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Daiky Valenciaga, Bertha Chongo


La pared celular. Influencia de su naturaleza en la degradación microbiana ruminal de los forrajes
Revista Cubana de Ciencia Agrícola, vol. 38, núm. 4, 2004, pp. 343-350,
Instituto de Ciencia Animal
Cuba

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Revista Cubana de Ciencia Agrícola,


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Cuba

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Proyecto académico sin fines de lucro, desarrollado bajo la iniciativa de acceso abierto
Revista Cubana de Ciencia Agrícola, Tomo 38, No. 4, 2004. 343

La pared celular. Influencia de su naturaleza


en la degradación microbiana ruminal de los forrajes
Daiky Valenciaga y Bertha Chongo
Instituto de Ciencia Animal, Apartado Postal 24, San José de las Lajas, La Habana
Correo electrónico: dvalenciaga@ica.co.cu

En el artículo se revisan investigaciones recientes que han permitido cambiar la noción sobre la estructura
rígida y estática asignada a la pared celular, por la de una extensión virtual del citoplasma. Además, se
discuten aspectos de su naturaleza química, referentes a la composición y organización de sus componentes
individuales que controlan su estructura y función, así como la influencia de su naturaleza en el proceso de
digestión ruminal. Estos estudios son imprescindibles para poder desarrollar procedimientos conceptuales
idóneos y propios de nuestra zona tropical. Se demuestra que la estructura de la pared celular vegetal es muy
compleja y variable, tanto química como histológicamente y es la que condiciona el modo de ataque
microbiano a los polisacáridos estructurales, y en último término, el ritmo y extensión de la degradación
microbiana ruminal. Estos estudios conducen a un manejo más eficiente de los pastos y forrajes que
permitirán lograr mayor sostenibilidad en nuestros agroecosistemas.
Palabras clave: forrajes, pared celular, naturaleza, estructura y composición química, digestión microbiana
ruminal.

INTRODUCCION

La transformación de los pastos y otros tienen sólo de 30 a 40 % de la energía digestible


alimentos en celulosa en nutrimentos de alta consumida de la pared celular del forraje
calidad, por parte de los rumiantes, es de gran (Ramírez et al. 2002). Se ha informado que cuan-
importancia para el sustento de estos animales do los animales consumen niveles elevados
y también es de gran significación económica. de forraje con alta concentración de pared ce-
Este proceso ocurre gracias a que poseen lular presentan una baja digestibilidad y, por lo
un estómago pluricavitario, donde habita una tanto, una disponibilidad de energía limitada
microflora y microfauna extremadamente diver- (Ramírez et al. 2002 y Forano y Vera 2003).
sa y abundante, con predominio de poblacio- Uno de los problemas que se presenta en
nes fermentativas de bacterias, protozoos y la alimentación del ganado con pastos y forra-
hongos anaeróbicos; cuya acción simbiótica jes, especialmente con gramíneas tropicales,
hace posible la digestión de las paredes celu- es la subutilización de los carbohidratos es-
lares de las plantas, así como la obtención de tructurales del material vegetal como fuente
energía de materiales no aprovechables en la energética, lo que impide el uso óptimo de los
alimentación humana y de otras especies nutrientes presentes en la dieta, y provoca una
(Forano y Bera 2003). disminución en la productividad del ganado.
Aproximadamente del 35 al 80 % de la ma- La digestión microbiana de los polisacári-
teria orgánica de los tejidos vegetales está con- dos estructurales en el rumen se lleva a cabo
tenida en la pared celular, la cual proporciona en dos etapas fundamentales.
rigidez estructural a la planta. Sin embargo, los • La colonización de los sustratos que lle-
rumiantes que dependen exclusivamente del gan al rumen y la adhesión íntima de los
consumo de las plantas en libre pastoreo, ob- microorganismos a estas estructuras vegetales.
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• La acción enzimática sobre dichos sustra- Dehoroty y Tirabasso (1998), Forsberg et al.
tos, independientemente de la posible utiliza- (2000) y Omed et al. (2000).
ción de los productos resultantes. Sin embargo, a pesar de la importancia de la
La magnitud de estos procesos está ínti- naturaleza de la pared celular vegetal, en la
mamente relacionada con la naturaleza de la degradación ruminal de los polisacáridos es-
pared celular vegetal, las características de la tructurales, son escasos los estudios de la in-
población microbiana implicada en los mismos fluencia de la composición, organización y
y las condiciones del ambiente ruminal para conformación de la pared celular en este pro-
favorecer o limitar estos procesos (Forsberg ceso de digestión ruminal, principalmente en
2000). las gramíneas tropicales. Estos estudios son
En la década pasada se hicieron revisiones imprescindibles para poder desarrollar proce-
detalladas y actualizadas de estos dos últimos dimientos conceptuales idóneos y apropiados
aspectos (características de la población micro- para el trópico, de manera que permitan mane-
biana y condiciones del ambiente ruminal). jar los pastos y forrajes más eficientemente de
Entre estas se destacan las de Evans et al. lo que se hace en la actualidad y así lograr
(1994), Mansur (1996), Fondevila (1998), mayor sostenibilidad de los agroecosistemas.

