4.

4
ELECTROFORESIS CAPILAR

Adrián Espinal. 0827108. adferes@hotmail.com

Vanessa Morales García.0824540. sweetvane89@hotmail.com
Universidad del Valle. Facultad de Ciencias Naturales y Exactas.
Universidad Santiago de Cali, Mayo 29 de 2011
del Valle

RESUMEN 4.0

Se cuantificó Sodio y Potasio en una bebida energizante por medio de electroforesis capilar. Para
+
esto se preparó una curva de calibración para el K de (2.00±0.024, 3.00±0.051, 7.00±0.18,
+
10.0±0.10) ppm y para el Na de (2.00±0.024, 4.00±0.049, 8.00±0.051, 10.0±0.030) ppm;
posteriormente se preparó la muestra, para esto se tomó un volumen de 1.5±0.02mL de sodio y
3.5 ±0.04 mL de potasio. Finalmente las soluciones se filtraron e inyectaron en el equipo de
    +
electroforesis. Obteniéndose una concentración de 1.113 ± 1.697  para el K y
+
de 14.648 ± para el Na .

DATOS, CÁLCULOS Y RESULTADOS 5.0

Preparación de la curva:

200 ± 0.4249 #  !" 1 !" 1  !$ 58.45# !$

0.1 ± 8 × 10   ó  !" × × × ×
 23.0# !" 1 !" 1 !$

1#
× = '. '(') ± '. '''*+ ,-./
1000#

50 ± 0.5234 #  1 " 1 1 " 1  1$ 74.55# 1$ 1#

0.1 ± 8 × 10−5   ó  1 " × × × × ×
 39.10# 1  1 " 1  1$ 1000#

100#  ó
× = '. ''2() ± '. '''* + 3./
99.5# 1$
+
Tabla 1. Concentración y áreas para el K

CONCENTRACIÓN (ppm ) ÁREA

2.00±0.024 0.084114±0.0001

3.00±0.051 0.19268±0.0001

7.00±0.18 4.4966±0.0001

10.0±0.10 7.1211±0.0001

Muestra 3.8324±0.0001
 Curva Regular (K+)
8
7 y = 0,8214x - 1,1107
6 R² = 0,9805
5
Área

4
3
2
1
0
0 5 10 15
Concentración (ppm)

Gráfica 1. Curva regular de calibración para el Potasio

Ecuación de la línea recta:

3.8324±0.0001=40.8214±0.26045X+(-1.1106±1.6573)

Despejando se obtuvo:

X=6.0907±9.29172

mg 25.00ml±0.04 6+
6.0907 L × =43.505 ± 66.371
371 7
3.500ml±0.01

+
La concentración hallada de K en la muestra en miliequivalentes por litro fue de:

6;/; <=>;?-/<@A<B
*. **8 ± *. 92: 7

+
Tabla 2. Concentraciones y áreas del Na

CONCENTRACIÓN (ppm) ÁREA

2.00±0.024 6.1897±0.0001
4.00±0.049 7.4321±0.0001
8.00±0.051 12.8171±0.0001
10.0±0.030 16.404±0.0001
Muestra 6.6195±0.0001
 Curva Regular (Na+)
18
16 y = 1,2907x + 2,9666
14 R² = 0,9793
12
10
Área

8
6
4
2
0
0 5 10 15
Concentración (ppm)

Gráfica 2. Curva regular de calibración para el Sodio

Ecuación de la línea recta:

6.6195±0.0001=41.2906±0.42145X+(2.9666±2.8582)

Despejando se obtuvo:

X=2.8301±2.87901

mg 25.00ml±0.04 25.00ml±0.04 6+
2.8301 L × × =336.917 ±341.74
341.74 7
3.500ml±0.04 1.500ml±0.02

+
La concentración hallada de Na en la muestra en miliequivalentes por litro fue de:

