FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES

LABORATORIO DE ANÁLISIS INSTRUMENTAL I

Alumno: _____________________________________Código: ___________

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Practica 5. DETERMINACIÓN DE CARBONO ORGÁNICO TOTAL POR EL MÉTODO

DE WALKLEY BLACK

OBJETIVO

Emplear el método de Walkley Black adaptado a espectrofotometría visible, para

determinar carbono orgánico oxidable en muestras de excipientes farmacéuticos.

1. INTRODUCCIÓN

El método de Walkley Black, consiste en una oxidación húmeda de materia orgánica

con una solución de dicromato de potasio, en un medio de pH bajo. Para conseguir la
adecuada acidez del medio se emplea ácido sulfúrico, el cual al diluirse libera calor y
aumenta la temperatura del sistema facilitando la reacción de oxidación (B., S., B., & A.,
2007; Carreira, 2004).

2 Cr2O7 2- + 3C + 16H+ ------- 4 Cr3+ + 3CO2 + 8 H2O

El potencial redox del sistema está fuertemente asociado a la concentración de H2SO4 y
a la temperatura de reacción, por lo que un aumento en la concentración del ácido
incrementa la fuerza oxidante del sistema. Por otra parte, la concentración del ion
dicromato empleada en la mezcla debe asegurar una intensidad oxidativa constante,
por lo que la muestra no debería consumir más del 80% del dicromato añadido (B. et
al., 2007; Carreira, 2004).

Debido a su simplicidad y reproducibilidad el método ha tenido gran aceptación, no

obstante, se ha hecho algunas modificaciones que buscan, principalmente, reducir el
consumo de reactivos. El método original emplea una titulación del ion dicromato
residual con FeSO4, pero en la presente práctica se determina el color verde del Cr3+ a
un  de 654 nm mediante espectrofotometría. Posteriormente, se realizará una curva de
calibración de absorbancia versus porcentaje de carbono, donde las concentraciones de
sacarosa de la curva de calibración, se convierten a g de carbono, como se muestra a
continuación:

Posteriormente, la muestra problema se expresa en % de carbono:

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En el caso de procesamiento de muestras de suelo, estos gramos de carbono se
expresan posteriormente como materia orgánica presente en el suelo (B. et al., 2007;
Carreira, 2004).

2. MARCO TEÓRICO

La espectrofotometría visible, se basa en la medición de la transmitancia o la absorbancia

de una solución que contiene al analíto. La absorción de la radiación visible se lleva a
cabo en dos etapas. La primera es la excitación electrónica de las moléculas de analito
por la absorción de energía, la especie excitada tiene un tiempo de vida muy corto, por lo
que se relaja rápidamente regresando a su estado basal (Skoog, Holler, & Crouch, 2008).

Algunos iones y complejos de elementos en series de transición absorben bandas anchas

de radiación visible en al menos uno de sus estados de oxidación. En este caso, la
absorción involucra transiciones entre orbitales d llenos y no llenos con energías que
dependen de los ligandos enlazados a los iones metálicos (Skoog et al., 2008).

3. SEGURIDAD DURANTE LA PRÁCTICA

3.1 Normas de seguridad

El estudiante debe referirse al manual de normas de seguridad.

3.2 Equipos de protección personal

Usar durante todo el desarrollo de la práctica los siguientes elementos de seguridad:

• Bata de laboratorio
• Guantes de nitrilo
• Gafas de seguridad
Mantener los elementos personales de seguridad identificados y en buen estado. Está prohibido su intercambio con los
demás compañeros de laboratorio.

3.3 Manejo de Residuos químicos

Tanto por razones de seguridad como por respeto al medio ambiente, es importante disponer los residuos generados en
las prácticas del laboratorio de química en forma adecuada. Por ello el estudiante debe:

1. Emplear los recipientes destinados para eliminar los residuos o desechos de laboratorio, los cuales están
debidamente identificados según el tipo de sustancia a desechar.

2. Verter únicamente los residuos en el recipiente correspondiente para evitar reacciones no controladas y
potencialmente peligrosas.

No arrojar por el desagüe los desechos o residuos químicos obtenidos durante el desarrollo de la práctica. Si tiene alguna
inquietud al respecto comuníquela al responsable del laboratorio, quien le indicará la forma correcta de hacerlo.

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4. TRABAJO DE PREPARACIÓN PREVIA

4.1 Calcule el contenido de carbono en mg y el porcentaje de materia orgánica en cada

uno de los estándares de sacarosa, y complete la tabla 4

5. PROCEDIMIENTO

5.1 MATERIALES

Tabla 1. Listado de materiales necesarios para el desarrollo de la práctica por pareja.

