Manual del Alumno del Curso de Inmunología-EPGyB-2020-II

TEMA EXPERIMENTAL 2

Protocolos de extracción de sangre venosa. Principales vías.

Obtención de células inmunes, suero y plasma sanguíneos

L. Alzamora G. - E. Colona V. - P. Mamani Z (*).

*​pmamaniz@unmsm.edu.pe

Imagen: biologycorner.com

INTRODUCCIÓN

El sistema cardiovascular transporta nutrientes a los tejidos y elimina los desechos

metabólicos. El intercambio de nutrientes y desechos entre la sangre y los tejidos
ocurre en los vasos sanguíneos pequeños, principalmente por difusión. Los
desechos metabólicos son eliminados del cuerpo por los riñones, los pulmones, la
piel y el tracto gastrointestinal. El flujo sanguíneo ayuda a mantener un ambiente
interno relativamente constante en todo el cuerpo (​Carroll, 2007​).

La sangre está compuesta de elementos formes o células sanguíneas que consisten

en eritrocitos, plaquetas, leucocitos, y plasma que contiene factores de coagulación.
La alteración de los componentes de las células sanguíneas y las proteínas
plasmáticas como la albúmina, la globulina y el fibrinógeno refleja el estado de salud
de los animales. Por lo tanto, la recolección de sangre y su análisis son
indispensables para el mantenimiento de ratones de laboratorio. Además, la sangre
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transporta nutrientes, residuos del metabolismo, hormonas, anticuerpos y enzimas.

Los anticuerpos indican la historia de infección de los animales, mientras que el
polimorfismo de las enzimas séricas se utiliza para identificar las cepas
endogámicas (​Fukuta, 2012​).

La venopunción es la recolección de una muestra de sangre de una vena,

usualmente para pruebas de laboratorio, también conocida como flebotomía. Todo
profesional que vaya a realizar cualquier tipo de toma de muestras, debe tener en
cuenta, que la calidad del resultado, comienza por una correcta obtención de la
muestra. La toma de muestra de sangre se obtiene por punción venosa, arterial o
capilar, aunque de forma general se obtiene por punción venosa debido a que causa
un menor traumatismo para el paciente,y permite la obtenciòn de un volumen
suficiente de sangre con mayor facilidad.

El ratón de laboratorio es el modelo animal más utilizado para estudios

hematológicos y para la evaluación de parámetros sanguíneos en una amplia gama
de disciplinas. A menudo, el análisis de sangre se produce por una colecta de
sangría parcial. Sin embargo, el pequeño tamaño del cuerpo del ratón limita la
recolección de sangre en función del volumen, la frecuencia y los sitios accesibles.
Los lugares habituales para la obtención de sangre en ratones incluyen el seno
retroorbitario, la vena facial (venas temporales superficiales o submandibulares), la
vena de la cola, la vena safena y el corazón (punción cardíaca) (​Hoggatt et al.
2015​).

El volumen sanguíneo total en roedores y conejos representa aproximadamente el

6% del peso corporal. Por ejemplo un ratón de 25 g tiene un volumen sanguíneo
total de 1.5 ml. El volumen estimado en el momento de la sangría es
aproximadamente la mitad del volumen sanguíneo total, osea 750 ul para un ratón
de 25 g. Para múltiples extracciones de sangre separadas por un período de 2
semanas, se puede extraer un máximo del 1% del peso corporal del animal, es
decir, 0,2 ml de un ratón de 20 gramos; 4 ml de una rata de 400 gramos o 40 ml de
un conejo de 4 kg. Se necesita un período de recuperación de 14 días para que el
animal adulto sano promedio se recupere de esta pérdida de sangre. Aunque el
volumen de sangre se restaura dentro de las 24 horas posteriores a la extracción de
sangre, se necesitan dos semanas para que todos los componentes de la sangre
vuelvan a la normalidad (​Guidelines for Blood Collection: Rodents and Rabbits,
2011​).

Uno de los métodos de extracción de sangre en ratones es el de sangrado

submandibular que es un método alternativo para extraer muestras de sangre de
manera rápida, humana, eficiente y económica. Este es un método que los
investigadores han utilizado durante varios años para extraer sangre de muchas
especies de mamíferos, especialmente humanos, lo que produce muy poco dolor,
malestar y daño tisular. Este método no solo mejorará el diseño científico y los
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resultados de los estudios con ratones de laboratorio, sino que también puede
aplicarse a otros animales de laboratorio, como ratas, roedores y hamsters (​Golde
et al. 2005​).

RECURSOS

a. Videoconferencia​ sobre el TE​ 2 ​(15​-20’).

b. Lectura 3. ​Criterios de trabajo según la muestra y el estudio destinado

c. Videos complementarios 4.

