PRUEBAS BIOQUÌMICAS COMERCIALES

PRUEBA API 20 E

- INTRODUCCIÓN

API 20E es un sistema estandarizado que permite la identificación de enterobacteriaceae y otros

bacilos Gram negativos no exigentes. (API, 2018)
Esta prueba, incluye una base de datos y 21 test bioquímicos que son los siguientes:

Tabla1. Lectura y Especificaciones de los 20 test encontrados en la tira de API 20E. (haramuniz,
2017).

Prueba Reacción/ Enzimas Negativo Positivo

ONPG Beta-galactosidasa Sin color Amarillo
ADH Arginina deshidrolasa Amarillo Rojo o naranja
LDC Lisina descarboxilasa Amarillo Rojo o naranja
ODC Ornitina descarboxilasa Amarillo Rojo o naranja
CIT Utilización del citrato verde Azul oscuro o turquesa
H2S Producción de H2S Sin precipitado negro Precipitado negro
URE Ureasa Amarillo Rojo o naranja
TDA Triptófano desaminasa amarillo Marrón o rojo
IND Producción de Indol Color rosa o anillo rosa-
Amarillo
rojo
VP Producción de acetoína
Sin color Rosa-rojo
(voges- proskauer)
GEL Gelatinasa Sin difusión Difusión de pigmento
GLU Fermentación/oxidación
Azul o verde amarillo
de glucosa
MAN Fermentación/oxidación
Azul o verde Amarillo
de manitol
INO Fermentación/oxidación
Azul o verde Amarillo
de inositol
SOR Fermentación/oxidación
Azul o verde Amarillo
de sorbitol
 RHA Fermentación/oxidación
Azul o verde Amarillo
de ramnosa
SAC Fermentación/oxidación
Azul o verde Amarillo
de sacarosa
MEL Fermentación/oxidación
Azul o verde Amarillo
de melobiosa
AMY Fermentación/oxidación
Azul o verde amarillo
de amigdalina
ARA Fermentación/oxidación
Azul o verde amarillo
de arabinosa
OX Citocromo oxidasa

Figura xxxx. Tira prueba API 20E con 20 cúpulas de substratos deshidratados. Fuente: laboratorio
microbiología, Universidad Jorge Tadeo Lozano.

- PROCEDIMIENTO.

1. Suspender una colonia aislada en una suspensión de 5ml de solución salina (1% de NaCl).
2. Llenar los tubos de cada pocillo con la solución inoculada (cada pocillo tiene un tubo y una
cúpula).
3. Llenar hasta la cúpula de los pocillos CIT, VP, GEL con la suspensión.
4. Cubrir con aceite las cúpulas de los pocillos ADH, LDC, ODC, URE, H2S para obtener
anaerobiosis.
5. Llenar la cámara de agua y a continuación, poner la tira sobre esta. (El agua
proporciona una atmósfera húmeda durante la incubación).
6. Incubar a 37ºC durante 18-24 hrs.
7. Luego de la incubación, se anotan aquellos resultados que no necesitan ser revelados por
reactivos.
Para las pruebas que requieren ser reveladas por reactivos, se tienen en cuenta los siguientes
criterios:
 ● Si la glucosa es negativa y los test son dos o menos de dos, no se añade reactivos. Cuando
se presenta este caso, se deben hacer otras pruebas tales como API 20NE, API OF, API M
o API 10S para la determinación de metabolismos especiales.
● Si la glucosa es positiva y/o más test son positivos, se revelan las siguientes pruebas con
los reactivos:
- Añadir una gota de FeCl3 al 10% en la cúpula de la prueba TDA.
- Añadir una gota del reactivo 1(KOH AL 40%) y una gota del reactivo 2 (C2H5OH) en la
cúpula de la prueba VP.
- Añadir una gota de reactivo de KOVACS en la cúpula de la prueba IND.
- Añadir una gota del reactivo TETRAFENILENDIAMINA en la cúpula de la prueba
OXIDASA.

