MICROBIOLOGÍA GENERAL

ANEXO

DE

MEDIOS

DE

CULTIVO

1
MICROBIOLOGÍA GENERAL 2

ÍNDICE:

AGAR C.L.D.E. ........................................................................................................................................ 3

AGAR E.M.B. ........................................................................................................................................... 4
AGAR MAC CONKEY ............................................................................................................................ 4
AGAR SALMONELLA - SHIGELLA ........................................................................................................ 5
AGAR BAIRD PARKER ......................................................................................................................... 6
AGAR SANGRE ...................................................................................................................................... 7
AGAR SANGRE AZIDA ......................................................................................................................... 8
AGAR MÜELLER HINTON ................................................................................................................... 8
CALDOS DE ENRIQUECIMIENTO .......................................................................................................... 9
AGUA DE PEPTONA .............................................................................................................................. 9
AGUA DE PEPTONA ALCALINA (Caldo de enriquecimiento) ........................................................... 9
CALDO SELENITO ................................................................................................................................. 9
CALDO CISTINA - SELENITO ............................................................................................................ 10
CALDO BASE CON TETRATIONATO (Müeller Kauffman) ............................................................. 10
CALDO MAC CONKEY ....................................................................................................................... 11
AGAR PARA RECUENTO EN PLACA ............................................... ¡Error! Marcador no definido.

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MICROBIOLOGÍA GENERAL

AGAR C.L.D.E.

a.Utilidad:
Este medio da buen desarrollo e. Descripción de las colonias:
de todos los patógenos urinarios y
permite la detección de contaminantes - Colonias amarillas: Fermentadoras
como difteroides, lactobacillus y de lactosa.
Micrococcus, que indican un dato de - Colonias azules o celestes: no
gran valor en lo referente al modo de fermentadoras de lactosa.
obtención de la muestra. Escherichia coli: Colonias
amarillas, opacas con una ligera
b.Fórmula: profundidad en el centro, de alrededor
de 1 a 2 mm. de diámetro,
Peptona. 4g fermentadoras de lactosa.
Extracto de carne. 3 g Klebsiella sp: Colonias
l-Cistina..0,128 g extremadamente mucoides, variando
Tripteina 4 g de un color amarillo hasta un azul
Azul de Br Timol.. 0,02 g blanquecino.
Lactosa. 10,0 g Proteus sp: Colonias
Agar. 15,0 g traslúcidas, usualmente más pequeñas
Agua destilada c.s.p.... 1000 ml que las de Escherichia coli.
pH:. 7,3 Salmonella sp: Colonias chatas
azul verdoso.
Pseudomonas aeruginosa:
c. Principio: Colonias verdes con superficie mate,
El déficit de electrolitos tiene por filamentosa en la periferia.
objeto lograr la obtención de colonias Estreptococcus faecalis:
bien aisladas del género Proteus, ya Colonias amarillas de
que impide el deslizamiento de estos aproximadamente 0,5 mm. de
organismos. diámetro.
La lactosa del medio, permite Staphylococcus aureus:
detectar los Coliformes contaminantes Colonias amarillas profundas de
en orina, que fermentan la lactosa, los aproximadamente 0,75 mm. de
que se reconocen fácilmente por el diámetro, coloreadas uniformemente.
cambio de color del medio, que vira a Staphylococcus coagulasa
amarillo. negativo (epidermidis): Colonias
En materia fecal puede amarillo pálido o blancas, más opacas
reemplazar al agar lactosa púrpura de que las de Estreptococcus faecalis, a
bromo cresol aislamiento de bacterias veces con palidez en la periferia.
Gram negativas, en especial del género Corynebacterium sp: Colonias
Proteus. grises muy pequeñas.

d. Características: f. Control de calidad:

Color: verde. Escherichia coli:

Distribución: en placas.
Siembra: para aislación por estrías.
Incubación: 24/48 hs a 37ºC en
atmósfera normal.
Usos: detección de infecciones
urinarias.
Fermentación de lactosa.
Proteus mirabilis o vulgaris:
Inhibición del Spreading y no
fermenta lactosa.

