EMIT

La técnica de inmunoensayo multiplicado por enzimas (EMIT) es un método común para la

determinación cualitativa y cuantitativa de drogas terapéuticas y recreativas y ciertas
proteínas en suero y orina.

Es un inmunoensayo en el que un fármaco o metabolito en la muestra compite con un

fármaco / metabolito marcado con una enzima para unirse a un anticuerpo. Cuanto más
medicamento haya en la muestra, más enzima libre habrá y la mayor actividad enzimática
provoca un cambio de color.
Un ensayo EMIT es un formato competitivo en donde la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa
(G6PDH) marcada con hapteno compite con el fármaco libre en una muestra o calibrador
para unirse a un anticuerpo específico generado contra el objetivo hapteno. Si el hapteno
G6PDH se une al anticuerpo, hay un cambio conformacional en la enzima que conduce a
una disminución de la actividad. Este cambio en la actividad es proporcional a la
concentración de fármaco libre presente en la muestra.

CEDIA
Algo comparable en principios operativos, CEDIA (inmunoensayo de donantes de enzimas
clonadas) se basa en la actividad modulada de la beta-galactosidasa mutante. Desarrolló
una forma genéticamente modificada de beta-galactosidasa que existe como dos
componentes.
Un fragmento se llama aceptor enzimático (EA) y el otro se llama donante enzimático (DE).
La enzima mutante se vuelve enzimáticamente activa cuando tanto la DE como la EA están
presentes. Se puede desarrollar un ensayo homogéneo conjugando un hapteno con el DE.
El hapteno-ED competirá con el fármaco libre en presencia de anticuerpos contra el
hapteno. Cuando hay altas concentraciones de hapteno-fármaco objetivo, el hapteno-ED
está disponible para unirse al EA y un aumento de la betagalactosidasa
será detectado.
Fluorescencia
El conjugado hapteno-fluoresceína gira rápidamente cuando no está unido a un anticuerpo.
Cuando se une al anticuerpo, la rotación se reduce drásticamente en comparación con la
molécula no unida. Para generar la señal de ensayo, un fluorímetro ilumina la luz a la
longitud de onda de excitación para fluoresceína a través de un filtro polarizador vertical.
Las moléculas de hapteno-fluoresceína no rotadas que giran rápidamente emiten luz en un
plano diferente al de la luz incidente.
Sin embargo, las moléculas de fluoresceína de hapteno unidas a anticuerpos relativamente
estacionarias devuelven la luz en un plano similar. Esto se detecta a través del filtro
polarizador. El fármaco agregado a través de la muestra compite por unirse al anticuerpo
con el hapteno marcado con fluoresceína, reduciendo así la cantidad de fluoresceína unida
al anticuerpo, lo que da como resultado que se detecte menos fluorescencia emitida a
través del filtro polarizado. Los ensayos de polarización de fluorescencia requieren equipo
especializado y son la base del sistema Abbott ADx.
KIMS
En la tecnología KIMS, las micropartículas de látex de poliestireno se han recubierto con un
fármaco conjugado.
Estas partículas se dispersan en solución, después de lo cual se agregan la muestra y los
anticuerpos al conjugado del fármaco (hapteno). En presencia de altas concentraciones de
fármaco, los sitios de unión de anticuerpos están ocupados por el fármaco libre y se
produce una baja cantidad de aglutinación. En presencia de bajas concentraciones de
fármaco objetivo, los anticuerpos se unen entre las partículas y comienzan a aglutinarse en
grandes grupos. Estos grupos dispersan la luz. Por lo tanto, el cambio en la señal es
inversamente proporcional a la concentración del fármaco objetivo libre en la muestra.