza por su precisión,
sensibilidad y su aplicabilidad a moléculas de distinta naturaleza
(contaminantes, biomoléculas, etc.) y estado de agregación (sólido, líquido,
gas). Los fundamentos físico-químicos de la espectrofotometría son
relativamente sencillos. Las moléculas pueden absorber energía luminosa y
almacenarla en forma de energía interna.
En 1940, varios espectrofotómetros estaban disponibles en el mercado, pero los
primeros modelos no podían funcionar en el ultravioleta. Arnold O. Beckman
desarrolló una versión mejorada en National Technical Laboratories Company,
más tarde Beckman Instrument Company y, finalmente, Beckman Coulter.
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Se desarrollaron Agroindustrial
los modelos A, B y C (se produjeron tres unidades del modelo
C), luego el modelo D, que se convirtió en DU. Toda la electrónica estaba
contenida dentro de la caja del instrumento, y tenía una nueva lámpara de
hidrógeno con continuidad ultravioleta y un mejor monocromador. Este
instrumento fue producido desde 1941 hasta 1976 con esencialmente el mismo
diseño; se vendieron más de 30,000.
Esta práctica tiene como objetivo principal, elaborar la curva espectral de
pigmentos naturales, siendo estos, la betarraga y la zanahoria.

III. MATERIALES Y MÉTODOS

• 3.1 Materiales

Materia prima vegetal (zanahoria y beterraga)

10 mL de acetona

Espectrofotómetro

2 tubos de ensayo

2 pisetas con agua destilada

pipetas 10 ml

Ilustración 1. Zanahoria y beterraga Ilustración 2. Espectrofotómetro

Ilustración 3. Tubos de ensayo

Ilustración 4. Piseta
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• 3.2 Método

Extracción de Pigmentos Liposolubles

✓ Pesar 1 g de zanahoria deshidratadas trituradas.

✓ Añadir 10 mL de acetona y filtrar a través de papel filtro (humedecido con

acetona y escurrido).

✓ Repetir la extracción en dos ocasiones más con 5 mL de acetona en cada

caso.

✓ Centrifugar el filtrado durante 5 min para separar las partículas en

suspensión.

✓ Filtrar con papel de filtro en un embudo. Guardar el filtrado. Este contiene

el pigmento que va a ser utilizado en el experimento.

Extracción de Pigmentos Hidrosolubles

✓ Colocar 1 g de betarraga deshidratada en un Beaker. Agregar agua destilada

y realizar la extracción.

✓ Filtrar con papel de filtro en un embudo. Guardar el filtrado. Este contiene

el pigmento que va a ser utilizado en el experimento.

Curva Espectral

✓ Medir la absorbancia de la solución de pigmentos a diferentes longitudes de

onda, entre 320 a 780 nm (barrido espectral)

✓ Graficar absorbancia vs. Longitud de onda (CURVA ESPECTRAL)

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IV. RESULTADOS
• Graficar absorbancia vs. Longitud de onda (CURVA ESPECTRAL) de cada
pigmento.

Gráfico 1 .CURVA ESPECTRAL DE

LA BETANINA DE LA BETERRAGA
0.5
0.4
ABSORBANCIA

0.3
0.2
0.1
0
300
321
342
363
384
405
426
447
468
489
510
531
552
573
594
615
636
657
678
699
720
741
762
-0.1

LONGITUD DE ONDA

La longitud de onda pico para la curva espectral del pigmento de la

betarraga es:
480 nm

Gráfico 2 .CURVA ESPECTRAL DEL

CAROTENOIDE DE LA ZANAHORIA
0.12
0.1
ABSORBANCIA

0.08
0.06
0.04
0.02
0
0 200 400 600 800 1000
LONGITUD DE ONDA

La longitud de onda pico para la curva espectral del pigmento de la

zanahoria es:
448 nm
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V. DISCUSIÓN
Según Ugaz (1997), la proporción en la que se encuentran las betacianinas y
betaxantinas origina diferencias en la coloración de la beterraga. La betalaína tiene un
máximo de absorbancia a una onda de longitud cercano a 530 nm.