ITEM Cantidad
Beaker 100 mL 9
Pipeta graduada de 5 mL 2
Balón aforado de 50 mL 2
Balón aforado de 25 mL 6
Balón aforado de 10 mL 1
Micropipeta de 100 a 1000 µL 1
Micropipeta de 20 a 200 µL 1
Puntas para micropipetas 30
Embudo de vidrio 4
Papel filtro 1 caja para todo el grupo
Frasco lavador 1
Espátula 1
Vidrio reloj 1
Pesa sal 5
Celdas de plástico 2
Estufa 1
Agitador magnético 1

5.2 REACTIVOS

Tabla 2. Listado de reactivos necesarios para el desarrollo de la práctica por pareja.

Reactivo Cantidad
Sacarosa 3g
Metilcelulosa 1g
Lactosa anhidra 1g
Solución de dicromato de potasio 0,272 M 25 mL
Ácido sulfúrico concentrado 45 mL

5.3 EQUIPOS

Tabla 3. Listado de equipos necesarios para el desarrollo de la práctica por pareja.

Equipos Cantidad
Balanza Analítica 1
Espectrofotómetro UV - VIS 1

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 CLAVES PARA EL EXITOSO DESARROLLO DEL LABORATORIO

✓ Encender el espectrofotómetro 20 minutos antes de realizar las lecturas

✓ Comenzar con la preparación de la muestra y de los estándares , ya que requieren un
tiempo adecuado para que la reacción se produzca completamente
✓ La preparación de los estándares, no requiere calentamiento solo las muestras
problema (lactosa anhidra y metilcelulosa)
✓ No exceder la temperatura de la estufa (100 grados centígrados), agitar y
procesar las muestras con precaución
✓ Realizar las mediciones de los patrones de las curvas de calibración y de la muestra
problema, empleando la solución procedente del beaker “B” como blanco (llevado al
aforo de 25 mL)

5.4 PREPARACIÓN DE CURVA DE CALIBRACIÓN PATRÓN DE SACAROSA

5.4.1 Prepare una solución patrón de sacarosa de 50 mg/mL utilizando un matraz

aforado de 10 mL

5.4.2 Tome 6 beakers de 100 mL, numérelos y agregue a cada uno el volumen de la
alícuota de solución patrón de sacarosa que le corresponde según la tabla 4

Tabla 4. Preparación de estándares para la curva de calibración.

Volumen del Equivalente en Contenido de Porcentaje de

estándar de peso, del estándar Carbono, en la carbono en
Beaker sacarosa de de sacarosa de solución de cada uno de los
50000 ppm 50000 ppm cada beaker beaker
(µL) (mg) (mg) (%)
Blanco 0 0 0 0
(B)
1 50 2.5

2 70 3.5

3 100 5

4 170 8.5

5 200 10

5.4.3 Para cada uno de los beakers siga el procedimiento a continuación:

5.4.4 Agregue 2.5 mL de la solución de dicromato de potasio y agite.
5.4.5 Añada cuidadosamente 5 mL de ácido sulfúrico concentrado y agitar.
5.4.6 Dejar la mezcla en reposo durante 30 minutos para completar la reacción.
5.4.7 Trasfiera a un balón aforado de 25mL y enrace con agua destilada
5.4.8 Filtre la solución obtenida para proceder a realizar la medición de absorbancia
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5.4.9 Mida la absorbancia de cada estándar a 590 nm y construya la curva de
calibración (Absorbancia vs % de Carbono)

5.5 PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

5.5.1 Tome 10 mg de lactosa anhidra y transfiéralos a un beaker de 100 mL.

5.5.2 Agregue 3 mL de la solución de dicromato de potasio y agite suavemente
5.5.3 Añada cuidadosamente 5 mL de ácido sulfúrico concentrado y agite.
5.5.4 Calentar en la estufa la muestra a 1000 C, por 45 minutos para completar la
reacción.
5.5.5 Retirar con cuidado de la estufa y dejar enfriar la solución con la muestra
5.5.6 Trasfiera a un balón aforado de 50 mL y afore con agua destilada
5.5.7 Filtrar la solución obtenida y realizar la medición de absorbancia a 590 nm.
5.5.8 Repita el mismo procedimiento con la metilcelulosa

6. CÁLCULOS Y PAUTAS PARA EL ANÁLISIS DE RESULTADOS

6.1 Realice una curva de calibración de absorbancia versus mg de carbono, determine la

ecuación de la recta y el R2
6.2 Determine el porcentaje de carbono en la lactosa anhidra y la metilcelulosa.
6.3 Realice una búsqueda bibliográfica y averigüe si en el método de Walkley Black se
oxida la totalidad del carbono orgánico.

7. REFERENCIA

B., D. V., S., L., B., M., & A., D. J. (2007). Walkley–Black analysis of forest soil organic
carbon: recovery, limitations and uncertainty. Soil Use and Management, 23(3), 221–
229. https://doi.org/10.1111/j.1475-2743.2007.00084.x
Carreira, D. (2004). CARBONO ORGÁNICO (Método de WALKLEY & BLACK). Ciencias
Ambientales, 4.
Skoog, D., Holler, J., & Crouch, S. (2008). Principios de analisis instrumental. (Cengage
Learning, Ed.) (6th ed.). México D.F.

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