- INTERPRETACIÓN.
La lectura se lleva a cabo por la comparación de los colores de cada pocillo con los colores
expuestos en la siguiente ilustración:

Figura xxx. Comparativa de colores en los resultados de cada prueba de la tira API 20E. Fuente:
(haramuniz, 2017).

- RESULTADOS

La hoja de resultados divide las pruebas en conjunto de tripletes en el que se obtiene un numérico
de 7 cifras. Para obtener los perfiles numéricos (Anexo 1.), a cada pocillo se le dará el valor de 0,
1, 2 o 4 según los siguientes criterios:
 ● Si la reacción es negativa se pone 0.
● Si la reacción es positiva se pone: 1 si es el primer pocillo de un triplete, 2 si es el segundo, 4
si es el tercero.
NOTA: la suma de las pruebas positivas debe ir reportadas en el siguiente formato:

Figura xxx. Formato de resultado. Fuente: Laboratorio de microbiología Universidad Jorge Tadeo
Lozano.

PRUEBA RAPID ONE

- INTRODUCCIÓN
El sistema RapID ONE es un micro método cualitativo que utiliza sustratos convencionales y
cromogénicos para la identificación de microorganismos gramnegativos y oxidasa negativa. (Rapid
One, 2013)

El sistema RapID ONE está formado por: 1 panel con 18 pocillos ,2 reactivos (Rapid One y Rapid
spot Indole) y 1 tubo de inoculación con 2ml de solución salina. El tubo Nº2 de la escala de
mcfarland es necesario en esta prueba (no viene incluida en el sistema).
El Panel contiene las siguientes pruebas:

N.º de
Código de la prueba Descripción de los códigos
pocillo
1 URE Urea
2 ADH Arginina
3 ODC Ornitina
4 LDC Lisina
5 TET Tiol alifático
6 LIP Éster de ácido graso
7 KSF Aldehído de azúcar
8 SBL Sorbitol
ρ-nitrofenil-β, D-glucuronida
9 GUR

σ-nitrofenil-β, D-galactósido
10 ONPG

ρ-nitrofenil-β,D-glucósido
11 β GLU

ρ-nitrofenil-β,D-xilósido
12 β XYL

ρ-nitrofenil-n-acetil-β,D-
13 NAG glucosaminida 0
 14 MAL Manolato
Prolina-β-naftilamida
15 PRO

γ-glutamil-β-naftilamida
16 GGT

Pirrolidonil-β-naftilamida
17 PYR

18 ADON Adonitol
18 IND Triptófano
Tabla xxx. Descripción de cada prueba con su respectiva posición en el panel Rapid One. (Rapid
One, 2013).

PROCEDIMIENTO.

1. El microorganismos en estudio debe estar en un medio de cultivo puro, se debe hacer una
tinción de Gram y la prueba oxidasa antes de usar el sistema.
NOTA: El microorganismo usado para la preparación del inóculo debe tener preferentemente
de 18 a 24 horas.
Figura 4. Tinción de gram. Fuente: Laboratorio Figura 5. Prueba Oxidasa. Fuente: Laboratorio
de microbiología Universidad Jorge Tadeo de microbiología Universidad Jorge Tadeo
Lozano. Lozano

2. Con un asa redonda, suspender muestra del cultivo de la placa de agar en el líquido de
inoculación RapID (2 ml) para conseguir una turbidez visual igual a la del estándar de turbidez
Nº2 de McFarland o equivalente. (Se debe esperar 15 minutos antes de proceder al siguiente
paso) (Rapid One, 2013).

NOTA: Las suspensiones se deben mezclar en vortex en caso de que sea necesario.

Figura xxx. Muestra del microorganismo. Figura xxx. Inoculación de la muestra.

Fuente: Laboratorio de microbiología Fuente: Laboratorio de microbiología Universidad

Universidad Jorge Tadeo Lozano Jorge Tadeo Lozano

 Figura xxx. Formato de resultado.
Fuente: Laboratorio de microbiología

Universidad Jorge Tadeo Lozano

3. Abrir la pestaña “Peel to Inoculate” hacia la izquierda. Verter suavemente el contenido de todo
el tubo de inoculación en la esquina superior derecha del panel. Volver a sellar la pestaña
presionando para que vuelva a su posición original.