GENERALIDADES DE LAPARED CELULAR

Una de las características distintivas de las tos pécticos (unión de moléculas de ácido
células vegetales es la presencia en ellas de la galacturónico con ácido péctico e iones metálicos).
pared celular, la que protege su contenido ce- La pared primaria, presente en la mayoría
lular, proporciona la forma y rigidez a la estruc- de las células vegetales, se forma inmediata-
tura de la planta, provee el medio para la circu- mente después de la división celular, antes de
lación y distribución del agua, minerales y otras que la célula complete su crecimiento. Está aso-
moléculas pequeñas y contiene moléculas es- ciada a protoplastos vivos, por lo que los cam-
pecializadas que regulan el crecimiento y pro- bios que experimenta son reversibles (Vidart
tegen a la planta de las enfermedades (Williams 2003). Por su parte, la secundaria se desarro-
2003). lla entre la pared primaria y la membrana plas-
La pared celular está constituida por dos mática, cuando la célula detiene su crecimien-
fases: fase fibrilar o esqueleto y fase amorfa o to y alcanza su máximo volumen. Es fuertemente
matriz (González 2003). refringente al microscopio debido a la alta pro-
La fase fibrilar está formada por celulosa porción de celulosa (Ohara et al. 1998).
que se combina en una disposición muy orde- Estas paredes se desarrollan en una se-
nada (mediante puentes de hidrógeno) que le cuencia espacial y se diferencian en cuanto a
otorga propiedades cristalinas, formando la disposición de las microfibrillas y en la com-
fibrillas elementales que se reúnen en posición de la matriz (Carpita y Gibeaut 1998 y
microfibrillas, visibles al microscopio electró- González 2003).
nico. La fase amorfa está formada por hemicelu- González (2003) y Vidart (2003) señalan que
losas, compuestos pécticos y glucoproteínas. en la pared primaria es dominante la matriz
Se describe que la pared celular se puede amorfa, formada por hemicelulosas y polisa-
dividir en tres partes fundamentales: la sus- cáridos no celulósicos, mientras que la fase
tancia intercelular o lámina media, la pared pri- fibrilar está reducida al 8-25 %. En la pared se-
maria y la pared secundaria. cundaria predomina la fase fibrilar (celulosa
La lámina media o sustancia intercelular se 60 %) y la matriz amorfa está formada por
inicia como «placa celular» en el momento de la hemicelulosas y lignina (30 %), los compues-
división celular. Es amorfa y ópticamente inac- tos pécticos y las proteínas prácticamente des-
tiva. Se compone principalmente de compues- aparecen.
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Descubrimientos recientes han cambiado Las paredes celulares también mantienen
la noción sobre la estructura rígida y estática continuación molecular con la membrana
asignada a la pared celular, por la de una exten- plasmática y el citoesqueleto y conexiones fir-
sión virtual del citoplasma (Williams 2003). Se mes con la membrana plasmática, debido a
ha encontrado que las paredes celulares, parti- adaptaciones al estrés osmótico (López-
cularmente primarias, poseen marcadores de Gutiérrez 1999). Por su parte, Carpita et al.
superficie que predicen patrones de desarrollo (1998) indicaron que señales de la pared celu-
y marcan posiciones dentro del vegetal; asi- lar provocadas por la predación de insectos,
mismo, contienen componentes de señalamien- inducen la producción de moléculas de defen-
to y comunicación por la continuidad simplás- sa, formándose capas de proteína y lignina,
tica mediante los plasmodesmos (Ramírez et como respuesta a la invasión de patógenos
al. 2002). fungales y virales.