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MICROBIOLOGÍA GENERAL 4

AGAR E.M.B.
para obtener un máximo de
(El agar E.M.B. según Levine no diferenciación y un mínimo de
contiene sacarosa). toxicidad.
Cándida albicans desarrolla
a. Utilidad: colonias plumosas o en forma de
Este medio es un medio telarañas en 24 a 48 hs. de incubación
diferencial recomendado para la en atmósfera de CO2.
detección y aislamiento de bacterias
patógenas intestinales gramnegativas. d. Características:

b. Composición: Color: violáceo.

Distribución: en placas.
Peptona de caseína 10 g Siembra: por estría (para aislación).
Lactosa. 5g Incubación: 24 a 48 hs a 37 ºC y
Sacarosa.. 5 g atmósfera normal.
Fosfato de potasio. 2 g Usos: aislación de Enterobacterias.
Eosina.. 0,4 g
Azul de metileno 0,065 g e. Descripción de las colonias:
Agar Agar. 1,5 g
Agua destilada c.s.p. 1000 ml Escherichia coli: Colonias de 2 a
pH:. 7,1 +/- 0,1 3 mm. de diámetro, con brillo metálico
verdoso en luz reflejada, y centro
c. Principio: oscuro hasta negro en luz refractada.
La incorporación de sacarosa
aumenta la diferenciación de Enterobacter aerógenes:
patógenos (Salmonella y Shigella: Colonias de 4 a 6 mm. de diámetro,
sacarosa negativos) de la flora con centro pardo grisáceo en luz
acompañante (Proteus vulgaris, refractada; sin brillo metálico.
Citrobacter, Aeromona hidrófila-lactosa
negativos, sacarosa positivos). Otros Salmonella y Shigella: colonias
integrantes de la familia Proteus no transparentes, ambarinas.
fermentan sacarosa o lo hacen
tardíamente. Staphylococcus coagulasa
Los colorantes que contiene positivos: Colonias como "punta de
este medio inhiben a la flora gram alfiler", incoloras.
positiva. Algunas cepas de
Staphylococcus aureus pueden crecer Cándida albicans: Colonias en
en forma de colonias puntuales forma de telaraña o de pluma.
incoloras características. Estos
colorantes actúan como indicador f. Control de calidad:
dando una buena diferenciación de las
bacterias lactosa positivas de las Escherichia coli:
negativas, las primeras, son negras o Fermentan la lactosa
poseen centros oscuros con periferia Salmonella y Shigella:No
transparentes incoloras. La proporción fermentan la lactosa
de ambos colorantes ha sido calculada

AGAR MAC CONKEY

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MICROBIOLOGÍA GENERAL

a. Utilidad: fermentadores de lactosa son color

Medio diferencial que se rojas rodeadas de una zona de bilis
recomienda para detección y precipitada. Los no fermentadores
aislamiento de todo tipo de bacterias de forman colonias incoloras y los
disenteria, tifus y paratifus, en muestras débilmente fermentadores forman
de materia fecal, orina, etc. colonias ligeramente rosadas en 24 a
48 hs.
b. Fórmula:
d. Características:
Peptona.. 17 g
Proteosa peptona.. 3 g Color: rojizo.
Lactosa. 10 g Distribución: en placas.
Sales Biliares. 1,5 g Siembra: por estrías.
Cloruro de Sodio 5g Incubación: 24-48 hs. a 37ºC.
Agar Agar.. 13,5 g Uso: detección de Gram negativos.
Rojo neutro.. 0,03 g
Cristal Violeta 0,001 g e. Descripción de colonias:
Agua destilada c.s.p.. 1000 ml
pH:. 7,1 Salmonella, Shigella: incoloras,
transparentes.
Preparación: Escherichia coli: grandes, rojas,
Rehidratar 50 g de medio en halo turbio.
1.000 ml. de agua destilada fría, Enterobacter, Klebsiella:
calentar hasta ebullición para grandes, rosadas, mucosas.
disolución completa. Distribuir en Enterococcus, Staphylococcus:
frascos y esterilizar en autoclave. diminutas, de crecimiento aislado,
opacas.
c. Principio:
Las sales biliares y el violeta f. Control de calidad:
cristal inhiben la flora gram positiva. La
lactosa, junto con el indicador de pH, Escherichia coli:
sirven para la comprobación de la Fermentadora de lactosa.
degradación de dicho azúcar. Las Salmonella y Shigella: No
colonias de microorganismos fermentadora de lactosa.

