Extracción de esencias y separación de pigmentos

naturales (Clorofila, xantofilia y carotenos).

Martes, 09 de junio de 2020

INTEGRANTES CÓDIGO
Jonathan Andrés Sánchez Sánchez 6201176
Sofía Moreno Cadena 6182498
Johan Estiven Cortes Garay 6191557
Jhan Brandon González Rosero 6171264

1. Procedimiento

1.1 Extracción con Soxhlet

1.2 Separación y cuantificación de pigmentos naturales (clorofilas y carotenos)
 1.3 Cromatografía de capa fina

2. Resultados

Tabla 1. Datos y resultados.

Método Materia Prima Componentes químicos Comentarios
que caracterizan el
extracto o la esencia
Extracción Con Soxhlet (continuo) Cascaras de Alcohol etílico al 80%  Sirve como
limón (rayadas) oxidante.
 Punto de
ebullición de 176
C.
 Inflamable a una
temperatura
superior a 48 C.
 Análisis Cromatografía Hojas frescas de  Acetona al 80%  Pertenece a la
(discontinuo) espinaca  Etanol al 96% familia de
 Éter de petróleo Quenopodiáceas.
 Presentan
cantidades
elevadas de
vitaminas C y E.
Espectroscopia Hojas frescas de Acetona al 80%  Buena fuente de
espinaca vitaminas del
grupo B.

Tabla 2. Cuantificación de clorofilas utilizando espectrofotometría.

Longitud de onda (nm) A1 Replica A2
470 1,514 1,512
647 0,820 0,819
663 1,432 1,446

Tabla 3. Medidas de cromatografía.

Marca Medida (cm)
Naranja 2
Verde 3,6
Amarillo 3,8
Amarillo 4,2
Frente de solvente 5

3. Resultados y análisis de resultados. 0,820+0,819

A647 = =0,8195
2
3.1. Cuantificación de clorofilas y
carotenoides utilizando técnicas 1,432+ 1,446
A663 = =1,439
espectrofotométricas 2

Al calcular los tres promedios de las absorbancias, se

Para realizar la cuantificación de clorofilas y carotenos realiza el cálculo de la clorofila a:
por espectrofotometría visible, se debe calcular un
promedio de las absorbancias obtenidas en cada C a=12,25∗A 663 −2,79 ¿ A 647
longitud de onda. Recordemos que se hizo una dilución
1:10, 5 ml de acetona (C 3 H 6 O ), con 0,5 ml de
C a=12,25∗1,439−2,79∗0,8195
sobrenadante.
μg
1,514+1,512 C a=15,341
A 470= =1,513 ml
2
De esa misma forma se hace para la clorofila b: μg
C x+ c=3,086
ml
C b=21,5∗A 647 −5,1 ¿ A 663

C b=21,5∗0,8195−5,1∗1,439 3.2. Cromatografía de capa fina

μg Se procede con el cálculo de factor de retención para los

C b=10,280 distintos pigmentos en una lámina de cromatofolio silica
ml
gel.
Como se obtuvo los valores de ambas clorofilas, ahora
se obtiene la clorofila total sumando los dos datos  Pigmento Nº1: Naranja (con capilar)
anteriores: [carotenoides beta-caroteno].

C t=C a +C b desplazamiento del soluto

Rf=
desplazamiento del solvente
C t=15,341+10,280
2 cm
Rf= =0,40
5 cm
μg
C t=25,621
ml
 Pigmento Nº2: Verde (con capilar) [dorofila].
A partir de las medidas de absorbancia en función de la
concentración se obtiene la gráfica 1.
desplazamiento del soluto
Rf=
desplazamiento del solvente
Longitud de onda en función de la
concentración 3,6 cm
Rf= =0,72
700 663 5 cm
647
650 f(x) = 96.5 x + 400.33
Absorbancia