NATURALEZADE LAPARED CELULAR

La estructura y función de la pared celular vista químico es simple, pero físicamente es


vegetal está controlada por su organización y muy compleja. Los diseños formados por las
composición, principales factores que influyen microfibrillas son muy variables (González
en la digestibilidad de la fibra por los microor- 2003). En la pared primaria, las fibrillas están
ganismos del rumen. entrelazadas, dispuestas aparentemente al azar
Los forrajes difieren entre sí en la estructu- y en la secundaria están dispuestas paralela-
ra y composición de su pared celular, depen- mente.
diendo de la especie vegetal, parte anatómica La celulosa es el principal componente es-
y fase de desarrollo (Ramírez et al. 2002). tructural de las paredes celulares de las plantas.
La pared celular está compuesta principal- Los enlaces hidrógeno entre polímeros parale-
mente por polisacáridos de composición y es- los forman microfibrillas fuertes que proveen la
tructura variable (entre los que se destacan la fuerza y rigidez requerida en las paredes celula-
celulosa y hemicelulosa), lignina, ácidos res de las plantas (Gardner et al. 1999).
fenólicos, proteínas, iones y agua. Hemicelulosas
La composición y organización de los com- Son carbohidratos estructurales no celuló-
ponentes individuales en la pared controlan sicos que existen como polímeros lineales y
su estructura y función, por lo que resulta ne- ramificados, en asociación con otros carbohi-
cesario conocer detalles de los componentes dratos. La xilosa, mannosa y galactosa, frecuen-
más importantes: temente forman su estructura vertebral, mien-
Celulosa tras que la arabinosa, galactosa y ácidos uróni-
Polímero de fórmula general (C6 H10 O5)n cos están presentes en los lados de la cadena
constituido por unidades lineales de glucosa (Kirby et al. 1998). Las hemicelulosas son so-
(elementos de D-Glucosa unidos por enlaces lubles en álcalis diluidos, pero no en agua.
ß 1-4 glicosídicos). Las unidades de glucosa Cherney (2000), mediante estudios de Es-
se rotan 180o unas sobre otras, lo que significa pectroscopía de Resonancia Magnética Nu-
que la verdadera unidad repetitiva es el dímero clear (RMN) y Cromatografía Líquida de Alta
celobiosa (Adesogan et al. 2000). Resolución (HPLC), ha sugerido una posible
La celulosa está fuertemente unida a cade- estructura para la hemicelulosa presente en las
nas de hidrógeno conformando la fibra, la que gramíneas, la cual consiste en una cadena li-
es en su mayoría cristalina, aunque contiene neal de glucanos con cadenas laterales de
regiones amorfas. Esta estructura es rígida y xilanos, que atacan unidades vecinas de
altamente insoluble en H2O. Desde el punto de arabinosa y ácido urónico.
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Las hemicelulosas son polisacáridos matrices dación anaeróbica de los componentes de la
que se enlazan junto a las microfibrillas de celulo- pared por los microorganismos del rumen. La
sa y forman enlaces covalentes con la lignina. heterogeneidad de la “core” lignina es causa-
Lignina da por variaciones en la composición monomé-
Polímero fenólico tridimensional, de estruc- rica de la lignina y por los enlaces intramolecula-
tura muy compleja, constituye el principal res fuertes con otros componentes de la pared
polímero natural junto con la celulosa y es res- celular (Cherney 2000).
ponsable de la rigidez de la planta, de la resis- Acidos Fenólicos
tencia de los tejidos vasculares, la conducción Compuestos fenólicos de pesos moleculares
de solutos, agua y sales minerales necesarias relativamente pequeños, que se han aislado de
para la supervivencia de la planta, además de las paredes celulares por extracción con álcali o
la protección contra fenómenos oxidativos y tratamiento con celulasas, están unidos a los
de ataques de parásitos (Barthes 1992). residuos de glucanos y xilanos e incluyen ácido
La lignina está compuesta por tres monó- p- coumárico, ácido ferúlico y vainillina.
meros fenólicos que varían en la extensión de Los principales ácidos fenólicos en los fo-
la metoxilación del anillo aromático. rrajes son el ácido p-coumárico y el ácido
Estos monolignoles son: ferúlico.
• p-Hidroxifenil (no metoxilado) Los ácidos fenólicos constituyen agentes
• Guaicil (monometoxilado) entrecruzadores en los complejos lignina -
carbohidratos, e inhiben la utilización de los
• Siringil (dimetoxilado) residuos de carbohidratos asociados a ellos.
Estas unidades se derivan de sus respecti- Además, los monómeros fenólicos actúan tam-
vos alcoholes p- hidroxicinamílicos (p-couma- bién como constituyentes tóxicos de las pare-
ril, coniferill y sinapil), por polimerización des celulares por inhibir la adhesión de los
oxidativa por un acoplamiento al azar de radi- microorganismos a las partículas vegetales
cales fenoxi libres, iniciado por la peroxidasa y y su actividad fermentativa (Sudekum et al.
peróxido de hidrógeno (Sederof et al. 2002). 1995).
La lignina es comúnmente dividida en: Forano y Bera (2003) demostraron que los
• “Core lignina”: matriz fenilpropanoide al- ácidos fenólicos libres, especialmente el ácido
tamente polimérica y condensada con un alto p - coumárico, cuando se adiciona a la incuba-
peso molecular. ción in vitro, inhiben los protozoos entodinio-
• “Non-core lignina”: Formada por monó- morfos, la digestión de la fibra y la celulosa y
meros fenólicos, principalmente ácido coumárico afectan además, la actividad de las bacterias
y ferúlico. que predominan en la digestión de la fibra en
Ambos tipos de lignina actúan juntos como los forrajes.
una barrera físico-química que limita la degra-