AGAR SALMONELLA - SHIGELLA

a. Utilidad: Rojo neutro...0,025 g

Es un medio selectivo que se Tiosulfato.....0,8 g
recomienda para el aislamiento de Agua destilada c.s.p.. 1000 ml
Salmonellas y Shigellas en materia pH:...7
fecal y otros materiales.
Preparación:
b. Fórmula: Agregar 63 g de medio
deshidratado a 1 litro de agua
Extracto de carne.....5 g destilada, remojar 15 min., hervir 3
Peptona 5g minutos, dejar enfriar a 50ºC y
Lactosa. 10 g distribuir. NO SE AUTOCLAVA.
Mezcla de sales biliares.. 8,5 g
Citrato de sodio... 10 g c. Principio:
Citrato de hierro. 13 g Debido a la concentración de
Agar... 13,5 g lactosa que tiene, se obtiene una
Verde brillante. 0,33 g buena diferenciación entre los

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MICROBIOLOGÍA GENERAL
organismos Coliformes que fermentan
la lactosa de los que no lo hacen.
Se observa a las 18-24 horas en
busca de colonias transparentes e
incoloras de las bacterias
fermentadoras de lactosa.
Las fermentadoras de lactosa
no inhibidas presentan colonias color
rojo o rosado debido al indicador rojo
neutro.
El Verde brillante, la bilis de
buey y la elevada concentración de
tiosulfato y de citrato inhiben a la flora
acompañante. Con el tiosulfato e iones
hierro se pone de manifiesto la
formación de sulfuro por
ennegrecimiento de
correspondientes colonias.
A las 48 hs. de incubación a
37ºC se hace una nueva observación
en busca de las productoras de
sulfhídrico.
d. Características:
Color: amarillo rojizo.
Distribución: en placas.
Siembra: por estrías (aislamiento).
Incubación: 24 y 48 horas a 37ºC.
AGAR BAIRD PARKER
a. Utilidad:
Es un agar selectivo
recomendado por el aislamiento y
diferenciación de estafilococos en
alimentos y materiales farmacéuticos.
b. Composición:
Peptona de caseína..10 g
Extracto de carne...5 g
Extracto de levadura... 1 g
Piruvato de sodio...10 g
Glicina...12 g
Cloruro de lítico...5 g
Agar-Agar... 15 g
Agua destilada c.s.p. 1000 ml
Aditivos:
Emulsión de yema de huevo.. 50 ml
Telurito de K. 0,105 g
6
6
Usos: detección de Salmonellas y
Shigellas.
e. Descripción de las colonias:
no
Shigellas y Salmonellas:
Colonias incoloras, transparentes, las
Salmonellas productoras de SH2, dan
colonias transparentes con centro
negro.
Proteus: Colonias transparentes
con centro negro.
Escherichia coli: Colonias
el rosadas hasta rojas.
las
Enterobacter aerógenes:
Colonias mayores que las Escherichia
coli color cremoso blanquecinas,
opacas, mucosas.
f. Control de calidad:
Escherichia coli:
Inhibición del crecimiento.
Salmonella typhimurium:
Desarrollo y producción de SH2.
Sulfametacina. .0,05 g
c. Principio:
El cloruro de lítico y el telurito
activan inhibiendo la flora
acompañante, mientras que el piruvato
favorece selectivamente el desarrollo
de estafilococos. Las colonias de
Staphylococcus toman una coloración
negra debido a la reducción de telurito
a teluro y se producen halos alrededor
de las mismas, debido a la lipolisis y
meteólisis.
d. Características:
Preparación: Disolver 58 g/l,
esterilizar en autoclave, enfriar a 50-
45ºC y añadir 50 ml/l de yema de
huevo, 3 ml/l de solución al 3,5% de
MICROBIOLOGÍA GENERAL