600 R² = 0.81
550  Pigmento Nº3: Amarillo (con capilar)
500470 [carotenoides y flavonoides luteína]
450
400
1 2 3 desplazamiento del soluto
Rf=
Concentración desplazamiento del solvente

Grafica 1. Longitud de onda en función de la 3,8 cm

concentración.
Rf= =0,76
5 cm

Para el cálculo final se obtendrá el valor de los  Pigmento Nº4: Amarillo (con capilar)
carotenoides: [carotenoides y flavonoides luteína]

(1000∗A 470 −1,82∗C a−85,02∗Cb ) desplazamiento del soluto

C x+ c= Rf=
198 desplazamiento del solvente

(1000∗1,513−1,82∗15,341−85,02∗10,280) 4,2 cm
C x+ c= Rf= =0,84
198 5 cm
Una de las técnicas utilizadas para la obtención de
compuestos químicos en la industria es la destilación
soxhlet la cual por medio de solventes orgánicos en
ebullición y por condensación logra extraer diferentes
componentes de una muestra sólida pulverizada, por
este medio experimental se tiene en cuenta su
rendimiento al no ser del 100%. Esto se puede
presentar porque al recuperar el solvente gran parte de
lo obtenido se pierde. Para la extracción de compuestos
de la cáscara de limón se implementó Etanol 80% con
un volumen de 150 mL, incorporando perlas de
ebullición y una temperatura controlada para evitar
ebullición brusca del solvente, este proceso se lleva a
cabo por aproximadamente una hora. Los resultados se
evalúan organolépticamente teniendo en cuenta la
coloración final del solvente (verde - amarillo).
Por otra parte, se realizó una extracción por de
clorofilas este tipo de compuestos requieren de un
solvente de polaridad media- alta y poco selectivos. se
opta por utilizar maceración en mortero, utilizando
Acetona 80% hasta obtener una muestra homogénea,
seguido por una centrifugación a 2000 RPM para lograr
separación de la muestra a dos fases, aprovechando el
sobrenadante, esta técnica muestra un rendimiento
favorable al presentar un sobrenadante saturado de
color verde lo cual evidencia gran presencia de clorofila,
la cual será cuantificada por espectrofotometría VIS
(400 - 800 nm).
Para un tercer análisis de identificación y
caracterización utilizado para la separación de
pigmentos se utiliza una cromatografía en capa fina,
mediante una placa de sílica gel se busca aislar la mayor
cantidad de pigmentos presentes en nuestra muestra.
Dicho procedimiento es de gran eficacia para una futura
purificación de pigmentos teniendo en cuenta su
polaridad relativa.
4. Conclusiones.
Se llegó a comprender las diferentes esencias que
existen en el reino vegetal sabiendo como
clasificarlas e identificarlas gracias a sus
características físicas y químicas desarrolladas en el
laboratorio.
Al llegar a comprender la importancia de los diferentes
métodos de extracción se logra una mayor efectividad
tanto a nivel de laboratorio como a nivel industrial,
mejorando rendimientos, tiempo, entre otros factores.
Se identificó los diferentes compuestos orgánicos que
están presentes en las esencias y pigmentos, mediante
los diferentes procesos realizados durante la práctica
dando como resultado características especiales de
cada uno. De esta misma forma, se pudo determinar
esencias compuestas de anillos aromáticos que
justifican los olores agradables que tienen los cuales
son volátiles.
Por otro lado, al tener una polaridad relativa de los
diferentes tipos de pigmentos, esto permite evidenciar
el color que segregan éstos después del proceso.
Para finalizar, se pudo determinar la cantidad de clorofila
de cada pigmento y esto se puede evidenciar en los
cálculos realizados anteriormente. A partir de la
cáscara de limón en base seca y por destilación soxhlet
se busca la obtención de sus compuestos fijos.
Los resultados se evalúan organolépticamente teniendo en
cuenta la coloración final del solvente (verde -
amarillo). Se concluye así que los métodos y
parámetros utilizados dan un rendimiento óptimo a la
extracción.