6;/;<=>;?-/<@A<B
*C. 99 ± *C. ): 7
 4.0
DISCUSIÓN DE RESULTADOS
+ +
La concentración hallada para el K fue de 1.113 ± 1.697  / y para el Na de
14.648 ±   / y la reportada en la etiqueta de la muestra era de 18
miliequivalentes/L para el sodio y de 2.6 miliequivalentes/L para el potasio. Las concentraciones
+ +
halladas de K y de Na respecto a las reportadas en la bebida energética fueron bajas. Esto se
pudo deber posiblemente a una masa grande de algunos iones que hicieron que disminuyera la
velocidad y que algunos de los estos se desplazarán más rápido que otros generando
interferencias. Al utilizarse un detector UV se debe tener en cuenta que existe una gran
dependencia de la absorbancia con el camino óptico según la ley de Beer, por tanto la sensibilidad
de los detectores puede estar limitada debido a las pequeñas dimensiones del capilar y el pequeño
camino óptico que ofrece. También se pudieron generar errores causados por turbidez o formación
de coloides haciendo que la luz se dispersara antes de llegar al monocromador conllevando a una
disminución en el rango lineal de la curva. Por otro lado durante la inyección la difusión real no es
instantánea ni la entrada del capilar es perfectamente perpendicular a su eje, por tanto el perfil de
entrada de la muestra puede alterar en parte este frente rectangular e introducir dispersiones
adicionales. Además pueden generarse dispersiones durante la retirada y acoplamiento del capilar
que contribuyen a diferencias de tensiones superficiales, de densidades o de viscosidades entre la
1
muestra y el tampón, a presiones de inmersión o a turbulencias . Debido a la existencia de
gradientes axiales de concentración en la interfase tampón – analito la difusión de la muestra es
inevitable; existe una diferencia de movilidades entre la muestra y los iones del tampón que se
encuentran cerca de la muestra. Este hecho origina una diferencia de conductividad entre la zona
del analito y la zona inmediata al tampón que da lugar a un ensanchamiento de la base del pico;
este ensanchamiento es directamente proporcional a la concentración del analito y depende de las
movilidades del analito, del contra-ión y del contra – catión del tampón. Otro factor que influye
desfavorablemente se debe al calentamiento por el efecto Joule de la disolución dentro del capilar
que provoca un rango de temperaturas que no es plano y que debido al efecto de la temperatura
sobre la movilidad, mueve con diferentes velocidades los analitos según su disposición radial
pudiendo provocar dispersión extra de los picos.
CONCLUSIONES 4.5

• La precisión y exactitud del método, sumados a la simplicidad del análisis y de la preparación

de las muestras hacen que sea un método útil de rutina y control.

• El empleo de volúmenes pequeños de electrolito de corrida, que además no es tóxico,

contribuye a su aceptación por el bajo costo operativo y bajo impacto en la contaminación
ambiental

• La temperatura debe permanecer a un valor constante ya que si ésta disminuye aumenta la

viscosidad y por ende disminuye la velocidad, además la temperatura influye en el pH y el pKa
de cada grupo iónico y los iones de la disolución tampón. Por tanto un aumento en ésta
disminuye el flujo electrosmótico.

• Es necesario hacer uso de las soluciones tampón para mejorar la resolución, ya que éstas
permiten mantener a los iones del mismo tipo juntos en el mismo espacio y en la misma
dirección de migración haciendo que el intervalo sea lo más estrecho posible, haciendo que la
carga permanezca igual sobre cualquier ácido o base.

• Los valores de pKa o de movilidades entre las soluciones deben ser suficientemente grandes
para que la separación de los analitos sea completa.

PREGUNTAS 4.2

1. De acuerdo al orden de elución de los cationes analizados, las fórmulas que rigen la
electroforesis y las condiciones establecidas demuestre el orden de aparición del calcio
y magnesio.

R//.

