Nombres: Claves: Equipo: 5

Ortega Albor Andrea Saray. 7

Sánchez Hernández Eva Patricia. 14

Práctica 7. Cromatografía en columna.

Objetivos académicos:
• Comprender la técnica de cromatografía en columna, sus características y los factores que en
ella intervienen.
• Emplear la técnica de cromatografía en columna para la separación de un compuesto orgánico.
• A través de cromatografía en capa fina controlar la cromatografía en columna.

Proceso experimental:
I. PURIFICACIÓN DEL PRINCIPIO ACTIVO DE UN MEDICAMENTO.
Se colocó la columna de cromatografía en un soporte con ayuda de unas pinzas de tres dedos,
de tal forma que se encontró totalmente vertical y con una altura al tamaño de los tubos de
ensayo.
Para empacar la columna, se colocó la llave de la columna en posición de cerrado. Se introdujo
hasta el fondo un pequeño pedazo de algodón con ayuda de una varilla de metal, se agregaron
5mL de eluyente (AcOEt) y se presionó suavemente el algodón para eliminar las burbujas. Se
preparó una suspensión de sílica gel para la columna, 6 g en 30 mL de eluyente y se agitó la
suspensión hasta que no se observaron burbujas en el aire. Con ayuda de un embudo de vidrio
se vertió la suspensión en la columna lo más rápido posible y se golpeó ligeramente la columna
con los dedos para que el empaquetamiento fuera uniforme. Se abrió la llave para eliminar el
exceso de disolvente cuidando de no dejar secar la sílica gel.
Se adicionó por la parte superior de la columna 60 mg de paracetamol, y con mucho cuidado se
adicionó un poco del eluyente (AcOEt), para bajar la cantidad de paracetamol que quedó pegado
por las paredes en la columna cromatográfica y se adicionaron 10 mL de acetato de etilo.
Se colectaron las fracciones (eluato) en los tubos de ensayo, se verificó la separación realizando
cromatoplacas. En cada cromatoplaca se aplicaron 4 de las fracciones y un testigo.
Se eluyeron las cromatoplacas en una mezcla del eluyente utilizado y se observó en cuáles
fracciones había presencia del compuesto separado revelando con una cámara de UV.
Para recuperar el principio activo se destiló el disolvente por medio de una destilación simple
usando como fuente de calentamiento una parrilla.

Costos equipo:
-Parrilla con agitación magnética. $15,406.76 - $22,553.49
-Cámara de UV. $6,210.51

Cálculos:
Factor de retención (Rf)
𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑢𝑒𝑠𝑡𝑜
Rf= 𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑜𝑟𝑖𝑔𝑒𝑛−𝑓𝑢𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑑𝑒𝑙 𝑑𝑖𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒

Fracciones 1 a 4 de cafeína:
0.9 0.8 0.7
Rf= 4.9
= 0.18 Rf= 4.9
= 0.16 Rf= 4.9
= 0.14
Fracciones 5 a 8 de cafeína:
1.8 1.7
Rf= 5.3
= 0.33 Rf= 5.3
= 0.32

Fracciones 1 a 4 de paracetamol:
0.5 0.6
Rf= 4.9
= 0.1 Rf= 4.9
= 0.12

Fracciones 5 a 8 de paracetamol:
2.0 2.1
Rf= 5.6
= 0.35 Rf= 5.6
= 0.37

Resultados:
8 fracciones colectadas de cafeína y 8 fracciones de paracetamol:
Cafeína → fracciones 1 a 4 | Cafeína → fracciones 5 a 8

Paracetamol →fracciones 1 a 4 | Paracetamol →fracciones 5 a 8

Análisis de resultados:
Se pudo inferir que la mayor parte del contenido de la muestra problema era paracetamol.
Incluso en las cromatoplacas cuya muestra testigo fue la cafeína pudimos observar una salida de
paracetamol (placas 5 a 8).