telurito de K y eventualmente 50 mg/l

de sulfametacina, se vierte en placas. Staphylococcus epidermidis:
Colonias negras, forma irregular.
Siembra: Por diseminación en Después de 24 hs., presencia de zonas
superficie. opacas alrededor de las colonias.

Incubación: 24 a 48 hs. a 37ºC. Micrococcus: Crecimiento

ocasional muy pequeñas, pardas o
e. Interpretación: negras, ausencia de halos claros.

Staphylococcus aureus: Bacillus: Colonias pardo -

Colonias negras, convexas, 1 a 5 mm oscuras, opacas, con halos claros.
de diámetro, borde estrecho
blanquecino, rodeadas por un halo Levadura: Colonias blancas, sin
claro de 2 a 5 mm. Dentro del halo halos claros.
presencia de anillos opacos no visibles
antes de 48 hs.

AGAR SANGRE

a. Utilidad: coloración verdosa. Neumococcus y

Diferenciación de
EEstreptococcus según su hemólisis y
de Estafilococcus según coloración (no
totalmente característico).
b. Preparación:
1. Fundir el medio base y dejarlo
enfriar a 45ºC.
2. Agregar asépticamente 5% de
sangre desfibrinada estéril.
3. Homogeneizar con movimiento de
rotación, evitando la formación de
espuma.
c. Características:
Fraccionamiento: En placas.
Siembra: Por estrías.
Incubación: A 37ºC durante 24 hs.
Estreptococcus alfa hemolítico.
Beta: La colonia presenta,
alrededor una zona clara que indica la
lisis completa de los eritrocitos. La
propiedad hemolítica se debe a la
acción de dos hemolisinas. La
estreptolisina O, es antigénica y
oxígeno lábil, la estreptolisina S, no es
antigénica pero es oxígeno estable.
Gamma: No existe hemólisis
aparente ni coloración.
Colonias medianas:
Staphylococcus aureus
(patógeno): Presenta coloración
amarilla, generalmente de consistencia
mantecosa y de hemólisis variable.

d. Descripción de colonias: Según Staphylococcus epidermidis (no

hemólisis y tamaño. patógeno): Con coloración blanca y
traslúcida.
Colonias puntuales:
Colonias grandes:
Alfa: La colonia esta rodeada
por una zona de eritrocitos Micrococcus: muy pigmentadas
parcialmente lisados (la hemoglobina y distintos colores.
pasa a metahemoglobina),
generalmente acompañada por una
e. Comentarios:

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MICROBIOLOGÍA GENERAL 8

El agar base debe ser libre de En hisopados de garganta se

dextrosa, ya que el ácido producido por recomienda el uso de sangre de
su fermentación inactiva la carnero, por su acción inhibitoria del
estreptolisina, impidiendo ver todas las crecimiento de Haemophilus
hemólisis. haemolyticus, comensal muy común en
este sector.
Preferentemente se debe usar
sangre de conejo o caballo por poseer Se debe tener especial cuidado
menor cantidad de inhibidores; con la temperatura a la cual se le
mientras que la humana contiene más agrega sangre al medio base, debido a
cantidad de anticuerpos y otros que a mayor temperatura se formaría
factores como sustancias AGAR CHOCOLATE, medio que se
antibacterianas, antibióticos o exceso utiliza para el crecimiento de Neisseria
de ion citrato. gonorrhoae y Haemophylus influenzae.