Figura xxx. Vertimiento del contenido del tubo

De inoculación. Fuente: Laboratorio de microbiología
Universidad Jorge Tadeo Lozano

4. Después de añadir la suspensión con el inóculo, y mientras se mantiene el panel sobre una
superficie nivelada incline el panel hacia el lado contrario a los pocillos de reacción,
aproximadamente en un ángulo de 45º.
Figura 10. Panel inclinado a 45°. Fuente: Laboratorio de microbiología Universidad Jorge Tadeo Lozano

5. Mientras se mantiene en posición horizontal nivelada, debe inclinarse lentamente el panel hacia
delante, hacia los pocillos de reacción, hasta que el inóculo fluya a lo largo de las de los pocillos de
reacción. De esta manera, todo el inóculo de la parte posterior del panel será evacuado.

NOTA: Examinar los pocillos de prueba. No deben presentar burbujas y deben estar uniformemente
llenos. Se aceptan ligeras irregularidades en el llenado de los pocillos de prueba. No afectarán a su
comportamiento. Si el panel está claramente mal llenado, se debe inocular un nuevo panel y
desecharse el erróneo.

Figura xxx. Inclinación del panel a 90°. Fuente: Laboratorio de microbiología Universidad
Jorge Tadeo Lozano
 6. Incubar los paneles inoculados a una temperatura de 35 a 37°C en una incubadora durante 4
horas.

Figura xxx. Incubación del panel. Fuente: Laboratorio de microbiología Universidad Jorge Tadeo Lozano

7. Luego de la incubación, abrir la pestaña inferior de derecha a izquierda para lo siguiente:

● Lectura o puntuación de la prueba ADON y a continuación, añadimos el reactivo Rapid Spot
Indole y se deja actuar máximo 2 minutos para el resultado de la prueba IND.
 Figura xxx. Reactivo Rapid Spot Indole. Fuente: Laboratorio de microbiología
Universidad Jorge Tadeo Lozano

● Añadir el reactivo Rapid One Reagent para las pruebas PRO, GGT y PYR, se deja actuar
máximo 2 minutos y se procede a hacer la lectura correspondiente.

Figura xxx. Reactivo Rapid One Reagent. Fuente: Laboratorio de

Microbiología Universidad Jorge Tadeo Lozano.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

1. La siguiente tabla (Rapid ONE color guide) nos muestra la coloración de los posibles
resultados positivos y negativos para cada prueba. A partir de esto, se hace la comparación
con los resultados obtenidos en la placa de Rapid One.
Figura xxx. Guía de comparación de resultados. Fuente: Laboratorio de microbiología Universidad
Jorge Tadeo Lozano.

2. Los resultados obtenidos serán consignados en la siguiente hoja de resultados:

Figura xxx. Hoja de resultados. Fuente: Laboratorio de microbiología Universidad Jorge Tadeo
Lozano.

NOTA: las pruebas positivas de cada cuadrante se suman para revelar un código de 7 dígitos.

REFERENCIAS BIBLIOGRÀFICAS

 bioMérieux Colombia. 2018. API. [online] disponible en:

<https://www.biomerieux.com.co/> [Acceso marzo 2020].
 Haramuniz, J., 2017. API 20E. 1era ed. [PDF] Javier Haramuniz. Disponible en:
<https://www.academia.edu/9550114/Galeria_API_20E> [Acceso en marzo 2020].
http://www.analisisavanzados.com/modules/mod_tecdata/R8311006%20RapID%20ONE
%20System%20OXOID.pdf
 2013. Rapid One. [pdf] análisis avanzados. Disponible en:
<http://www.analisisavanzados.com/modules/mod_tecdata/R8311006%20RapID%20ONE
%20System%20OXOID.pdf> [Accesos marzo 2020].