Observamos que las fracciones tuvieron una tendencia a interaccionar con la fase estacionaria
(gel de sílice para ccf), la cuál es muy polar. Esto tendría sentido ya que el paracetamol, que es
una sustancia polar, va a preferir interaccionar más con otra especie polar, mientras que la
cafeína (que es menos polar) habría subido junto con el eluyente (acOEt).
En las primeras cuatro fracciones recolectadas, tanto de las cromatoplacas de cafeína como las
de paracetamol, el Rf arrojó resultados que indican que en dichas placas no hubo una
separación de los componentes efectiva, mientras que las placas 5 a 8 (de cafeína y de
paracetamol) arrojaron un Rf que entra en el promedio aceptable que comprende valores entre
0.3-0.5, mostrando que en éstas si hubo una separación de componentes y que dicho
componente fue paracetamol. El Rf arrojará un resultado menor (comprendido dentro de los
valores aceptables) para sustancias que sean más polares, en este caso el paracetamol.

No se realizó una destilación simple debido a la falta de tiempo pero de haberse realizado
habríamos obtenido una cierta cantidad de paracetamol con el cuál determinar el rendimiento.
Además, si se hubiese querido obtener cafeína se debieron recolectar más eluatos y realizar las
respectivas pruebas empleando la cromatografía en capa fina.

Conclusiones:
Una vez realizada la práctica se entendió la técnica de la cromatografía en columna, su
importancia y para que nos es útil, así como cuáles son las características que la determinan y
cuales son los factores que intervienen en ella. Asimismo, se logró hacer una buena y correcta
separación de la muestra la cual se determinó que era paracetamol, ayudándonos con la
cromatografía en capa fina para saber en qué fracciones de eluatos estaba nuestra
muestra.

Apéndice II: Cuestionario

1. Indique algunas de las aplicaciones de la cromatografía de adsorción.
·Método analítico para la separación de gases o líquidos y sólidos que pasen fácilmente a
vapor.
·Análisis industriales.
·Forenses bromatológicos, toxicológicos o clínicos.
·Contaminación ambiental.

2. Diga cuál es la diferencia entre una cromatografía en capa fina y la de columna.

La única diferencia es que la cromatografía en capa fina se realiza en una placa, se
observa según el tamaño “avanzó” cada muestra; por otro lado, la cromatografía en
columna se empaqueta en una columna.

3. ¿Qué debe hacerse para encontrar el eluyente adecuado para un compuesto que se
purificara en cromatografía en columna?
Ésta se elige mediante la cromatografía en capa fina, los patrones de elución en capa fina
son similares a los de cromatografía en columna, buscamos primero una fase que logre
un buen corrimiento de la mezcla y luego ajustamos la polaridad disminuyendo la
proporción del disolvente más polar para que el compuesto de interés tenga un Rf entre
0.3 y 0.5.

4. ¿Por qué es necesario realizar una cromatografía en capa fina a los eluatos obtenidos de
la columna cromatográfica?
Porque nos ayuda a verificar que toda la muestra problema haya salido de la columna, ya
que no hay ninguna manera de verificarlo sin las cromatoplacas y su detección en
cámaras UV.
 5. Escriba una lista de eluyentes utilizados en cromatografía en columna en orden de
polaridad creciente. Anote su bibliografía.
-Hexano
-Tetraclorometano
-Cloroformo
-Diclorometano
-Acetato de etilo
-Acetona
-2-Propanol
-Metanol
-Agua
Bibliografía: (). Universidad Autónoma Metroṕolitana. Cromatografía. Fundamentos.
Recuperado de: http://www.qfa.uam.es/qb/practicas/P6-guion.pdf

Apéndice III: Tablas de IR.

Sustancia Estructura Grupo Bandas IR IR
funcional

Acetato de etilo -Cetona -1750

(C4H8O2) -Éter -1230
-Alcano -3000

Hexano -Alcano -3000

(C6H14)

Bibliografía:
● S/a., RSULABSUPPLY, parrilla de calentamiento y agitación IKA C-MAG HS10 digital,
http://www.rsulab.mx/product_info.php/cPath/53_80_274/products_id/1135/osCsid/48c7b84d3b101
8aca3039a9cdfc80b90
● S/a., La cromatografía y sus aplicaciones,
https://exa.unne.edu.ar/quimica/quimica.analitica/qa_arch_matdid/arch_teoria/Temas%20teoricos/
Profesorado/Cromatografia.pdf