LAS CEPAS ATCC Herramienta indispensable en el Control de Calidad Interno en Microbiología.

MARIA ISABEL MONTOYA ROMERO Especialista en Microbiología Clínica
Directora Técnica – Coordinadora de Calidad

Instituto Colombiano de Medicina Tropical

TEMAS DE INTERES

Definición y Generalidades Cepas ATCC Historia ATCC – MicroBiologics Clasificación Reconstitución y Almacenamiento Registro y control Usos en el control de Calidad interno Ventajas de ingresar a un programa de licencia derivada.

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Que son las Cepas Referencia Cepas Certificadas: es un material biológico de referencia certificado. La colección certifica que se suministra una determinada cepa, que es un cultivo puro, y que se han observado las convenientes pruebas morfológicas, bioquímicas y moleculares correspondientes.

Adquisición de las Cepas de Referencia
Obtención directa a partir de una colección nacional e internacional reconocida, con su respectivo Registro y Certificado. CEPAS NCTC: National Collection of type Cultures. Londres. CNCM: Colection Nationale de Cultures of Microorganismes. Paris,
Francia.

ATCC: American Type Culture Collection. Rockville, EU CCTM: Collection Nationale de Cultures de Microorganismes. Institut
Pasteur

NCYC: National Collection of Yeast Cultures. Norwik UK. NCIBM: National Collections of industrial and Marine Bacteria. CECT: Colección española de cultivos tipos.

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Es una organización en la que participan actualmente 21 sociedades científicas.Laboratorio Comercial (1971) . Quien es ? El primer fabricante de productos Biologicos (microorganismos liofilizados) para el control de calidad. Micología y Botánica. con licencia aprobada por ATCC® ® Patente de distribución ATCC desde el año 2004 35 Años en el Mercado .Generalidades de la ATCC La colección que almacena la ATCC se inició en 1925. 3 . sobre una colección de bacteriología iniciada en 1911. En la actualidad mantiene colecciones de Bacteriología.Microorganismos para el Control de Calidad (1982) . Cultivos celulares.Fabricante de Medios de Cultivo Preparados (1975) . Protistología y Virología. Ácidos nucleicos y Genotecas.100% Devoción a los Productos para el Control de Calidad Microbiológico (1996). Plásmidos.

4 . El Certif icado v alida la trazabilidad y autenticidad de las metodologías y controles hechos por los Usuarios Finales clínicos e industriales ante la ATCC y organismos de v erif icación.PRINCIPIO DEL SISTEMA DE LIOFILIZACIÓN Gelatina: medio transporte Leche descremada. Carbón Vegetal: Neutraliza sustancias toxicas generadas por la liofilización El Certif icado es entregado personalmente por LABCARE a los Usuarios Finales de MicroBioLogics para que el laboratorio lo presente como soporte mientras las Cepas estén siendo utilizadas exclusiv amente en los procedimientos del Control de Calidad. estos materiales no son auténticos ATCC.acido ascórbico. Si el prov eedor de microorganismos no puede entregar un CERTIFICADO DE CONFORMIDAD. evitan deshidratación por congelación). dextrosa y carbón activado: Agentes Crioprotectores (preservan pared celular.

CLASIFICACION CEPAS ATCC Cepas de Referencia. son: microorganismos definidos. catalogados . CEPAS DE REFERENCIA A fin de demostrar la trazabilidad : las cepas de referencia deben obtenerse directamente de una colección con la reseña nacional o internacional de cultivo de referencia reconocido. por lo menos a nivel de género y especie. Cepas de Reserva. caracterizados y de origen conocido 5 . Cepas de Trabajo. "ISO 11133-1:2000".

PRESENTACION KWIK-STIK™ LYFO DISK® KWIK-STIK™ Plus 6 . aceptándose hasta cuatro pases como máximo a partir de la cepa o semilla original de referencia.CEPAS DE REFERENCIA Son distribuidas y presentadas comercialmente liofilizadas. los organismos de acreditación son los encargados de considerar válida la fuente de procedencia de la cepa a fin de que se cumpla con el requisito de prevenir mutaciones. deterioro o alteración de las características típicas de las cepas. El número de repiques a partir de la cepa de referencia a de ser limitado.

com Requerimientos:Hidratacion.CEPAREO Reconstitucion: Las Cepas de referencia son almacenadas entre 2-8 ºC hasta su uso. En la reconstitución y siembra de la Cepas de referencia.pdf 7 .pdf. Las Cepas de referencia serán sometidas a un control de calidad de pureza y viabilidad.microbiologics.Incubacion(atmosferas y Tiempo). Boletin de informacion tecnica TIB. se utilizan medios de cultivo de enriquecimiento. así se le dará registroCepas ATCC\kwik.Medios de cultivo.081 “Recommended Growth Requirements” CEPAREO www. las condiciones de incubación y el procedimiento de almacenamiento varia para cada tipo de microorganismo. Cepas ATCC\lyfodisk.

