PRÁCTICA DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA AGRÍCOLA

AISLAMIENTO DE Rhizobium sp A PARTIR DE NÓDULOS

Profesora Alba Ricardo Páez

INTRODUCCIÓN
Algunas bacterias, puede convertir nitrógeno atmosférico en amonio. La mayoría de estos
procariotas fijadores de nitrógeno, viven de manera libre en el suelo. Unos pocos forman
asociaciones simbióticas con las plantas superiores en las que las células procariotas
proveen directamente a la planta huésped de nitrógeno a cambio de otros nutrientes y
carbohidratos. Esta simbiosis ocurre en nódulos que se forman en las raíces de las plantas y
contienen a las bacterias fijadoras de nitrógeno.
El tipo más común de simbiosis se produce entre miembros de plantas de la familia
Leguminosae y las bacterias del suelo de la Azorhizobium géneros Bradyrhizobium,
Photorhizobium, Rhizobium y Sinorhizobium (colectivamente llamado rhizobios).

Nódulos producidos por Rhizobium japonicum

Esta asociación mutualista es altamente específica, de tal manera que cada especie de cepa
de rhizobio interactúa con sólo un grupo específico de legumbres, y viceversa. La
especificidad de la simbiosis puede ser producida en múltiples fases de la interacción, que
van desde la fijación inicial y la infección bacteriana a desarrollo de un nódulo tardío
asociado con la fijación de nitrógeno. El control genético de la especificidad de la simbiosis
es complejo, ya que implica el afinamiento de señales de comunicación entre los socios
simbióticos.
Este proceso biológico juega un papel crítico en la agricultura sostenible, ya que reduce la
necesidad de fertilizantes de nitrógeno, al tiempo que proporciona un eficiente modo de
producción de alimentos ricos en proteínas.
En esta práctica de laboratorio se realizará el aislamiento de Rhizobium a partir de nódulos
formados en plantas de alfalfa y/o plantas leguminosas.

AISLAMIENTO DE Rhizobium A PARTIR DE NÓDULOS

1. Lavar al grifo la raíz

2. Seleccionar los nódulos grandes y rosados
3. Desinfectar la superficie de los nódulos con lavados sucesivos de soluciones de
Hipoclorito de sodio al 3%, 2% y 1%. Cada lavado de dos minutos.
4. Lavar cinco veces con agua destilada estéril entre cada lavado con las soluciones de
Hipoclorito.
5. Presionar los nódulos al colocarlos entre dos portaobjetos estériles.
6. Sembrar con un asa redonda (tomando lo extraído de los portaobjetos) sobre placas con
YMA.
7. Incubar las placas por dos 2-3 días en anaerobiosis a 300C.

MEDIO DE CULTIVO YMA

K2HPO4 0,5 g
MgSO4 x 7 H2O 0,2 g
NaCl 0,1 g
Manitol 10 g
Extracto de levadura 0,5 g
H2O destilada c.s.p. 1L
Agar 20 g

BIBLIOGRAFÍA

Wang y col. (2012). Symbiosis specificity in the legume –rhizobial mutualism. Cellular
Microbiology. 14 (3), 334–342.

Zahran Hamdi (1999). Rhizobium-Legume Symbiosis and Nitrogen Fixation under Severe
Conditions and in an Arid Climate. Microbiology and Molecular Biology Reviews, Vol. 63,
No. 4, p. 968–989.