Laboratorio de Histología

Práctica 2. Técnicas especiales: Histoquímica e Inmunohistoquímica.

Objetivos:

1- Conocer los distintos tipos de tinciones histoquímicas y los componentes

celulares o extracelulares observables con esta técnica.

2- Establecer los usos y los marcadores más útiles de la inmunohistoquímica.

Desarrollar:

1. 1-  Establecer qué tiñe, qué color adquieren las estructuras y para que se
usan cada una de las siguientes tinciones:

 PAS (Ácido Peryódico de Schiff): se usa con frecuencia para membrana

basal, detección de carbohidratos. Tiñe específicamente glucógeno y otros
carbohidratos (magenta).
 Tricrómico: tiñe de azul el tejido concetivoy de rojo el citoplasma.
 Reticulina es un método de impregnación con plata que tiñe de negro las de
reticulina. Tiñe las fibras de color marron.
 Oil red se utiliza por ejemplo para la detección de grasas neutras o gránulos
de polietileno en tejidos histológicos, en la patología articular así como en
material de muestra citológico.Tiñe de rojo los lipidos. Suddan Black tiñe los
fosfolípicos y los esteroles. Tiñe de negro los lipidos.

 Perls: el ácido clorhídrico se separa de la proteína unida al hierro, permitiendo

que el ferrocianuro de potasio pueda combinarse específicamente con el hierro
férrico para formar ferrocianuro férrico (azul de Prusia).
 Weigert: fibras elásticas tiñen de azul o negro. En combinación con la floxina o
la tinción de van Gieson, se utiliza para el estudio de los vasos
 Mucicarmin: Tiñe el glicógeno de intenso color rojo.
 Rojo Congo :Tinción para proteínas. Se utiliza con hematoxilina/eosina en
patología cuando se busca amiloide. Tiñe el amiloide de un intenso color rojo.
 Giemsa  se ultiliza para teñir la sangre.
 Grocott Se utiliza para la tinción de hongos y de los quistesdel Pneumocystis
carini, los tine de negro.
 Ziehl Neelsen se una técnica de tinción diferencial rusada para la identificación
de bacterias ácido-alcohol resistentes (BAAR) , como M. tuberculosis o el
filo Apicomplexa, colorea de rojo.
 Gram tiñe las bacterias.
 Fonatana: tiñe la melanina de color negro.
2. Defina inmunohistoquímica.

La tinción inmunohistoquímica se basa en la afinidad entre antí- genos y

anticuerpos, que es la fuerza de atracción que entre las moléculas causa
unión. En el caso de las reacciones inmunológi- cas, las fuerzas de afinidad
son covalentes. Cabe mencionar que las moléculas de los anticuerpos son
grandes, por lo que es posible conjugarlos con otros compuestos como
fluorocromos o enzimas sin que se modifiquen las propiedades del
anticuerpo.

3. Mencione la diversidad de usos en los que tiene aplicabilidad.

 Diagnostico de timor de origen desconocido

 Marcador en pronostico de cancer
 Clasificaion de neoplasias; linfoides/ hematopologicas
 Identificacion de blancos terapeuticos
 Caracterizacion de sustancias extracelulares

4. Enliste 20 marcadores más usados y qué tiñe cada uno.

 CD45: celulas B., Macrogafos, mieloides y su tumores.

 IG: Plasmaticas y sus tumores
 LIOSOZIMA: macrofagos,celulas mieloides
 EMA: celulas plasmaticas y sus tumores.
 Vimentina: celulas linfoides.
 CD20: celulas dentriticas foliculares.
 CD36: Marcador miolomocitico.
 CD75: La mayoria de los linfomas sobre todo los foliculares y de alto
grado.
 CD15: Granulocitos, monocitos y celulas R-S, enfermedad de
Hodgkin.
 Proteina S-100: Celulas langerhans, celulas dendritas foliculares y
sus tumores.
 TDT: celulas precursoras en la medula osea, timocitos corticales.
 TCR: celulas t y la mayoria de los linfomas t.
 CD57: celulas del centrol germinal.
 CD1a: Timocitos corticales.
 CD15: granulocitos, macrofagos.
 Citoqueratinas: proteínas estructurales de las células de origen
ectodérmico. Presentes en muchos carcinomas y adenocarcinomas.
 Vimentina: proteína estructural de células de origen mesodérmico. Presente
en la mayoría de sarcomas.
 CD3 y CD45RO: marcador de linfocitos T.
 CD79a y CD 20: presente en linfocitos B.
  CD 18: se expresa por todos los leucocitos (incluyendo histiocitos
-macrofagos, células de Langerhans y células dendríticas).
 GFAP: marcador específico de astrocitos.
 Neurofilamentos: permite valorar daños axonales. Presentes en algunas
neoplasias con diferenciación neuronal.
 Desmina, Actina: presentes en fibras musculares y neoplasias relacionadas
(leiomiosarcomas, rabdomiosarcomas).
 Cadenas Kappa y Lambda de inmunoglobulinas: marcadores de célula
plasmática.
 Melan-A: marcador de melanoma.

5. Explique la relación de la inmunohistoquímica con los filamentos

intermedios.

Los filamentos intermedios son los elementos del citoesqueleto más resistentes;
forman una red que rodea al núcleo y que se extiende hasta la periferia celular,
interaccionando con la membrana plasmática. La familia de las citoqueratinas
constituye el principal tipo de filamentos intermedios en la mayoría de células
epiteliales. Tras la aplicación de nuevos métodos inmunohistoquímicos se
lograron identificar e independizar en un único grupo los filamentos intermedios.

6. Diga la diferencia entre inmunohistoquímica e inmunocitoquímica.

La inmunohistoquimica utiliza secciones de tejido ( en parafina o

congelacion), mientras que la inmunocitoquimica se realiza sobre
muestras de tejido biologico donde la celulas estan rodeadas de la
correspondiente de tejido tisular y de otras presentes en el mismo.

7. Explique la diferencia entre inmunohistoquímica e inmunofluorescencia.

La inmunohistoquimica es un método de prueba molecular que se practica

para identificar y confirmar la presencia del antígeno en la célula objetivo.
Mientras que la inmunofluorescencia es una técnica de detección en la que
los anticuerpos utilizados en el ensayo se marcan con tintes fluorescentes
o proteínas fluorescentes para el propósito de detección.

Bibliografia

 Ross, M., Kaye, G. and Pawlina, W., 2014. Histología. 7th ed. Buenos Aires:
Editorial Médica Panamericana, pp.114-160.
 Leeson, C., Leeson, T., Paparo, A. and Leeson, C., 1986. Atlas De Histologia.
1st ed. México: Nueva editorial Interamericana.
 Renshaw, S., 2007. Immunohistochemistry. Bloxham, Oxfordshire: Scion.