1.12084.

0001 Utilizando la cubeta de 60 ml de Hellendahl (con ampliación), se mezclan a

partes iguales:

Reactivo 1 (Potasio hexacianoferrato(II) en solución) 30 - 40 ml

Microscopía Reactivo 2 (ácido clorhídrico) 30 - 40 ml

HEMATOGNOST Fe® La solución de tinción ha de ser desechada después de cada proceso de tin-
ción.
kit de tinción para visualizar hierro iónico libre (Fe ) 3+
El reactivo 3 del HEMATOGNOST Fe® - kit de tinción para visualizir hierro iónico
en células corporales libre (Fe3+) en células corporales utilizado está lista para el uso, la dilución de la
solución no es necesaria y empeora el resultado de la tinción así como la esta-
bilidad.

Producto sanitario para diagnóstico in vitro Técnica

El presente “HEMATOGNOST Fe® - kit de tinción para visualizir hierro iónico libre
(Fe3+) en células corporales” es utilizado para el diagnóstico celular en la medici-
na humana, se emplea en el examen hematológico y histológico de muestras de
origen humano. Se trata de un kit de tinción listo para el uso que, junto con otros
materiales de diagnóstico in vitro pertenecientes a nuestra cartera, hace evalua-
bles determinadas para el diagnóstico estructuras de destino (mediante fijación,
tinción, dado el caso contratinción, montaje) en material de examen hematológi-
co y histológico, como p. ej. frotis de sangre total y de médula ósea.
HEMATOGNOST Fe® es un kit de tinción para la realización de la reacción del
azul de Prusia en material hematológico e histológico.
El presente kit de tinción contiene todos los reactivos necesarios para la detec-
ción de hierro iónico libre.
Principio
En la reacción de azul de Prusia, el hierro iónico no ligado al grupo hemo (Fe3+)
reacciona con hexacianoferrato(II) potásico en solución clorhídrica. Se precipita en
forma de una insoluble sal compleja en las células sanguíneas, de médula ósea o
tisulares, localizándose de esta manera hierro celular libre.
4 Fe3+ + 3 K4Fe(CN)6 = Fe4[Fe(CN)6]3 + 12 K+
Para conseguir una diferenciabilidad visual máxima de los depósitos de hierro
en el citoplasma se realiza una contratinción en color rosa pálido del citoplasma
a través de una solución de rojo nuclear sólido. Para el caso de que se necesite
más información detallada acerca de la morfología celcular, también se podrá
contrateñir con cada uno de los procedimientos “clásicos” conocidos (Giemsa,
May-Grünwald, hemalumbre etc.).
La reacción del azul de Prusia también podrá ser aplicada como detección adi-
cional de hierr en preparados que ya hayan sido teñidos mediante los procedi-
mientos clásicos. En esto no se tendrá que contrateñir otra vez.
Material de las muestras
Como material de partida para todas las tinciones deberían utilizarse siempre y
exclusivamente frotis frescos y nativos de sangre o médula ósea.
Cortes de parafina de aprox 5 - 6 µm tomados de muestras de tejido
La realización de la reacción del azul de Prusia a una temperatura de 37 °C
proporciona una definición más nítida de las precipitaciones de color.
Tinción de preparados de frotis en la cubeta de tinción
Los portaobjetos deberían ser escurridos bien por goteo después de los diferentes
pasos de tinción, de esta manera se podrá evitar el innecesario arrastre de solu-
ciones.
Para conseguir un óptimo resultado de tinción, deberían respetarse los períodos
indicados.
Portaobjetos con frotis fijado y secado al aire
Solución de tinción (mezcla 1+1 de reactivo 1 y 2) 20 minutos
Agua destilada enjuagar
Reactivo 3 (Rojo nuclear sólido en solución) 5 minutos
Agua destilada enjuagar
Secar al aire (p. ej. durante la noche o a 50°C en el arma-
rio de secado)
Dado el caso, montar con medios de montaje acuoso (p. ej. Aquatex®) y
cubreobjetos.
Tinción de preparados histológicos en la cubeta de tinción
Desparafinar de forma habitual los preparados histológicos y rehidratar en serie
descendente de alcohol.
Los portaobjetos deberían ser escurridos bien por goteo después de los diferentes
pasos de tinción, de esta manera se podrá evitar el innecesario arrastre de solu-
ciones.
Para conseguir un óptimo resultado de tinción, deberían respetarse los períodos
indicados.
Portaobjetos con preparado histológico
Solución de tinción (mezcla 1+1 de reactivo 1 y 2) 20 minutos

Reactivos Agua destilada lavar con esmero

Art. 1.12084.0001 Reactivo 3 (solución de rojo nuclear sólido) 5 minutos
HEMATOGNOST Fe®
kit de tinción para visualizir hierro iónico libre (Fe3+) en células corporales Agua destilada enjuagar
Componentes del envase: Etanol 70 % 1 minuto
El kit de tinción contiene 4 frascos de 250 ml Etanol 70 % 1 minuto
Reactivo 1: HEMATOGNOST Fe® Potasio hexacianoferrato(II)
en solución 250 ml Etanol 96 % 1 minuto
Reactivo 2: HEMATOGNOST Fe® Ácido clorhídrico 250 ml Etanol 96 % 1 minuto
Reactivo 3: HEMATOGNOST Fe Rojo nuclear sólido en solución 2x 250 ml
®