La movilidad electroforética es directamente proporcional a la carga iónica del analito e

inversamente proporcional a los factores de retardo por fricción. Si dos especies difieren en carga,
el de mayor carga sentirá mayor fuerza impulsora y habrá una velocidad de migración más rápida.
En el caso de iones con la misma carga, la fuerza de retardo por fricción del analito se determina a
partir del tamaño y de la forma del ion y de la viscosidad del medio en que se desplace.
En base a esto concluimos que el primero en eluir será el catión más pequeño ya que ambos
tienen la misma carga, entonces el magnesio tendrá una fuerza de fricción menor y la velocidad de
migración será mayor y llegará al detector más rápido que el calcio. Y que paso con el Sodio y
Potasio entonces?

2. ¿Por qué el tipo de bebidas analizadas deben contener esta cantidad de electrolitos en
sus formulaciones?
R//.
En algunos casos, el agua no basta únicamente para hidratar, por lo que se diseñaron las bebidas
hidratantes con electrolitos. Los más conocidos son sodio, potasio, magnesio y cloro. Juegan un
papel muy importante en la contracción muscular, los impulsos nerviosos y en mantener un
adecuado nivel de líquidos corporales. El potasio, al disminuir, se asocia con una debilidad
muscular.

3. Cómo se afectaría las separaciones si incrementamos:

a) El pH
b) la longitud del capilar
c) el potencial aplicado

R//.

a) pH: Durante una electroforesis, se produce una electrolisis del agua por acción del campo
eléctrico, lo cual genera protones en la proximidad del ánodo e iones hidroxilo en el cátodo. El
tampón es, por esta razón, esencial durante la electroforesis para evitar que el ánodo se acidifique
y el cátodo se haga más básico, pero no debe afectar a las moléculas a separar. Además, la fuerza
iónica condiciona la movilidad electroforética de las substancias a separar, ya que influye en su
esfera de solvatación y en la conductividad de todo el sistema, por lo tanto, es necesaria una
fuerza iónica suficiente para mantener el pH y la conductividad durante todo el proceso, pero no
muy elevada, ya que llegaría a interferir en el sistema. Normalmente, se emplean tampones con
fuerzas iónicas moderadas (0.05-0.10M), siendo el pH la característica que debe ser más
controlada, puesto que determina la carga de la muestra.

b) La longitud del capilar: Una zona de la muestra excesivamente larga determina el límite para
el valor máximo de N. Sin embargo, por simplificación se dice que si la longitud de la zona es 3 mm
o menor en un capilar de 100 cm, puede generalmente ignorarse esta contribución en el
ensanchamiento de la banda. Zonas más largas de muestras con analitos cargados se pueden
acortar electrofocalizando con un aumento concomitante en la eficiencia. A mayor longitud mayor
tiempo de separación.

c) El potencial aplicado: Se define como el campo eléctrico, la velocidad de avance es

directamente proporcional a él, cuanto mayor sea, mayor será la velocidad de migración. Las
electroforesis se consideran de bajo voltaje si se realizan entre 10-500 voltios (la mayoría) y de alto
voltaje si se realizan entre 500-10.000 voltios. Al incrementarse se obtiene tiempos de análisis más
cortos pero habría una disminución de la resolución.

BIBLIOGRAFÍA 4.0
1. http://tdx.cat/bitstream/handle/10803/6423/04cap1.pdf?sequence=4
2. SKOOG, D.A. Principios de análisis instrumental. 6 ed. México. Editorial Cengage
Learning. 2000. pp. 868 – 873.
3. RUBINSON, K., RUBINSON J. Análisis Instrumental. Madrid. Editorial Prentice – Hall.
2001. p. 720. pp. 733 – 735. pp. 736 – 737
4. http://www.uam.es/personal_pdi/ciencias/manchi/elec-cap/Apuntescurso.pdf

Resume 5% 4,0 0,20

Datos, càlculos y resultados 30% 5,0 1,50
Discuciòn de resultados 30% 4,0 1,20
Respuestas a la pregunta 20% 4,2 0,84
conclusiones 10% 4,5 0,45
Referencias 5% 4,0 0,20
Nota del trabajo 4,39
Descuento por tiempo de entrega 0
Descuento por tiempo formato 0
Descuento por cifras significativas 0
Nota final 4,39