INFLUENCIA DE LA NATURALEZA DE LA PARED CELULAR


EN LOS PROCESOS DE DIGESTION MICROBIANA DE LOS FORRAJES

La estructura de la pared celular vegetal es Mientras el floema y el mesófilo de las ho-


muy compleja y variable, tanto química como jas, el parénquima de los tallos de gramíneas y
histológicamente, y es la que condiciona el leguminosas inmaduras, y el floema de las
modo de ataque microbiano a los polisacáridos gramíneas inmaduras, se degradan rápidamente
estructurales y, en último término, el ritmo y (Fondevila 1998), en algunos casos en menos de
extensión de la degradación por los microorga- 12 horas de incubación, otros tejidos vegetales
nismos ruminales. presentan resistencia a la degradación.
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Como indican (Forsberg et al. 2000), el mismas influyen en el proceso de degradación
mesófilo es rápidamente degradado por las de la pared celular, la especie vegetal desem-
bacterias ruminales sin precisar adhesión, me- peña un papel preponderante en el ritmo y
diante una acción enzimática extracelular, mien- extensión de la degradación de los forrajes por
tras que la epidermis y las vainas de los paque- los microor-ganismos ruminales (Ramírez et al.
tes parenquimatosos precisan una íntima ad- 2002).
hesión de las principales especies fibrolíticas. En este sentido, Wilson y Hatfield (1997)
La resistencia de estos tejidos a su degrada- demostraron que las paredes celulares de las
ción se debe tanto a su estructura anatómica gramíneas y leguminosas presentan una com-
como a su composición química. posición de carbohidratos muy similar, sin em-
La capa de cutina que cubre la epidermis es bargo, los enlaces intramoleculares fuertes que
prácticamente impermeable a la adhesión se establecen entre estos componentes y las
microbiana (Forsberg et al. 2000), excepto para lignina difieren en ambas especies. En las
algunos hongos (Forano y Bera 2003), lo que gramíneas se produce esterificación de la ligni-
obliga a los microorganismos a colonizar los na con los arabinoxilanos, mientras que en las
tejidos digestibles a través de estomas o a par- leguminosas ocurre solo con los residuos de
tir de cortes y secciones libres de esa cutícula, arabinosa y galactosa y no con los xilanos , lo
en gran medida provocados durante la que provoca una menor tasa y extensión de la
masticación. Puede contener hasta 18 ó 24 % degradación de las paredes celulares de las
de sílice integrado en ella, que le confiere una gramíneas. Además, la lignina en las legumi-
mayor resistencia a la ruptura y a su digestión nosas está concentrada en el anillo xilemático,
(Fondevila 1998). La epidermis está débilmen- mientras que en las gramíneas se distribuye en
te adherida al mesófilo en las hojas de legumi- todos los tipos celulares, hecho que explica
nosas y de muchas gramíneas C3, pero firme- las mayores tasas de digestión de las paredes
mente fijada a los haces vasculares en las C4, celulares de las leguminosas.
por lo que puede entorpecer el proceso de di- Por su parte, las características de las fuen-
gestión (Cornu et al. 1994). tes no convencionales, como las harinas de
El xilema y el esclerénquima de las hojas de follajes tropicales, sugieren un mayor grado de
las gramíneas, por su densidad, suponen una engrosamiento de la planta, que las puede hacer
barrera a la colonización y a la acción de las menos aprovechables y menos fermentables.
enzimas microbianas, tanto sobre estos tejidos La lignificación de la planta es uno de los
como sobre otros que pueden quedar física- factores que más afecta a la degradación
mente protegidos (Jones y Theodorou 2000). microbiana de los forrajes, tanto por su indiges-
No obstante, el esclerénquima de las hojas, tibilidad per se, como en cuanto a su relación
aunque lignificado, no es totalmente inaccesi- con las cadenas de hemicelulosas. No solo el
ble a la colonización microbiana, sino que pue- contenido de lignina, sino también las varia-