Etanol 100 % 1 minuto

Preparación des muestras Etanol 100 % 1 minuto
La toma de muestra debe ser realizada por personal especializado.
Xileno o Neo-Clear ®
5 minutos
Preparados de frotis:
Se necesitan frotis de sangre o médula ósea finos, secados al aire y guardados Xileno o Neo-Clear® 5 minutos
como máximo durante 3 días.
Montar con Neo-Mount los preparados humedecidos con Neo-Clear®, o los
®
Los frotis han de ser secados al aire durante 30 minutos como mínimo, debién-
preparados humedecidos con xileno con p. ej. Entellan® Nuevo y cubreobjetos.
dose fijar éstos antes de la reacción citoquímica con metanol.

Fijación de los frotis sanguíneos o de médula ósea 3 minutos
secados al aire en metanol
Secar al aire
Preparados histológicos:
Desparafinar en forma típica los cortes y rehidratar en la serie decreciente de
alcoholes.
Todas las muestras deben tratarse de acuerdo con el estado de la tecnología.
Todas las muestras deben estar rotuladas inequívocamente.
Deben usarse instrumentos adecuados para la toma de muestras y en la prepa-
ración, y deben seguirse las instrucciones del fabricante para la aplicación / el
empleo.
Preparación del reactivo
Solución de tinción para frotis y cortes
Utilizar solamente soluciones recién preparadas.
Los preparados histológicos pueden ser montados y almacenados con medios
de montaje anhidros (p. ej. Neo-Mount®, Entellan®, DPX nuevo o Entellan® Nuevo)
y cubreobjetos después de la deshidratación (series de alcohol ascendentes) y
la clarificación con xileno o Neo-Clear®.
Para el análisis de preparados teñidos con un aumento microscópico >40x se
recomienda el uso de aceite de inmersión.
Resultado
Hierro libre (Fe3+) gránulos de color azul intenso
Núcleos celulares ligeramente rojo
Citoplasma rosa suave
Con la reacción de azul de Prusia es posible comprobar incluso cantidades de
tan sólo 0,002 µg de hierro en cortes de tejidos.
Evaluación
Con un microscopio con objetivo 100x (binocular, aceite de inmersión) se exami-
nan minuciosamente de 1000 a 2000 células de un frotis sanguíneo, en una sala
oscura. La reacción de azul de Prusia se caracteriza por un intenso color turque-
sa. Los siderocitos se determinan en ‰ respecto a los eritrocitos contados.
Para la evaluación de frotis de médula, se cuentan 100 precursores rojos nuclea-
dos. Además de la determinación cuantitativa de los sideroblastos, también hay
que considerar el tipo y la cantidad de los depósitos de hierro (ver abajo).
Valores normales
I. En la sangre periférica para el adulto el valor normal de siderocitos es del
0 - 3 ‰. Para recién nacidos es del 3 - 17 ‰.
II. En la médula el valor normal de sideroblastos es del 20 - 40 %.
Indicaciones sobre alteraciones patológicas en el contenido de
hierro
Aumento
En caso de anemias sideroacrésticas y hemolíticas,
anemia perniciosa,
intoxicación con plomo,
esplenecomía.
Una sobrecarga masiva de hierro en el organismo lleva a la detección de los
llamados sideroblastos anulares. Aquí los depósitos de hierro son gruesos y
ordenados en forma anular en el citoplasma de los precursores eritrocitarios.
Las células reticulares también son Fe3+-positivas.
Disminución
La carencia de hierro lleva a una disminución de sideroblastos.
Las células reticulares están casi libres de depósitos de hierro.
Histología
Valores aumentados de ferritina en suero indican hemocromatosis. Tal sospecha
ha de ser demostrada por medio de una biopsia de hígado con determinación
del contenido de hierro en el hígado. Aquí basta en general la determinación
semicuantitativa con la reacción del azul de Prusia. Las células principalmente
afectadas son las células del parénquima y epiteliales del conducto biliar.
Notas técnicas
El microscopio usado debería corresponder a los requisitos de un laboratorio de
diagnóstico médico.
Si se utilizan aparatos automáticos de tinción, deberán tenerse en cuenta las
instrucciones de operación del fabricante, tanto del aparato como del software.
Eliminar el aceite de inmersión en exceso antes de archivar.
Reactivos auxiliares
Art. 100121 Rojo nuclear en solución de aluminio sulfato 500 ml
al 0,1%
para microscopía
Art. 100380 ISOSLIDE® Hierro Preparados de control 25 tests
con tejido de referencia para la detección de
hierro libre en tejido histológico
Art. 100579 DPX nuevo 500 ml
medio de montaje anhidro
para microscopía
Art. 100974 Etanol desnaturalizado con aprox. 1 l, 2,5 l
1 % de metiletilcetona
para análisis EMSURE®
Art. 103699 Aceite de inmersión según ISO 8036 frasco gotero de
para microscopía 100 ml
Art. 104699 Aceite de inmersión frasco gotero de
para microscopía 100 ml, 100 ml,
500 ml
Art. 106009 Metanol para análisis EMSURE® 1 l, 2,5 l, 5 l
ACS,ISO,Reag. Ph Eur
Art. 107961 Entellan® Nuevo 100 ml, 500 ml,
medio de montaje rápido 1l
para microscopía
Art. 108298 Xileno (mezcla de isómeros) 4l
para istología
Art. 108562 Aquatex® frasco gotero de
(medio de montaje acuoso) 50 ml
para microscopía
Art. 109016 Neo-Mount® frasco gotero de
medio de montaje anhidro 100 ml, 500 ml
para microscopía
Art. 109843 Neo-Clear® (sustituto de xileno) 5l
para microscopía
Clasificación de substancias peligrosas
Art. 1.12084.0001
Tener en cuenta la clasificación de substancias peligrosas en la etiqueta y las
indicaciones en la ficha de datos de seguridad.
La ficha de seguridad está disponible en el sitio web y a solicitud.

