INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

LABORATORIO DE FISIOLOGÍA Y BIOQUÍMICA

MICROBIANA

PRÁCTICA No. 5 OXIDACIÓN DE AZUFRE Y DE ION FERROSO POR

BACTERIAS QUIMIOLITOTRÓFICAS

Equipo: 7

Sección: 2

Integrantes:

- Del Razo Méndez Adriana

- Gaytán Medina Mariana
- Gómez Albarrán José Miguel
- Melo Nájera R. Adrián

Profesores:
- Ángeles Morales Erika Beatriz
- García Aquino Odilia
- Hernández Cortez Cecilia
- Villalobos Rocha Juan Carlos

Hipótesis (1%)
Objetivos (1%)
Resultados Finales (1%)
Discusión de Resultados (4%)
Conclusiones (2%)
Bibliografía (1%)
HIPÓTESIS
“Si las bacterias oxidantes del género Thiobacillus como T. thiooxidans, T. thioparus y T.
ferrooxidans se colocan en un medio con su sustrato inorgánico y en condiciones de agitación se
tendrá mayor cantidad del sustrato utilizado u oxidado; por lo tanto se obtendrá mayor cantidad de
ácido formado u ión utilizado, así como la disminución del pH en el medio; que en condiciones
estacionarias.”

OBJETIVO GENERAL
Demostrar si Thiobacillus thiooxidans oxida el azufre y acidifica el medio debido a la producción de
ácido sulfúrico en agitación y sin agitación.
OBJETIVOS PARTICULARES
- Determinar la cantidad de azufre utilizado por T. thiooxidans en condiciones de agitación y
estacionario.
- Calcular la cantidad de ácido sulfúrico formado en cultivos que tienen T. thiooxidans y T.
thioparus.
- Determinar la cantidad de tiosulfato oxidado por T. thioparus.

RESULTADOS

Tabla 1. Resultados generales obtenidos que corresponden a los medios de cultivo y los microorganismos
empleados.

Cultivos
Resultados otenidos
Agitados Estacionarios
Cultivo de Thiobacillus thiooxidans en azufre elemental (Medio A)
1. azufre utilizado (mg) 419.3 0
2. H2SO4 formado (mg) 607.49 51.45
3. S de SO4= formado (mg) 1.45 0.057
4. pH 2.8 2.5
Cultivo de Thiobacillus thioparus en tiosulfato (Medio B)
1. Tiosulfato Oxidado (mg) 63.77 77.43
2. H2SO4 Formado (mg) 121.42 112.31
3. pH 4.3 4.5
Cultivo de Thiobacillus ferrooxidans en ión ferroso (Medio C)
1. Ión férrico formado (mg) 14 23
2. pH 0.31 6.06

DISCUSION:

Para el medio A se evaluó el crecimiento de Thiobacillus thiooxidans, que es un organismo

quimiolitotrófico por desarrollarse a base de la fuente de azufre que es el azufre elemental, por lo que
obtendrá su energía a partir de la oxidación de éste compuesto (inorgánico), y que basándose en la
tabla 1 primeramente se evaluó el azufre utilizado y que se observa que fue mayor en los matraces
agitados que los estacionarios ya que al mantener las condiciones agitadas se favorece el encuentro
entre el sustrato con el microorganismo y por ende se consuma más azufre en el agitado que el
estacionario. Seguido a ello se evaluó los mg de H2SO4 formado pues Thiobacillus thiooxidans al
utilizar al azufre como fuente de energía es capaz de oxidarlo hasta sulfatos que al condensarse con
el agua del medio se forma dicho acido, es por ello que se midió el producto de la oxidación
basándonos en una titulación ácido-base y que en la tabla 1 se observa como el azufre residual fue
utilizado por éste microorganismo cuando se mantuvieron las condiciones de agitación ya que el
azufre estará más disponible que si se mantiene en un estado estacionario y claramente los valores
para el medio estacionario son mayores que para el estacionario. Para finalizar se determinó los mg
de azufre de sulfatos formados y que se rectifica que Thiobacillus thiooxidans favorece la oxidación
de azufre elemental en un medio agitado ya que también se incorpora tanto oxigeno como dióxido
de carbono para esta reacción por ser quimilitotrófico ya que al oxidar al azufre elemental toma los
electrones para generar su energía. [1]

A cuatro matraces se adicionaron 50 mL del medio B con 250 mg de tiosulfato de sodio anhidro
(Na2S2O3), dos de los cuales fueron inoculados con el microorganismo Thiobacillus thioparus,
incubándose a uno de los matraces en agitación, y el otro se mantuvo estacionario. Los otros dos
matraces fueron los testigos sin inocular de dichas condiciones.