de observarse cierta degradación en sus zo- ciones en su composición monomérica y los
nas periféricas. La proporción de xilema y escle- enlaces intramoleculares fuertes con otros
rénquima es similar en gramíneas C3 y C4. Sin componentes de la pared celular, provocan la
embargo, una mayor proporción de epidermis inhibición de la digestión de la pared. Esta in-
y vainas de paquetes parenquimatosos en las hibición varía entre componentes de la pared,
C4, en mayor proporción en condiciones ad- tejidos, especies de plantas y las fracciones
versas de crecimiento, suponen una barrera morfológicas de la planta (Sederoff et al. 2002).
adicional al ataque microbiano (Carpita y El carácter hidrofóbico de la lignina acen-
Gibeaut 1998). túa el proceso de deshidratación de la pared
No solo las diferencias anatómicas e histo- celular a medida que aumenta la edad de la plan-
lógicas de las diferentes fracciones botánicas ta, lo que disminuye la accesibilidad de los
de las plantas y la fase del desarrollo de las polisacáridos estructurales. Además, una con-
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siderable proporción de las unidades de Los enlaces covalentes de la lignina con
arabinosa de las cadenas laterales de xilanos los carbohidratos de las paredes celulares, que
están esterificadas con ácidos p-coumárico y se establecen durante la lignificación contri-
ferúlico, los que establecen enlaces con las ca- buyen a la retención de la lignina en la super-
denas de lignina (Cornu et al. 1994). ficie de la pared durante la degradación ruminal.
Aunque estos compuestos fenólicos, es- Esta limita la digestión de los forrajes e inhibe
pecialmente el ácido p-coumárico, son tóxicos la actividad enzimática, ya que las asociacio-
para la población microbiana ruminal (Vadiveloo nes lignina - hemicelulosa dificultan tanto el
2000), su concentración en el contenido acceso, como el adecuado acoplamiento enzi-
ruminal es probablemente insuficiente para ma - sustrato. Además, las microfibrillas de
generar este efecto. No obstante, su solubili- celulosa y hemicelulosa conllevan a una ma-
zación a partir de las paredes celulares pudiera yor rigidez de las paredes y ocupan mayor es-
provocar en las zonas de activa degradación pacio, por lo que excluyen al agua de la es-
una concentración de fenoles próxima a los tructura y ésta es la que proporciona el medio
niveles tóxicos, por lo que pueden inhibir la acuoso necesario para el movimiento de los
actividad fibrolítica bacteriana (Adesogan et iones y la actividad enzimática, que permite
al. 2000). colonizar las diferentes partículas del forraje
Se han propuesto tres posibles mecanis- por los microorganismos del rumen.
mos mediante los cuales la lignificación puede La lignificación de la pared celular de las
limitar la fermentación microbiana o hidrólisis plantas ha sido correlacionada con una reduc-
enzimática de los polisacáridos de la pared ce- ción de la degradabilidad de la materia seca,
lular (Sudekum et al. 1995 y Sewalt et al. 1996). de la degradabilidad de la pared celular y la
• El efecto tóxico de la lignina en los microor- concentración in vitro de los ácidos grasos
ganismos del rumen, que inhibe la adhesión volátiles (AGV) del forraje (Ramírez et al. 2000,
de los microorganismos a las partículas vege- Moore y Jung 2001, Moya-Rodríguez et al. 2001
tales y su actividad fermentativa. y Ramírez et al. 2002) (tablas 1 y 2).
• El medio ambiente hidrofóbico creado por Lo anterior puede ser debido a una baja
la lignina, que impide la acción de las enzimas, digestibilidad de los polisacáridos estructura-
las que requieren un medio acuoso. les, aunque los mecanismos responsables no
• La limitación de espacio causada por los han sido establecidos. Hay una creciente co-
enlaces lignina-polisacáridos limitan el acceso incidencia en el criterio que la utilización de la
de las enzimas a los carbohidratos específicos. pared celular del forraje como fuente de ener-