Diagnóstico Componentes principales de los productos

Los diagnósticos deberán ser establecidos solamente por personas autorizadas
Art. 1.12084.0001
y cualificadas.
Deberán emplearse terminologías vigentes. Reactivo 1
Deberán elegirse y realizarse ensayos ulteriores según métodos reconocidos. C6FeK4N6 x 3 H2O 4,78 %
Cada aplicación debería implicar controles adecuados (p. ej. ISOSLIDE® Hierro,
art. 1.00380.0001) para descartar resultados erróneos. Reactivo 2
HCl 5%
Almacenamiento
Reactivo 3
Guardar el HEMATOGNOST Fe® - kit de tinción para visualizir hierro iónico libre
(Fe3+) en células corporales de +15 °C a +25 °C. C.I. 60760 0,1 %

Estabilidad Literatura
El HEMATOGNOST Fe - kit de tinción para visualizir hierro iónico libre (Fe ) en
® 3+ 1. Romeis - Mikroskopische Technik, Editors: Mulisch, Maria, Welsch, Ulrich,
células corporales puede usarse hasta la fecha de caducidad indicada. 2015, Springer-Verlag Berlin Heidelberg
Después de abrir el frasco por primera vez, el contenido almacenado entre +15 °C 4. Theory and Practice of Histological Techniques, John D Bancroft and Marilyn
y +25 °C es utilizable hasta la fecha de caducidad indicada. Gamble, 6th Edition
Los frascos deben mantenerse siempre bien cerrados. 3. Conn’s Biological Stains: A Handbook of Dyes, Stains and Fluorochromes for
Use in Biology and Medicine, 10th Edition, (ed. Horobin, R.W. and Kiernan,
J.A). Bios, 2002
Capacidad
El kit de tinción es suficiente para 6 - 8 tinciones con hasta 16 preparados.
En las cubetas de 60 ml de Hellendahl con ampliación (corresponde a una
preparación de tinción) pueden teñirse simultáneamente hasta 8 portaobjetos, y,
colocados reverso frente a reverso, hasta 16 portaobjetos.

Notas sobre el empleo

Solamente para uso profesional.
Para evitar errores, la aplicación debería ser realizada por personal especializado.
Deben cumplirse las directivas nacionales sobre seguridad en el trabajo y ase-
guramiento de la calidad.
Deben emplearse microscopios equipados de acuerdo con el estándar. Consult instructions Manufacturer Catalog number Batch code
for use
Protección contra infecciones
Debe observarse a toda costa una protección eficaz contra infecciones de acuer-
do con las directivas de laboratorio.
Caution, consult Use by Temperature
Indicaciones para la eliminación de residuos accompanying documents YYYY-MM-DD limitation
El envase debe ser eliminado de acuerdo con las directivas válidas de elimina-
ción de residuos. Status: 2018-11-01
Las soluciones usadas y las soluciones caducadas deben eliminarse como
desecho peligroso, debiéndose cumplir las directivas locales de eliminación de
residuos. Podrá pedirse información sobre los procedimientos de eliminación Merck KGaA, 64271 Darmstadt, Germany
bajo el Quick Link “Hints for Disposal of Microscopy Products” en Tel. +49(0)6151 72-2440
www.microscopy-products.com. Dentro de la UE tiene validez el REGLAMENTO www.microscopy-products.com
(CE) Nº 1272/2008 sobre la clasificación, el etiquetado y el envasado de sustan-
cias y mezclas, por el que se modifican y derogan las Directivas 67/548/CEE y EMD Millipore Corporation, 290 Concord Road, Billerica,
1999/45/CE y se modifica el Reglamento (CE) Nº 1907/2006. MA 01821, USA, Tel. +1-978-715-4321