AGAR SANGRE AZIDA

a. Utilidad: c. Principio:
Para el crecimiento de bacterias La ázida actúa como inhibidor
Gram positivas. de Gram negativos.

b. Preparación: d. Características:
Agregar 2 ml. de una solución
de Azida sódica al 1% cada 100 ml. del Siembra: Por estrías.
medio agar sangre. Incubación: A 37ºC durante 24 hs.

AGAR MÜELLER HINTON

a. Utilidad: sulfonamidas), permite medir la

Para ensayo de sensibilidad o sensibilidad a la misma.
resistencia de agentes patógenos La presencia de Almidón evita el
frente a antibióticos y sulfonamidas. pasaje de las cepas a forma rugosa.
Como medio base.
d. Características:
b. Fórmula:
Esterilización: En autoclave 15 min. a
Infusión de carne 5,0 g 121ºC.
Caseina hidrolizada 17,5 g Fraccionamiento: En placas o en
Almidón.... 1,5 g tubos (En pico de flauta).
Agar.... 15,0 g Siembra: Por estrías y en forma
Agua destilada c.s.p..... 1000 ml masiva cuando es para ensayos de
pH 7,4 sensibilidad y resistencia.
c. Principios: Incubación: A 37ºC durante 24 hs.
La composición garantiza
condiciones favorables de crecimiento e. Comentarios:
para m.o. y ser de ácido p-amino Para cualquiera de los dos tipos
benzoico (antagónico de las de fraccionamiento no se debe refundir
más de una vez el medio.

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MICROBIOLOGÍA GENERAL

CALDOS DE ENRIQUECIMIENTO

AGUA DE PEPTONA

a. Utilidad: Peptona... 1 g
Sirve como diluyente y también Agua destilada.. 1000 ml
es utilizado para preenriquecimiento. pH. 7

b. Fórmula: Esterilizar en autoclave a 121ºC

durante 15 minutos.

AGUA DE PEPTONA ALCALINA (Caldo de enriquecimiento)

Peptona. 10 g
a. Utilidad: Cloruro de sodio. 10 g
Permite el desarrollo de vibrios e Agua destilada c.s.p 1000 ml
inhibe el desarrollo de flora pH:. 8,6 a 9,0
acompañante.
c. Características:
b. Fórmula:
Esterilización: 15 minutos a 121ºC.

CALDO SELENITO
a. Utilidad: Las especies de Proteus y
Para enriquecimiento de Escherichia no se inhiben
Salmonellas a partir de materia fecal, indefinidamente, con el selenito de
orina, etc. sodio, cuando se sospechase que la
cantidad de estos microorganismos es
b. Fórmula: grande conviene hacer los sub-cultivos
en E.M.B. y con 6 a 18 hs. de
Selenito ácido de sodio (anhidro).. 4 g incubación.
Fosfato monosódico. 10 g El efecto inhibidor del caldo
Fosfato disódico. 10 g selenito no se produce si están
Peptona. 5g presentes gran cantidad de deshechos,
Lactosa... 4g por lo que la mejor técnica a seguir es:
Agua destilada c.s.p 1000 ml disolver 2 a 4 gr. de materia fecal en
pH. 7 solución fisiológica estéril, dejar
Preparación: sedimentar y agregar al caldo selenito
Suspender 33 gramos en un 1 a 2 ml. del sobrenadante.
litro de agua destilada, calentar hasta La incubación del caldo selenito
disolver y esterilizar a baño María 10 a 43ºC produce una mayor
minutos. NO SE ESTERILIZA EN recuperación de Salmonella parathypi
AUTOCLAVE. B.Para aislamiento de Salmonellas en
c. Principio: orina, el caldo se debe preparar en
El medio así preparado es color concentración doble y agregar igual
paja, (pero si se sobrecalienta se forma cantidad de orina.
un sedimento de color rojo ladrillo, de
selenio precipitado) a partir de este d. Control de calidad:
medio se deben efectuar subcultivos en
E.M.B., en SS y W.B. (bismuto sulfito Salmonella sp. ,Shigella sp.
agar). Escherichia coli.