Gráfica 1. Barrido espectral de la betalaína

Según Jonnathan (2018), como resultados se obtuvieron máximos de absorbancia

promedio para la betanina de 1.882 nm para una longitud de onda de 533 nm, y de 0.472
a una longitud de onda de 533 nm para las diluciones 1:25 y 1:50 respectivamente.
Comprobando de esta forma la presencia del pigmento al ser un valor muy cercano al
descrito por Aceituno (2013) en su investigación, donde afirma que la betanina presenta
un máximo de absorbancia a una longitud de onda de 537 nm.
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Según Ugaz (1997), los espectros en la región visible de los carotenoides son muy
característicos entre 400 y 500 nm con un pico mayor alrededor de 450 nm y usualmente
dos picos menores, uno a cada lado.

Según Chamorro (2017), el espectro visible de los carotenoides es bastante característico

en el rango de 400 a 500 nm. Se observa un máximo alrededor de 450 nm y generalmente
se aprecian dos máximos u hombros a cada lado. Para un carotenoide, las posiciones de
las bandas de máxima absorción están en función del número de dobles enlaces
conjugados presentes en la molécula. En la figura 2. se representa un espectro de
absorción ultravioleta/visible general para carotenoides
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En el caso de la beterraga según Ugaz, la longitud de onda pico de la betalaína tiene un

máximo de absorbancia de 535 nm, sin embargo, en la práctica obtuvimos 480 nm

logrando una pequeña diferencia, pero aun así dentro del rango establecido. De igual

forma para la zanahoria, según la literatura el máximo de absorbancia es mayor a 450 nm,

resultando en la práctica 448 nm. Esta ligera variación se debe al tipo de solvente usado

en cada caso.

VI. CONCLUSIONES

✓ Se determinó la curva espectral de la zanahoria y beterraga, a través de la

espectrofotometría.
✓ Se concluye que, si se usa diferente solvente, la curva varía, sin embargo, la
forma y longitud de onda pico se mantiene.
✓ El solvente utilizado (acetona) demostró ser efectivo para la extracción de los
carotenoides, lo que se reflejó en los espectros de absorción obtenidos, los
cuales coinciden con la forma característica de un espectro de absorción
ultravioleta/visible de carotenoides en el rango de 400-500 nm.
✓ El solvente utilizado (agua destilada) demostró ser efectivo para la extracción
de las betalaínas, lo que se reflejó en los espectros de absorción obtenidos, los
cuales coinciden con la forma característica de un espectro de absorción
ultravioleta/visible de betalaínas en el rango de 400-600 nm.

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

• (Ugaz, 1997). Colorantes Naturales

• Chamorro, H. (2017). EFECTO DE LA PRESIÓN Y TEMPERATURA EN LA
EXTRACCIÓN POR CO2 SUPERCRÍTICO DE CAROTENOIDES DE
ZANAHORIA (Daucus carota). Trujillo.
• Jonnathan, S. (2018). "COMPARACIÓN DEL RENDIMIENTO DE UN
COLORANTE ELABORADO A PARTIR DEL PIGMENTO BETANINA EN
BETA VULGARIS (REMOLACHA) Y UN COLORANTE COMERCIAL EN
LA TINCIÓN DE ALGODON. Guatemala.
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VIII. ANEXOS

Imágenes del procedimiento de la práctica

Ilustración 5. Pesar la zanahoria deshidratadas trituradas Ilustración 6. Añadir 10 mL de acetona

Ilustración 7. Extracción en una placa de agitación con un imán Ilustración 8. Tapar para evitar su degradación

Ilustración 9. Filtración Ilustración 10. Extracto

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Ilustración 11. Muestra de beterraga

Ilustración 11 .Pesar la muestra de beterraga

Ilustración 12. Añadir agua destilada Ilustración 13. Filtrado después de 3 horas
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Ilustración 14. Medición en espectrofotómetro UV-VIS

Ilustración 16. Curva Espectral de la Betanina de la Beterraga

Ilustración 17. Curva Espectral del Carotenoide de la Zanahoria