Los métodos para la cuantificación de proteínas se basan en:

 Propiedad intrínseca de las proteínas para absorber luz en el UV

 Para la formación de derivados químicos
 Capacidad de proteínas de unir ciertos colorantes

Las proteínas muestran un fuerte grado de absorción a 280 nm en UV debido a los residuos de
triptófano y la tirosina de las proteínas (por presencia en sus anillos de grupos funcionales
organicos) (método de absorción en uv)

Adicion de un colorante anionico (acido sulfonico , naranja acido 12, naranja G, negro amido 10B)
su principio es unir un aminoácido básico como histidina su grupo imidazol, guanidina de arginina
etc.

¿En que se basa el método de Bradford?

Unión de un colorante Azul brillante comassie G-250 a las proteínas.
Este colorante existe en una solución ácida en dos formas (azul y otra naranja). Las proteínas se
unen a la forma azul y formar un complejo proteína-colorante con un coeficiente de extinción
mayor al del colorante libre. Sensible para proteínas con residuos (arg, trp, tyr , his y Phe.)
Método sensible (1-15 microgramos de proteína), las únicas sustancias que puede interferir son
detergentes y soluciones básicas.

El cambio en la absorbancia a 595 nm es proporcional a la concentración de la proteína en la

muestra. Y se monitorea midiendo el incremento de absorbancia.

Principio: El color rojo pasa a azul cuando se une a la proteína. La formación del complejo
colorante proteína toma aproximadamente 2 minutos y permanece estable por 1 hora, este
complejo tiene un alto coeficiente de extincion molar lo que hace al ensayo mucho mas sensible.

Coeficiente de extinción molar mide que tanto una substancia absorbe la radiación a una
longitud de onda determinada. El valor de la absortividad varia con la longitud de onda y depende
de la estructura.
El coeficiente de extinción para albumina
bovina es de 43 824 M-1 cm-1
Ventajas
Rápido
Sensible mas que el lowry
No existen interferencias de cationes como K,
Na y Mg
No interfiere sulfato de amonio , polifenoles ni
carbohidratos como sacarosa
Mide proteínas y péptidos con masa moléculas
de 4000 dalton

Desventajas
El complejo proteína colorante puede unirse a
celdas de cuarzo
Color varia con distintos tipos de proteínas
Interferencia de detergentes

Utiliza como proteína seroalbumina bovina

El blanco contiene Bradford mas agua