CEPAS DE RESERVA Son cepas idénticas logradas mediante un único subcultivo de una cepa de referencia. se trata de cepas potencialmente peligrosas y cuya manipulación queda exclusivamente restringida al personal autorizado. Cada Vial debe estar perfectamente identificado con el nombre de la cepa. Son preparadas y conservadas en el laboratorio. procedencia y fecha de congelación CEPAS DE RESERVA Las Cepas de Reserva una vez descongeladas no deben volver a Congelarse. Los métodos para la preservación y mantenimiento de cepas de reserva son la LIOFILIZACIÓN y la CONGELACIÓN A BAJAS TEMPERATURAS. Se da el uso de agentes Crioprotectores 8 . dentro del cual se destina un lugar para su almacenaje.

) Especificar tiempo y condiciones de Almacenamiento Mantener en las condiciones específ icas Descongelación / Reconstitución Subcultiv ar una sola v ez Cepa de Trabajo Especificar tiempo y condiciones de almacenamiento Maximo 8° Pases USO RUTINARIO 9 . pureza y morfología típica del subcultivo Nunca subcultivarlas para sustituir a las cepas de Reserva Cepas de Referencia Sub cultiv ada una sola v ez No permitido Cepa de Reserv a (Liofilización. ultra congelación rápida etc.CEPA DE TRABAJO Se obtienen por subcultivo de las Cepas de Reserva Se subcultivan en medios sólidos de enriquecimiento apropiados para C/microorganismo Se debe Verificar la calidad. nitrógeno liquido.

Control de calidad de la cepa de referencia Conforme (SI/NO). Nº de lote. Fecha de caducidad de la cepa. Fiche de reconstitucion. Género y especie del microorganismo TIPO y Nº de colección. El objetivo: asegurarse que las cepas conservan su viabilidad y sus caracteres bioquímicos. 10 . Control de calidad de pureza y viabilidad: Se realiza a diferentes niveles del proceso cada vez que se realiza un replique. Personal responsable. Fecha de recepción.Cepa Ref erencia ≤ 4° Pasajes Pase de Reconstitución 5° Pasaje 6° Pasaje 7°Pasaje 8°Pasaje AlmacenamientoCepas Reserv a en 6 ° Pasaje Registro y Control de Cepas ATCC Identificación de la cepa.

HOJA DE REGISTRO CEPAREO UTILIDAD DE LOS CULTIVOS DE REFERENCIA ATCC EN EL QC INTERNO 1. 2.Validar métodos microbiológicos.(Pruebas de Sensibilidad) 11 .Asegurar la calidad de los resultados de ensayos de laboratorio (coloraciones y desempeño de reactivos) 3.Evaluar la calidad de los medios de cultivo.

por eficiencia o calidad. Es de prioritario cumplimiento evaluar el desempeño de: Agar Chocolate Agar Thayer Martín Agar Sangre Agares suplementados con Antibioticos Agares Cromogenicos 12 . del cual depende la seguridad de los resultados que emiten los laboratorios de ensayo. Es un proceso continuo que se extiende desde las materias primas. Si los medios de cultivo son suministrados por empresas fabricantes hay que solicitar Certificado de Calidad. a través del productor hasta el producto final utilizado en el laboratorio.El Control de la Calidad en la preparación y evaluación de los Medios de Cultivo Una esencial y buena práctica de laboratorio. tanto para reacciones positivas como negativas. mediante la inoculación de microorganismos cuyo comportamiento conocemos. necesaria para mantener el nivel y la ejecución de cualquier técnica microbiológica. Por esta razón. se le confiere una gran importancia y está considerado como uno de los puntos críticos de control en el análisis microbiológico. EVALUACIÓN DE EFICIENCIA DE LOS MEDIOS DE CULTIVO Cada lote preparado de medio de cultivo se prueba antes de su uso rutinario.

