UNIVERSIDAD PEDAGÓGICA Y TECNOLÓGICA DE COLOMBIA

BIOLOGÍA MOLECULAR, Leopoldo Arrieta Violet

Preparación y corrido de las muestras en un gel de agarosa

1. INTRODUCCIÓN: La electroforesis en gel de agarosa es una técnica utilizada

para separar moléculas, generalmente ácidos nucleicos. La agarosa es un
compuesto extraído de algas marinas, el cual después de resuspenderse en búfer
y calentar hasta la ebullición, toma la consistencia de gelatina al enfriarse.
Realiza una revisión sobre la electroforesis que te permita analizar los resultados

2. OBJETIVOS:
* Aprender a fabricar un gel de agarosa
* Realizar una electroforesis de ADN de las cuatro especies.
* Comprender los principios básicos de la electroforesis
* Familiarizarse con los reactivos y procedimientos necesarios al realizar una
electroforesis de agarosa

3. PREGUNTA DE INVESTIGACIÓN: Construye una pregunta acorde con la

hipótesis planteada.

4. HIPÓTESIS: Los cuatro ADNs de diferentes especies no correrán a la misma

distancia.

5. DISEÑO METODOLÓGICO: ¿Construye un diseño experimental que permita

resolver la pregunta de investigación, que incluya las variables?
5.1. Variable Independiente: 5.2. Variable dependiente:

6. MATERIALES Y MÉTODOS
6.1. Materiales:
25 µl. ADN década una de las muestras micropipetas de 10, 200 y 1000 µL. Puntas
con filtro para las micropipetas, tubos eppendorf, cámara de electroforesis
horizontal, fuente de poder, horno microondas, vaso de precipitado, agitador de
vidrio, balanza, vidrio de reloj, espátula y trasiluminador.

6.2. Reactivos: Agarosa 1%, bromuro de etidio, búfer de corrido (TBE 1X), 5 µL
búfer de carga 6X (Azul de bromofenol y sacarosa) y agua ultrapura.

6.3. PROCEDIMIENTO:
6.3.1. Preparación de la agarosa
6.3.1.1. Pesar 0,25 gr de agarosa.
6.3.1.2. 35 ml de búfer de corrido
6.3.1.3. Calentar hasta ebullición
6.3.1.4. 2,5 µL de bromuro de etidio
6.3.2. Preparación de la minicámara de corrido.
6.3.2.1. Colocarle las dos defensas a lado y lado de la minicámara.
6.3.2.2. Colocarle el peine.
6.3.2.3. Servir el gel de agarosa sin producir burbujas y dejar 20 minutos hasta
que gelidifique.
6.3.2.4. Retirar las defensas y el peine con cuidado para no romper los pozos.
6.3.2.5. Levar la minicámara a la cámara de corrido.
6.3.2.6. Llenar la cámara de corrido con búfer de corrido hasta cubrir el gel

6.3.3. Preparación de la muestra y corrido.

6.3.3.1. 25 µL de muestras y 5 µL de búfer de carga
6.3.3.2. Sembrar la muestra en cada uno de los pozos.
6.3.3.3. Conectar la cámara de corrido a la fuente de poder.
6.3.3.4. Encender la fuente de poder 105 voltios
6.3.3.5. Dejar correr por 40 minutos.

6.3.4. Visualización del ADN

6.3.4.1. Sacar el gel y colocarlo en el transiluminador.

7. DATOS BRUTOS: Resultados registrados en el laboratorio (Variable

dependiente e independiente).

8. PROCESAMIENTO Y PRESENTACIÓN DE LOS DATOS (PPD): Las tablas, gráficas,

fotos (debidamente rotuladas y con leyenda) producto de la manipulación de los
datos brutos y su respectiva discusión (El análisis y comparación de tus
resultados con los de otros autores, para poder llegar a una conclusión valida.).

9. CONCLUSIONES: La aceptar o rechazar la hipótesis planteada, con argumentos

de PPD.

10. LITERATURA CITADA: La literatura usada para discutir los resultados.

NOTA: El informe de laboratorio debe llevar únicamente: Pregunta de

investigación, hipótesis, variables (independiente y dependiente), PPD y las
conclusiones.