Tabla 1. Relación entre los constituyentes de la pared celular y la degradabilidad efectiva de la


pared celular (DEPC) de arbustivas tropicales. (Tomado de Ramírez et al. 2002).
Plantas arbustivas Pared Celulosa, Hemicelulosa, Lignina, Taninos, DEPC,
celular, % % % % % %
Acacia rigidula 52.3 17.9 17.2 17 . 2 15.2 13 . 4
Acacia farnesiana 37.7 9.8 14.8 14 . 3 1.8 38.7
Acacia peninsularis 37.0 16.8 9.8 12 . 8 5.7 49.1
Leucaena leucocephala 32.4 38.7 15.6 8.3 7.5 53.7
Desmant hus v irgat hus 25.9 6.1 9.1 10 . 8 8.9 47.8
Condalia abov at o 29.2 6.4 12.8 18 . 8 8.9 54.5
Pit hecellobium pallens 36.8 17.8 11.8 7.4 8.6 68.8
Gimnosperma glut inosum 25.8 11.8 4.8 18 . 4 4.4 63.9
Prosopis sp. 34.8 11.8 18.8 12 . 8 5.0 59.5
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Tabla 2 Características de la degradación ruminal in situ de la Materia Seca (MS) del
CUBA CT-115 con dos edades de reposo. (Valenciaga et al. 2003, Datos no
publicados)
Fracción CT- 115 con 60 d de reposo CT- 115 con 95 d de reposo
A, % 26 17
B, % 44.67 53.80
(A+B), % 70.67 70.80
C, Fracción/ h 0.0384 0.0321
DE, % 42.1 35.7
k= 0.044
Y= 5.10 + 65.69 [1-EXP(-0.0321(t)] RSD = 3.36 Para CT- 115 con 60 d de reposo
Y= 10.82 + 59.85 [1-EXP(-0.0384(t)] RSD = 6.34 Para CT- 115 con 95 d de reposo

gía está regulada por la naturaleza de los enla- capacidad que tienen los rumiantes para apro-
ces cruzados de los componentes de la pared. vechar recursos fibrosos.
La cantidad de lignina puede ser el factor Lo analizado en esta reseña demuestra la
clave que limite la degradación de la pared necesidad de abordar globalmente el ecosis-
celular; sin embargo, la organización de la ma- tema ruminal, para comprender su actividad, y
triz de la pared, en la cual se encuentra la lignina optimizar la actividad fermentativa de los
puede regular el grado de su influencia sobre microorganismos ruminales, para incrementar
la degradación de los polisacáridos de la pared el consumo y la eficiencia de utilización de los
(Hatfield 1993 y Ramírez et al. 2002). forrajes por los rumiantes. Lo anterior permiti-
Los sistemas de alimentación del ganado rá establecer las estrategias de alimentación y
en el trópico deben enfatizar el aprovechamien- de manipulación del ambiente que contribu-
to de su biodiversidad propia, la cual se mani- yan a conseguir este objetivo. Estos estudios
fiesta en una gama muy amplia de recursos ali- permitirán desarrollar procedimientos concep-
menticios, los que en muchos casos no se han tuales idóneos de manejo de los pastos y fo-
aprovechado por el desconocimiento de su va- rrajes y lograr mayor sostenibili-dad de los
lor nutricional y no siempre han sido bien ma- agroecosistemas.
nejados. Estos sistemas se deben basar en la

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