PROTOCOLO DE CONTROL DE CALIDAD DE MEDIOS DE CULTIVO 1.Se ACEPTA lotes negativ os.Se descarta todo el lote preparado si hay crecimiento Microbiano.Cada v ez que ingrese un Medio de Cultiv o Nuev o al Laboratorio.Cada v ez que un medio de cultiv o supere su f echa de caducidad METODO ECOMETRICO Es una técnica simple que permite Recuperar.Cada v ez que se prepare un Lote nuev o de un Medio de Cultiv o. . CONTROL DE ESTERILIDAD: 5% DE LA PRODUCCIÓN TOTAL Y SE INCUBA DURANTE 72 HORAS (CUARENTENA). CONTROL DE PH 3. Comparar y Cuantificar el crecimiento de microorganismos ATCC con cargas de UFC definidas en diferentes medios de Cultivo con el fin de evaluar su MANUFACTURA. . VOLUMEN. PRUEBA DE PRODUCTIVIDAD Y SELECTIVIDAD PARA MEDIOS DE CULTIVO SÓLIDOS. SUPERFICIE. 13 . . . CEPAS DE REFERENCIA ATCC . TECNICA ECOMETRICA DE MOSSEL (RADIAL) MÉTODO ECOMETRICO MODIFICADO de MILES y MISRA A. ASPECTO FISICO: NIVEL. COLOR. PRUEBA DE PRODUCTIVIDAD Y SELECTIVIDAD PARA MEDIOS DE CULTIVO LIQUIDOS . 4. EMPAQUE 2. B. CALIDAD MICROBIOLOGICA: Método ECOMETRICO Prueba de PRODUCTIVIDAD y SELECTIVIDAD: Medios Sólidos y Líquidos.

s -1 -2 -3 -4 -5 -6 1’000000 a 10 U F C Control positivo en una Agar Nutritivo: Agar chocolate 14 . PRUEBA DE PRODUCTIVIDAD Y SELECTIVIDAD PARA MEDIOS DE CULTIVO SÓLIDOS METODO CUANTIT ATIVO: MODELO DE MILES Y MISRA.24.PRODUCTIVIDAD Determina el Rendimiento. que se espera sea inhibido en el medio. Para medios muy exigentes o para comparar Medios 50uL 50uL 50uL CEPA REFERENCIA EN BHI 1818. SELECTIVIDAD Evalúa la supresión del crecimiento del microorganismo. ANTES 450 uL s. Recuperación y crecimiento de microorganismos que habitualmente se desarrollan en un medio de cultivo.

METODO CUANTITATIVO: MILES Y MISRA IR: RA ZON DE PRODUCTIVIDAD Y RA ZON DE SELECTIVIDAD Incubar : 37ºC x 18 Horas 10 uL -6 -1 Contar el numero de colonias presente en cada una de las diluciones Calcular IR RP: 70% a 80% RS: 0.(100 UFC) SELECTIVIDAD Inhibicion completa y/o crecimiento unicamente en la 1º dilución.1% a 0% IR: Nº de colonias presentes x Factor dilución Nº de colonias Control x Factor dilución -5 -2 -4 -3 Interpretación Metodo Ecometrico PRODUCTIVIDAD Crecimientos por encima de la 5º dilución.(1’000.000 UFC) 15 .

Agar. el QC interno es de acuerdo a la casa Comercial. T° . pero no inferior a una vez cada mes. En caso de fallas en los halos de inhibición se debe realizar diario hasta encontrar la causa….5 x 10 (8) UFC 16 . MH con sangre de cordero 5%..1 1. McFarlan.4 21 – 22 ml McFarland DO 0. MATERIALES Y PROCEDIMIENTO • Discos de Antimicrobianos • Tubos con Sln Salina estéril o caldo nutritivo • Placas de MH.5% 625 nm Absorbancia de 0. Realizar el control cada semana.Control de calidad en determinación de sensibilidad a antimicrobianos Obligatoriamente se debe probar cada lote nuevo de Mueller-Hinton y cada lote de sensidiscos. • Escala de McFarland AGAR MUELLER HINTON pH de 7. Discos etc.2. MH-chocolate. En caso de Galerías Automatizadas.7.08 – 0.

CONTROL DE CALIDAD ANTIBIOGRAMA Control de difusión de antibioticos Cepas ATCC 17 .

25 ug T rimehoprim 23. Encubar por 18 horas a 35 + 2 ºC.32 mm S. por estría con rotación por tres veces Colocar sensidiscos con dispensador o pinzas flameadas y frías. 18 . < 15´. aureus ATCC 25923 24-35 mm 19-27 mm 19-27 mm --7 -13 mm 24 -32 mm Pseudomona aeuriginosa ATCC 27853 ----16-21 mm 20-28 mm ----- Enterococcus feacalis ATCC 29212 ----------16 -23 mm Ampicilina 10 ug Tetraciclina 30 ug Gentamicina 10 ug Imipenem 10 ug Polimixina B 300 IU Sulfamethoxazole 1.\NORMAS NCCLS M2 A7 Doc.coli ATCC 25922 15-20 mm 18-25 mm 19-26 mm 26-32 mm 12-16 mm 24 .5 McFacland..5 Cepa ATCC S. Agitado en VOrtex Sembrado homogéneo con torunda. Leer con regla y establecer que estén dentro de los rangos de la tabla de ref erencia para cada cepa analizada.doc Control de Calidad en determinación de sensibilidad a Antimicrobianos McFarland 0.Valores Referencia: diámetro de las zonas de inhibición en mm según la OMS T est Discos E. En estafilococos y estreptococos por 24 horas completas.S Suspensión de Cepa ATCC hasta 0.75 ug OT ROS.