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MICROBIOLOGÍA GENERAL 10

CALDO CISTINA - SELENITO

Utilidad:
Para enriquecimiento de c. Principio:
Salmonellas a partir de heces, El selenito inhibe el
alimentos y otros materiales. crecimiento de bacterias Coliformes y
Enterococcus en las primeras 6-12
b. Fórmula: horas que siguen al inicio de la
incubación.
Peptona de caseina..5 g
L (-) Cistina.. 0,01 g d. Características:
Lactosa.. 4 g
Fosfato disódico... 2 g Incubación: Hasta 24 hs. a 37ºC o a
Selenito ácido de sodio 4g 43ºC.
Agua destilada c.s.p. 1000 ml
pH:. 7 Al cabo de 6-12 hs. (y eventualmente al
cabo de 18-24 hs.) se siembra en
Preparación: medios de cultivos selectivos.

Disolver 23 g en un litro e. Control de calidad:

(calentando a 60ºC, como máximo),
esterilizar por filtración y distribuir en Salmonella sp. Shigella sp.
tubos. NO ESTERILIZAR AL Escherichia coli
AUTOCLAVE.

CALDO BASE CON TETRATIONATO (Müeller Kauffman)

a. Utilidad: e. Instrucciones:
Este medio es muy útil para Fraccionar en tubos a razón de
enriquecimiento de materiales 10 ml. Calentar hasta ebullición en
sospechosos de contener bacilos del baño María a vapor fluente. Enfriar a
género Salmonella. 45ºC y agregar a cada tubo 0,2 ml de
Al cabo de dicho tiempo se solución iodo iodurada y 0,2 ml de
repica en estría en placas con agar SS solución verde brillante.
para buscar la presencia de El medio sin solución iodo
Salmonellas. iodurada puede conservarse, no así al
que se ha agregado dicha solución, ya
b. Fórmula: que una vez agregada la misma debe
Proteosa peptona.. 5 g ser utilizado dentro de las 24 hs. de su
Sales biliares.. 1g preparación y tampoco puede ser
Carbonato de calcio 10 g calentado posteriormente.
Tiosulfato de sodio... 30 g
Agua destilada c.s.p... 100 ml f. Principio:
Las sales biliares estimulan el
c. Solución iodo iodurada: crecimiento de bacterias intestinales. El
Iodo.....20 g verde brillante inhibe la flora
IK......25 g acompañante gram positiva.
Agua destilada....100 ml
g. Control de calidad:
d. Solución verde brillante:
Verde brillante.....1 g Salmonella sp. Shigella sp.
Agua destilada....100 ml Escherichia coli.

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MICROBIOLOGÍA GENERAL
CALDO MAC CONKEY
a. Utilidad:
Medio selectivo para ensayo
previo orientativo de E.coli 5 gérmenes
Coliformes, y para determinación del
titulo de Coliformes totales y/o fecales
en leche y agua.
b. Fórmula: (g/litro)
Peptona de caseína .20 g
Lactosa. 10 g
Bilis de buey, desecada. 5 g
Purpura de bromocresol. 0,01 g
Agua destilada c.s.p... 1000 ml
pH: .7,1 + 0,1
Preparación:
Disolver 35 gr./lt., distribuir en
tubos con campanitas Durham y
esterilizar al autoclave.
c. Característica:
Color: Púrpura.
Distribución: 10 ml por tubo.
Siembra: 1 ml del material a
ensayar. Si fuera necesario utilizar
volúmenes mayores de la muestra.
Incubación: 48 hs. a 37ºC.
d. Principio:
Este caldo contiene lactosa,
cuya degradación con formación de
ácido y formación de gas, señalan la
presencia de E.coli. El gas que se
produce se recoge en las campanitas
de Durham y el ácido se comprueba
por viraje del indicador al color amarillo.
La bilis de buey favorece el crecimiento
de bacterias intestinales.
e. Interpretación:
Producción de gas ácido: Sospecha
de presencia de E.coli.
Producción de ácido: Sospecha
de presencia de Coliformes sin
solamente
existencia
de E.coli.
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