En los cultivos inoculados con thiobacillus thioparus se obtuvo 63.77 mg de tiosulfato oxidado en el
matraz agitado, 77.43 mg de Tiosulfato oxidado en el matraz estacionario, por otra parte, también se
midió la formación de H2SO4 y pH en cada uno, en los agitados presento 121.42 mg de H2SO4 y
presento un pH de 4.3, en el cultivo estacionario presento 112.31 mg de H 2SO4 y un pH de 4.5

El medio B fue inoculado con Thiobacillus thioparus, un microorganismo quimiolitotrofo y aerobio

estricto que utiliza como fuente de energía al tiosulfato, no crece a pH acido. Este microorganismo
transforma el tiosulfato a sulfatos los cuales al ionizarse se transforman en H 2SO4, produciendo la
disminución del pH en el medio de cultivo teniendo 4.3 en condiciones agitadas y 4.5 en condiciones
estacionarias. El medio B es un medio mineral adicionado con tiosulfato de sodio como donador de
electrones y un pH inicial de 6.5 – 7 lo que favorece el crecimiento de este microorganismo debido a
su capacidad de oxidar compuestos reducidos de azufre a sulfatos generando condiciones acidas en
el medio donde se encuentra creciendo.

Por otra parte, el tiosulfato oxidado nos da un indicativo de que Thiobacillus thioparus está creciendo
en el medio de cultivo, pero tomando como referencia los resultados obtenidos se presenta una
discrepancia que no concuerda con lo antes mencionado, porque hubo mayor actividad oxidativa
hacia el sulfato en condiciones estacionarias, se esperaba que hubiera mayor oxidación en la agitada
porque aquí se presenta una mayor velocidad de oxidación del tiosulfato a sulfato debido a que
aumenta la tensión de oxígeno y CO2 en el medio, por otra parte, en el medio con condiciones
estacionarias donde la oxidación es más lenta debido a que las condiciones que presenta son
menores, menor tensión de oxígeno, además como mencionamos anteriormente, Thiobacillus
thioparus es un microorganismo que requiere de condiciones aerobias para que las enzimas
encargadas de la oxidación del tiosulfato lleven a cabo un buen funcionamiento.
Este dato se le puede atribuir a diferentes factores, disminución en la adición de alícuota para ambas
condiciones, mayor cantidad en matraces estacionarios, menor cantidad en matraces agitados, la
cepa debido a que ha sufrido constantes resiembras su maquinaria enzimática no está trabajando
como se espera y se ha adaptado a cualquier condición a la que se le exponga.
Para el cultivo C se evaluó Thiobacillus ferrooxidans (quimioautótrofas) mediante la determinación
de ion ferroso, esta bacteria es acidofila el H2SO4 le proporciono las condiciones acidas para llevar
a cabo la reacción de óxido reducción. Este tipo de bacterias utilizan la rusticianina para poder llevar
acabo la oxidación de Fe2+ a Fe3+. Podemos observar en los cultivos que mientras T. ferrooxidans
disponga de Fe2+, se sintetizara ATP por medio de la fuerza protón motriz generada. Gran parte de
la energía es consumida en las reacciones del transporte inverso de electrón para obtener el poder
reductor necesario para la fijación de CO2 y esto se debe al elevado potencial del donador de
electrones.
CONCLUSIONES
 Thiobacillus thiooxidans oxida al azufre elemental hasta sulfatos y que se favorece en un
medio de cultivo en condiciones agitadas.
 T. ferrooxidans utiliza Fe2+ para oxidarlo a Fe3+ utilizando la rusticianina.

REFERENCIAS

1.- Roger Y. Stainer, “Microbiología”, México, 2da edición, 1999, páginas consultadas: [416-417]

2.- Vladimir Arias A. , Fernando Anaya M. , Janet Quiñones L., Dánica Salazar I. “Adaptación del
Thiobacillus Ferrooxidans a sustratos conformados con especies de minerales piríticos” Fecha de
consulta: 21/nov/2017. Disponible en:
http://revistasinvestigacion.unmsm.edu.pe/index.php/iigeo/article/viewFile/8339/7264

3.- R.E. Rivera Santillan, O. Cabrera Moctezuma y A. Lopez Juarez. “Biooxidacion de fierro (II) con
Thiobacillus ferrooxidans en presencia de ion Ag+” Fecha de consulta: 21/nov/2017 Disponible en:
http://www.smbb.com.mx/congresos%20smbb/puertovallarta03/TRABAJOS/AREA_VII/ORAL/OVII-
27.pdf