meropenem y beta-lactamasa. debiendo incrementar la frecuencia del mismo de acuerdo a las posibilidades del laboratorio.Nota: Las normas LSCCI/NCCLS sugieren un control de calidad diario y semanal. De no tener las facilidades. se sugiere un control de calidad mensual. se debe realizar por lo menos un control de calidad quincenal para los siguientes antibióticos: Oxacilina. imipenen. 19 . Pero.

Factores X-V-XV Betalactamasa .idealmente para probar reacciones débiles y Fuertes y variaciones en el tiempo de los reactivos. Control de Calidad Interno de los Reactivos Empleados Frecuencia de Control Reactivos – Discos y Tiras CADA NUEVO LOTE O VIAL Y CADA DIA DE USO Catalasa – Oxidasa – Coagulasa .Optoquina .ONPG . las de Rutina una vez por semana y en cada lote nuevo de colorantes. Tanto las de rutina como las especiales Las Tinciones especiales deben controlarse en cada Tanda o serie de trabajo.Indol .Control de Calidad Interno de los Reactivos Empleados Las Cepas Utilizadas para control deben ser SIEMPRE cepas Referencia Los Controles deben efectuarse con Cultivos Frescos En general se deben usar dos Tipos de Cepa para probar cada Reactivo o Reacción.Sondas de ADN CADA NUEVO LOTE Y CADA SEMANA DE USO Bacitracina .Kits Comerciales de Identificación – Patron Mcfarland 20 .PYR .CAMP CADA NUEVO LOTE Y CADA MES Antisueros . Las Coloraciones deben siempre controlarse con controles Positivos y Negativos.

que son distribuidos por compañías elegidas por sus credenciales de Sistemas de Calidad. 21 . investigación y evaluación continua de los productos por parte de ATCC. cuidadosas auditorias.QUE ES EL PROGRAMA ATCC® DE DERIVADO LICENCIADO? Es un programa amplio de distribución comercial que asegura la autenticidad de los Materiales Biológicos de ATCC.

a través de los procesos de manufactura de la compañía. TRAZABILIDAD SEGURA El Programa asegura la trazabilidad de los Materiales Biológicos desde su origen en ATCC. Beneficiar el Usuario Final con las validaciones de los fabricantes autorizados – el final de los cultivos “in-house”. pasando por los canales de distribución hasta llegar al Usuario Final. las tecnologías que permiten ahorrar tiempo bajar los costos del Control de Calidad. Crear. a través de las compañías comerciales. el manejo y envío del producto desde el fabricante.PROPOSITO DEL ATCC® LICENSED DERIVATIVE PROGRAM ™ Incrementar los requerimientos de Control de Calidad de los laboratorios clínicos e industriales. el almacenamiento físico. Proporcionar los productos derivados de Cultivo de Referencia a costos accesibles. Los acuerdos contractuales unen a todas las partes de este proceso en una “cadena de custodia y cadena de responsabilidad” adecuándose a nuestro mundo actual.” 22 .

instituto o colección de cultivos que no esté licenciada o autorizada para comercializar los Materiales Biológicos de ATCC® está operando fuera de los Acuerdos de Transferencia de Material (MTA) y del aseguramiento de autenticidad de ATCC® Los Usuarios Finales no tienen ninguna garantía acerca de la validez y exactitud de datos generados al usar productos de proveedores no licenciados 23 . Cualquier compañía comercial. autorizados y licenciados.¿QUE SIGNIFICA EL “LDP” PARA EL LABORATORIO DEL USUARIO FINAL? Acceso fácil y económico a las fuentes de Materiales Biológicos de ATCC® Autenticidad y trazabilidad a los Cultivos de Referencia de ATCC® Avance tecnológico en productos de Materiales Biológicos para satisfacer las demandas del Control de Calidad Confianza en un Sistema Mundial de proveedores legalmente autorizados y licenciados de Microorganismos para Control de Calidad ¿EN QUIENES PODEMOS CONFIAR? En los proveedores comerciales de Materiales Biológicos cuyos números de referencia ATCC® estén aprobados.

José Ortega y Gasset www. Solo cabe progresar cuando se piensa en grande”.edu.co TEL: (4) 305 35 00 EXT 312 24 .microbiologics.“Sólo es posible avanzar cuando se mira lejos.com mimontoya@ces.

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