Sangría en humanos. Métodos:

❏ Venosa por jeringa​ ​(2’)
❏ Venosa por vacutainer​ ​(6’)
Sangría de conejos
❏ Punción cardiaca​ ​(1’)
❏ Vena Marginal​ (1’)
Sangría de ratones
❏ Punción cardiaca​ ​(2’),
❏ Vena facia​l​ (1’),
❏ Vena safena​(1’),
❏ Vena yugular​ (3’)
❏ Seno retro-orbital​ (1’)
Sangría de aves
❏ Vena braquial​ ​(1’)
❏ Vena yugular​ ​(1’)

d. Cuestionario.​ Desarrollo de preguntas en base a la lectura y los videos.

e. Foro 3:​ ¿Qué consideraciones se debe tener para elegir un tipo de sangría?

f. Videochat.​ Discusión y absolución de preguntas.

ESTRATEGIAS

Actividad asincrónica

❏ Lee el artículo​: ​Criterios de trabajo según la muestra y el estudio

destinado y elabora las conclusiones.
❏ Analiza los videos complementarios de sangría en humanos, conejos,
ratones y aves.
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❏ Desarrolla las preguntas del ​cuestionario basado en los vídeos

complementarios, lectura y referencias bibliográficas que se encuentran en
el ​Manual del Estudiante (ME)
❏ Discute e intercambia opiniones por medio del ​Foro, ​reforzando el
conocimiento previo, creando ideas o resolviendo problemas sobre el
tema.

Actividad sincrónica

❏ Expone los videos complementarios de sangría en humanos, conejos,

ratones y aves.
❏ Contesta y discute las preguntas del cuestionario mediante
videoconferencia y chat​ con el profesor responsable del grupo.
❏ Responde las preguntas formuladas por el profesor responsable como parte
de la evaluación permanente respecto al tema experimental.

CUESTIONARIO

1. Explique el procedimiento para la extracción de sangre por el método venoso

con jeringa en humanos.

2. ¿Qué tipo de anticoagulante se debe usar si se desconoce el derivado que

obtendrá de la muestra sanguínea? Indique los componentes del
anticoagulante y cómo actúa.

3. ¿Por qué no se debe esperar mucho tiempo entre la toma de muestra y la

separación del suero?

4. Explique el procedimiento para la sangría total en ratones y mencione el

volumen de sangre se puede obtener en ratones adultos

5. ¿Por qué es recomendable usar lanceta y no bisturí en la colecta de sangre

por la vena facial en ratones?

6. ¿Qué volumen de sangre se debe tomar a un ratón adulto de 25 g, si se

requiere una o múltiples muestras sanguíneas?

7. ¿Qué desventajas presentan las sangrías parciales en ratones?

8. Mencionar dos conclusiones de la lectura: Criterios de trabajo según la

muestra y el estudio destinado

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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Carroll, R. G. (2007). Elsevier’s Integrated Physiology. ​Elsevier’s Integrated

Physiology​, 77–89. ​https://doi.org/10.1016/B978-0-323-04318-2.50014-5

Extracción de sangre: Rata, ratón y cobayo​.​ ​2012.

Fukuta, K. (2012). ​Chapter 5.3 - Collection of Body Fluids (H. J. B. T.-T. L. M.

(Second E. Hedrich, ed.).

Guidelines for Blood Collection: Rodents and Rabbits. ​(2011) Department of

Laboratory Animal Resources. The University of Toledo.

Golde  WT,  Gollobin  P,  Rodriguez  LL.  ​A  rapid,  simple,  and  humane  method  for 
submandibular  bleeding  of  mice  using  a  lancet​.  Lab  Anim  (NY).  2005 
Oct;34(9):39-43. doi: 10.1038/laban1005-39. PMID: 16195737. 

Hoff, J. (2000). ​Methods of Blood Collection in the Mouse​. ​Lab Animal​, ​29​(10),
47–53.

Hoggatt, J., Hoggatt, A. F., Tate, T. A., Fortman, J., & Pelus, L. M. (2016). ​Bleeding
the laboratory mouse: Not all methods are equal. ​Experimental hematology,​
44(​ 2), 132–137.e1.

Martí  PS.,  Abril  TC.,  Bosch  CA.,  Rodríguez  AC. ​Criterios de trabajo según muestra
y el estudio destinado​. Los biobancos en la era “Ómica”: Derivados hemáticos. 

Office of Ethics and Compliance. Institutional Animal Care and Use Program. (2016).
Blood Collection: The mouse IACUC Guidelines. 9(2), 2. ​Colecta de sangre en
ratones